胞内分枝杆菌HSP65基因克隆、分析及其原核表达的研究

目的克隆胞内分枝杆菌HSP 65基因,对其进行生物信息学分析与原核表达。方法应用巢式PCR克隆胞内分枝杆菌HSP 65基因,利用在线分析软件对其进行生物信息学分析。构建原核表达载体p ET 15b-HSP 65并进行诱导表达。结果胞内分枝杆菌HSP 65基因完整ORF基因全长1 626 bp,编码541个氨基酸。HSP 65蛋白为酸性、亲水性蛋白质,亚细胞定位主要存在于细胞质,蛋白二级结构以α-螺旋、无规则卷曲及β-折叠为主。使用同源建模法预测了HSP 65基因编码蛋白三维立体结构。试验构建p ET 15b-HSP 65原核表达载体并成功表达。结论成功克隆胞内分枝杆菌HSP 65基因,并对HSP 65蛋白进行了生物信息学分析及原核表达。     

口蹄疫病毒(FMDV)O型与Asial型联合RT-PCR检测方法的建立

[目的]建立针对O型与Asial型FMDV的二联RT-PCR检测方法. [方法]在大量比较国内外口蹄疫病毒(FMDV)流行毒株序列的基础上自行设计了检测O型与Asial型FMDV二联PCR引物. [结果]本试验确定了单项RT-PCR反应条件范围,在此基础上建立、优化了二联RT-PCR反应体系和反应条件,建立了有效、特异、敏感的检测O型FMDV与Asial型FMDV的二联RT-PCR方法.[结论]本试验为口蹄疫的诊断、防制、流行病学调查及疫苗的使用奠定了基础.     

土槿皮乙酸微乳的制备及体外经皮渗透性研究

目的 制备O/W型土槿皮乙酸（PAB）微乳,并进行体外经皮渗透性能研究。方法 通过绘制伪三元相图确定PAB微乳形成的区域,以微乳的体外经皮渗透速率为指标进一步优化筛选PAB微乳的处方,并对微乳的外观、形态、粒径分布等进行表征;以大鼠皮肤为渗透屏障,利用V-C扩散池比较了PAB微乳和PAB过饱和水溶液的体外经皮累积渗透量及皮肤滞留量。结果 优选的PAB微乳处方为IPM-Cremophor EL-Transcutol P-水（0.2∶0.97∶1.83∶7）,所制备的微乳澄清透明,透射电镜（TEM）观察结果为均匀的球形或近球形,平均粒径为（18.7±1.9）nm。PAB微乳与PAB过饱和水溶液24 h累积渗透量分别为（50.31±4.63）、（6.27±1.33）μg/cm²,皮肤滞留量分别为（6.28±0.31）、（0.51±0.13）μg/cm²,差异均具有显著性（P＜0.05）。结论 PAB微乳新型给药系统可有效促进PAB的经皮渗透及提高其皮肤滞留量,为PAB皮肤给药抗真菌新制剂的设计提供了实验基础。     

大肠癌早期筛查的研究进展

大肠癌(colorectal canccer,CRC)是常见的消化系统疾病,是指大肠黏膜上皮的恶性病变,是结肠癌和直肠癌的总称,也称为结直肠癌.CRC从良性腺瘤到恶性腺癌是一个漫长的逐步发展过程,如果及早发现,90 ％的死亡是可以预防的.然而,CRC 早期无症状,不易发现.因此,CRC 筛查是一项公共卫生优先事项[1].     

蒙古口蘑多糖的提取及体外抗肿瘤活性研究

[目的]优化蒙古口蘑多糖的提取条件,探讨蒙古口蘑多糖对人宫颈癌细胞、肝癌细胞的增殖抑制作用.[方法]采用正交实验对蒙古口蘑多糖的提取条件进行优化,采用MTT比色法测定及免疫荧光技术对蒙古口蘑多糖体外抗肿瘤活性进行研究.[结果]本实验成功提取了蒙古口蘑多糖,实验结果显示蒙古口蘑多糖对人宫颈癌细胞、肝癌细胞均具有一定的抑制作用.[结论]本实验为真菌多糖的提取及抗肿瘤活性研究奠定了基础.     

