乳糖酶在大肠杆菌中的高效表达与纯化

目的克隆并分析乳酸菌LacZ基因,构建其原核表达质粒,在大肠杆菌中诱导融合蛋白表达,并纯化得到纯度较高的目的蛋白。方法采用PCR方法从乳酸菌中扩增出LacZ基因,测序和序列分析。将其克隆至克隆载体pGM-Tvector中,筛选阳性克隆后回收目的片段,将其克隆入原核表达质粒pGEX-6p-1,构建其重组表达质粒pGEX-6p-1/LacZ。以异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,聚丙烯酰胺凝胶电泳及Western blot分析鉴定,最后通过纯化得到单一的目的蛋白。结果 PCR扩增获得3024bp的LacZ基因,测序得知序列与GeneBank报道的序列一致,序列分析表明,该序列开放读码框有3024bp,推测肽链具有1008个氨基酸,蛋白分子量为114KDa,等电点为4.9。构建了重组表达质粒pGEX-6p-1/LacZ,IPTG诱导其高效表达出融合蛋白,聚丙烯酰胺凝胶电泳及Western blot分析鉴定出所表达蛋白的分子量为140KD,与融合蛋白的分子量一致。最后利用Glutathione Sepharose 4B对表达产物进行纯化,得到单一的目的蛋白。结论成功地构建了乳酸菌LacZ基因的原核表达质粒,通过序列分析并诱导表达,最后纯化得到单一的目的蛋白,为进一步生产低乳糖奶奠定基础。     

灯台叶醇提物对H22肝癌移植小鼠免疫和抗氧化功能的影响

目的探讨灯台叶醇提物抗肿瘤作用及其机制。方法以移植H22荷瘤小鼠为模型,设置阴性组、灯台叶醇提物低中高剂量组（0.2,1.0,5.0 g/kg）,阳性药环磷酰胺组,检测其抑瘤效果、碳廓清能力、耳肿胀度、血清中GR、GSH-PX、CAT、SOD和MDA含量。结果灯台叶醇提物高剂量能够明显抑制小鼠H22实体瘤生长（P〈0.05）,其抑瘤率为61.7%;高剂量组对小鼠耳肿胀度无明显影响,但增强其碳廓清能力,与阴性对照组比较,差异有统计学意义（P〈0.05）;高剂量组中血浆MDA含量水平明显降低（P〈0.05）,GR、GSH-PX、CAT、SOD活性水平比阴性对照组明显升高,还能够降低移植瘤细胞中活性氧ROS（P〈0.05）。结论灯台叶醇提物能够增强小鼠的免疫功能;清除自由基,减轻活性氧带来的损伤,从而起到抗肿瘤作用。     

红景天苷介导TLR4调控小胶质细胞激活对小鼠抑郁样行为的改善作用

目的 探讨红景天苷对脂多糖（LPS）诱导炎症抑郁模型小鼠的作用及机制。方法 48只Balb/c小鼠随机分为对照组、模型组、盐酸氟西汀（阳性药,20 mg/kg）组、红景天苷（25 mg/kg）组,每组12只。各组连续ig给药14 d后,除对照组外,其余各组ip 1 mg/kg LPS连续7 d制备抑郁症模型。以糖水偏好实验、旷场实验、悬尾实验和强迫游泳实验检测小鼠抑郁样症状;结束后取脑组织与血液检测肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-1β（IL-1β）水平;Iba1免疫荧光染色检测脑组织小胶质细胞激活;Western blotting法检测脑组织TLR4信号通路蛋白TLR4、NLRP3、cleaved-Caspase-1/Caspase-1表达。结果 与模型组比较,红景天苷与盐酸氟西汀预防给药能够显著上调小鼠糖水摄取率（P<0.05）,增加小鼠穿格评分（P<0.05）,下调悬尾与强迫游泳不动时间（P<0.05）;显著逆转LPS造成的TNF-α、IL-1β水平上调（P<0.05）;明显抑制小胶质细胞激活,显著降低Iba1荧光强度（P<0.05）;显著降低脑组织中TLR4、NLRP3与cleaved-Caspase-1/Caspase-1蛋白表达（P<0.05）。结论 ip LPS成功构建了炎症诱导的抑郁模型,红景天苷通过TLR4信号通路调控小胶质细胞激活,从而改善小鼠抑郁样行为。     

