高转移小鼠肺癌株细胞导入人基因组DNA后的转移表型抑制

目的 探讨从正常人细胞基因组ＤＮＡ中寻找、分离并鉴定肿瘤转移抑制基因或相应ＤＮＡ序列的新途径。方法 采用体内转移灶体外再培养再硬琼脂集落克隆化筛选，获体内９０％以上高转移率小鼠肺腺癌ＬＭ２细胞株；使用磷酸钙共沉淀ＤＮＡ转染技术，将正常细胞人基因组ＤＮＡ随机片段，导入高转移小鼠肺癌细胞株ＬＭ２后，使用有限稀释法克隆化其中形态扁平的回复突变株。为证实细胞确实含有外源人ＤＮＡ序列，设计人特异性Ａｌｕ引物     

过滤染色法检查精子浓度的方法学研究

目的:开发一种快速精子浓度检测方法,并评价其可行性。方法:根据精子可被亚甲兰溶液染成蓝色,其颜色深浅与精子数量呈正相关原理,以经显微镜计数确认浓度的精子(2000万个/ml)为标准样本,加入亚甲蓝溶液染色,过滤,根据结果颜色,应用现代印刷技术制备出标准色标。以颜色深浅检验标本中精子浓度,对方法中涉及的过滤膜、染色液、染色时间、标准色标等关键参数进行确认,评价试剂盒检测结果。结果:通过对3000份成年男性精液样品检测结果表明,该试剂盒方法的灵敏度、特异性和准确性均在95%以上。结论:本方法所制试剂盒能够实现快速自检,适合医院检查前初步诊断,时间短,操作简单。     

c—myc基因特异核酶的设计及其对靶mRNA的切割

目的：针对ｃ－ｍｙｃ基因第二外显子部分序列设计核酶，探讨生理温度下核酶的切割活性，方法：计算机模拟分析ｃ－ｍｙｃ基因第二外显子部分二级结构，选择核酶切位点，设计核酶，分别构建ｃ－ｍｙｃ基因第二外显子部分序列和核酶体外转录载体并经双脱氧末端终止法测定核酶序列正确无误，体外转录核酶和靶ＲＮＡ分子，生理温度下测定核酶切割活性，结果：所设计的核酶可有效地切割靶ｍＲＮＡ分子。结论：所设计的核酶在生理温度下具     

大鼠中枢和外周神经损伤后胞体分布区神经组织的红外光谱分析

目的:成年哺乳动物外周神经系统(PNS)损伤后可以有效再生,而中枢神经系统(CNS)损伤后不能有效地再生连接.因此,通过对PNS和CNS损伤后再生过程进行比较性研究认识造成二者再生差异的机制,对于认识CNS损伤的修复及CNS退行性变的机制,寻找和开创有效治疗手段具有重要的理论意义及应用价值.随着红外光谱技术的发展,通过显微镜选定生物组织中特定的微区,可以进一步确定组织细胞结构中各种组分含量的变化,从而可为生物系统的研究提供信息.方法:应用Fourier红外光谱(FTIR)检测方法分析大鼠脊髓和坐骨神经损伤后相应的神经元胞体分布区神经组织中归属为核酸和蛋白质的谱带吸收强度的变化,比较外周和中枢神经损伤后胞体分布区神经组织总蛋白和核酸的变化规律.结果:伤后早期,外周和中枢神经损伤后其相应胞体部位神经组织RNA、DNA和蛋白质的含量均增加;一周后,外周和中枢神经元胞体分布区RNA、DNA和蛋白质含量的变化规律不同:外周神经元胞体RNA和DNA的含量仍较高,而中枢神经伤侧和对照侧胞体RNA和DNA的含量接近,中枢和外周神经元胞体蛋白含量变化相反.结论:外周和中枢神经损伤后再生过程中其胞体反应性不同,这一差异可能与外周和中枢神经损伤后再生差异有关.     