口蹄疫病毒（FMDV）O型与Asia1型联合RT-PCR检测方法的建立

[目的]建立针对O型与Asial型FMDV的二联RT-PCR检测方法。[方法]在大量比较国内外口蹄疫病毒（FMDV）流行毒株序列的基础上自行设计了检测O型与Asia1型FMDV二联PCR引物。[结果]本试验确定了单项RT-PCR反应条件范围,在此基础上建立、优化了二联RT-PCR反应体系和反应条件,建立了有效、特异、敏感的检测O型FMDV与Asia1型FMDV的二联RT-PCR方法。[结论]本试验为口蹄疫的诊断、防制、流行病学调查及疫苗的使用奠定了基础。     

吉林地区家畜中NTM的鉴定及流行分析

目的了解吉林省周边家畜中NTM感染情况,为有针对性的防治NTM提供数据支持和理论依据。方法对来自吉林周边1 050份结核菌素阴性猪、牛组织样品进行细菌分离及16S rRNA基因序列分析、鉴定。结果试验分离NTM菌21株,NTM总分离率为2.0%,猪、牛体内NTM分离率分别为1.8%和2.2%。除6株未最后定型外,其他菌株均分型鉴定成功,其中,浅黄分枝杆菌3株;母牛分枝杆菌1株;新金色分枝杆菌5株;偶发分枝杆菌3株;胞内分枝杆菌3株。结论吉林省家畜中NTM流行情况不容小视,其毒力对人、畜的影响应进一步研究,以便采取有效防制措施,保护人类及畜群健康。     

胞内分枝杆菌ELISA检测方法的建立及初步应用

目的 建立胞内分枝杆菌双抗夹心ELISA检测胞内分枝杆菌生物学新方法。方法 以自主制备的胞内分枝杆菌HBHA单克隆抗体为包被抗体,建立胞内分枝杆菌ELISA检测方法。应用棋盘法优化检测条件,同时试验对封闭液进行了最佳选择,对检测样品的特异性、敏感性和准确度进行评估。结果 确定抗体包被最佳浓度为4μg/ml,抗鼠血清最佳稀释浓度为1:400,同时选择P/N值为3.38的1% BSA作为最佳封闭剂。双抗夹心法对新金分枝杆菌、耻垢分枝杆菌、浅黄分枝杆菌和卡介苗等抗原检测的P/N值均小于2.1,无交叉反应。当菌体浓度为200个/ml时,检测结果仍为阳性,应用该方法检测60份样品中,呈现阳性的菌株为56份,检测准确度高达93.3%。结论 本方法可作为胞内分枝杆菌快速检测和流行病学调查的工具,同时对畜牧业的健康发展提供一种新的技术保障。     

口蹄疫病毒O型PanAsia毒株的分离鉴定

[目的]对口蹄疫疑似组织病料进行分离鉴定.[方法]采用乳鼠接种、反向间接血凝试验、RT-PCR及测序技术对口蹄疫疑似组织病料进行分离鉴定.[结果]结果显示口蹄疫疑似组织病料为O型PanAsia毒株.[结论]该试验为口蹄疫的诊断、防制、流行病学调查及疫苗的研究使用奠定了基础.     

紫蘑菇多糖组分分析及结构初步鉴定

[目的]对紫蘑菇多糖组分及结构进行初步分析鉴定. [方法]采用薄层层析法分析紫蘑菇多糖的组成,采用红外光谱分析、核磁共振分析技术对多糖进行结构鉴定. [结果]硅胶薄层层析显示:COP由木糖组成;红外光谱分析显示:COP含有α型和β型吡喃糖;核磁共振分析显示:COP的主链为1-6糖苷键,存在1-4糖苷键的支链.[结论]本实验为紫蘑菇多糖的应用及相关研究奠定了基础.