一种电镜下观察贴壁培养细胞原位形态的新方法

使用丹麦Nunc公司的96孔可拆卸酶联板(拆卸为8条，每条12孔)．订购货号437915．因为该酶联板不是无菌级的，不能直接应用于细胞培养．又不能耐受高压灭菌，故采用高剂量放射线(如放射性钴源)照射灭菌．随后按照无菌级别处理，接种细胞。     

同源盒基因Lhx4在PC12细胞缺氧损伤保护中的作用

目的:转染并筛选Lhx4高表达的PC12细胞株,观察Lhx4基因对PC12细胞的缺氧保护作用.方法:①用RT-PCR检测PC12细胞缺氧培养后Lhx4基因的表达变化;②Lhx4基因连接至pLXIN逆转录病毒载体,收集病毒上清,感染PC12细胞,G418筛选阳性克隆,PCR鉴定,所筛选的克隆缺氧培养;③通过台盼蓝染色和培养液中乳酸脱氢酶活性的检测评价PC12细胞的存活状态.结果和结论:PC12细胞缺氧培养4 h后Lhx4基因的表达明显上调;缺氧8 h后Lhx4基因表达开始下调.所筛选的Lhx4高表达转染细胞株表现出明显的缺氧耐受性,相同的损伤条件下,细胞的存活数目及生存状态明显优于对照组.说明Lhx4基因在PC12细胞的缺氧损伤保护中具有重要的作用.     

阿的平对微波辐射小鼠海马损伤的保护作用

目的探讨预先给予阿的平（quinacrine）对微波辐射致小鼠脑损伤的保护作用。方法小鼠随机分为4组,即正常组、辐射对照组、阿的平低剂量组（12.6 mg/kg）、阿的平高剂量组（50.4 mg/kg）。接受辐射动物于照射后即刻（0 d）,1,2,7 d后完成检测,正常组动物在辐射实验后7 d后完成检测。微波辐照后,于不同时间点提取小鼠的脑组织蛋白,检测脑组织中HSP70蛋白表达变化。结果脑组织蛋白表达检测显示,微波辐射后1 d,辐射对照组小鼠脑中HSP70蛋白的表达开始升高,直至7 d。阿的平两个剂量组0,1,7 d给药组与辐射对照组相比明显上调,高剂量组尤甚。辐射对照组小鼠大脑海马的病理切片显示细胞水肿、血管扩张肿胀、间质充血等损伤,并出现海马沟回组织松散、细胞核皱缩、细胞水肿、空泡现象。预先灌胃给予小鼠阿的平后,小鼠脑组织的病理损伤有所减轻,状况有所改善。结论阿的平的这些保护机制可能与其上调HSP70蛋白表达发挥抗炎和抗凋亡作用,降低微波辐照引起的组织、细胞炎症反应和凋亡、坏死有关。     

Inter Alu PCR技术在鉴定分离人源DNA片段中的应用

目的：探讨ＩｎｔｅｒＡｌｕＰＣＲ技术在筛选鉴定含人ＤＮＡ小鼠转染细胞和分离人源ＤＮＡ片段中的应用。方法：设计人特异性Ａｌｕ引物，通过ＩｎｔｅｒＡｌｕＰＣＲ扩增对转染人基因组ＤＮＡ后回复突变的小鼠细胞进行鉴定筛选；分离插入的人源ＤＮＡ片段；经原位ＰＣＲ鉴定其人源性。结果：应用该技术从８株回复突变株中筛选出６株含特异性人ＤＮＡ；从其中１２号小鼠细胞基因组ＤＮＡ中分离出３条人源ＤＮＡ片段；ＰＣＲ原位杂交确证所分离的ＤＮＡ片段具有人的特异性。结论：ＩｎｔｅｒＡｌｕＰＣＲ技术是应用于筛选鉴定含人ＤＮＡ杂种细胞、分离其中人源插入片段的简便、有效的方法。     

一个具有肿瘤转移抑制基因活性的人DNA序列

目的 分离鉴定人类肿瘤转移抑制基因或相应ＤＮＡ序列，探讨转移表型逆转的分子生物学机制。方法 应用Ｉｎｔｅｒ Ａｌｕ ＰＣＲ技术，将导入正常人肺基因组ＤＮＡ片段后转移表型抑制细胞株中的人源性ＤＮＡ片段扩增出来，对其中的７００ｂｐ左右ＤＮＡ片段进行核苷酸序列分析，并在ＧｅｎＢａｎｋ序列数据库进行类似性检索。将该ＤＮＡ再次转染高转移小鼠瘤细胞株，通过体内、体外转移相关性实验，验证其是否具有抑制高转移小鼠