普罗帕酮治疗不同中医辨证分型的心房颤动临床疗效和安全性研究

目的 通过病例回顾分析评价普罗帕酮治疗不同中医辨证分型的心房颤动中的临床疗效和长期使用的安全性.方法 随机选取就诊的100例心房颤动患者进行病例回顾性分析,患者入院后完善检查明确诊断,同时详细询问病史明确中医辨证分型,所有患者均给予普罗帕酮口服150 mg/次,3次/d,每3个月随访1次,记录患者治疗后的各项指征和随访一年(每3个月1次)心房颤动总的发作次数和每次的发作时间.结果 服用普罗帕酮4h之后,痰热内阻型和气虚血瘀型两种类型患者的转复率分别为50.0％和53.3％,与气阴两虚组的25.0％和心肾阳虚组的20.0％比较,差异显著,有统计学意义(P ＜0.05);8 h内各组患者的转复率没有明显区别,数值分别为15％、15％、20％和20％,差异无统计学意义(P＞0.05);一年内的复发率分别为气阴两虚组和心肾阳虚组分别为15.0％和20.0％,痰热内阻组和气虚血瘀组分别为6.6％和9.9％,两组数据差异显著,有统计学意义(P＜0.05).结论 心房颤动根据中医辨证分型的不同在临床治疗中效果不一,普罗帕酮治疗后对于痰热内阻型和气虚血瘀型临床疗效好,同时安全性高,一年内转复率低.     

益智仁醚提取物对糖尿病肾病小鼠氧化应激的影响

目的研究益智仁醚提取物对糖尿病肾病小鼠的抗氧化作用。方法以糖尿病肾病小鼠为研究对象,通过制模分组,设为正常对照组、模型组、厄贝沙坦组、益智仁高、中、低剂量组,厄贝沙坦组以10 mg/(kg.d),益智仁高、中、低剂量组分别以20 g/(kg·d)、10 g/(kg.d)、5 g/(kg.d)给小鼠灌胃。正常对照组、模型组以等体积蒸馏水灌胃。实验至第4周末,检测不同组小鼠的血清SOD、MDA、CAT、GSH-PX,比较各组之间差异。结果益智仁醚提取物高、中剂量组可以升高血清中SOD、CAT、GSH-PX活力,降低MDA含量,与模型组比较差异有统计学意义(P0.05)。与厄贝沙坦组比较差异无统计学意义(P0.05)。而低剂量组中各个血清氧化应激指标变化与模型组差异无统计学意义(P0.05)。结论益智仁醚提取物高、中剂量组能够改善糖尿病肾病小鼠的氧化应激指标,具有一定的抗氧化作用,与已证实有抑制氧化应激作用的厄贝沙坦相仿。     

黄芩素对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨黄芩素对人体瘢痕疙瘩成纤维细胞在增殖、凋亡的影响,为临床瘢痕疙瘩的治疗提供实验基础。方法 MTT法测定黄芩素干预后瘢痕疙瘩成纤维细胞的活力和乳酸脱氢酶的含量;Annexin V-FITC分析成纤维细胞在干预后的细胞凋亡率;蛋白印迹实验检测凋亡蛋白表达水平的变化。结果黄芩素对体外培养的瘢痕疙瘩成纤维细胞的增殖有抑制作用(P0.01),抑制效应呈剂量依赖性,作用24 h后,黄芩素50μM组抑制率为65%,IC50值为(31.34±0.29)μM;黄芩素还可诱导瘢痕疙瘩成纤维细胞凋亡,黄芩素25μM组凋亡率达22.7%,和对照组相比,差异有统计学意义(P0.01);但不影响乳酸脱氢酶的含量。黄芩素作用后明显降低线粒体膜电位,上调凋亡蛋白裂解半胱天冬酶3和裂解半胱天冬酶9的表达,裂解半胱天冬酶8的表达不受影响。结论黄芩素通过抑制细胞增殖和促进细胞凋亡来抑制瘢痕疙瘩生长。     

皮炎和糖皮质激素的治疗

人体最大的器官是皮肤，其重量占人体体重的5％～15％，总面积约1．5m^2～2m^2，其厚度约0．5m^2～4m^2。皮肤覆盖着全身，使体内各种组织和器官免受侵袭。皮肤具有两个方面的屏障作用：一是防止体内水分、电解质和其他物质的丢失；另一方面阻止外界有害物质的侵入，保持人体内环境的稳定。皮肤病常发生在皮肤表面或软组织内，引起皮肤病的直接因素包括内、外两种。外因包括物理性、化学性、生物性等因素，如细菌、真菌、病毒等微生物的侵袭；而内因则包括饮食、代谢障碍、内分泌紊乱、神经精神和遗传等因素。     

皮脂溢出异常与外用药

1皮脂腺皮 脂腺位于靠近毛囊的真皮内。除手掌和足跖外分布于全身，尤以头皮、面部、胸部、肩胛间、阴阜等处较多。唇红部、乳头、龟头和小阴唇等处的皮脂腺直接开口于皮肤表面，其余开口于毛囊的上1／3处。皮脂腺可分泌皮脂，借以润滑皮肤、毛发和防止皮肤干燥。皮脂腺自青春期后分泌旺盛，青年男性较女性分泌多，至老年期逐渐减少。皮脂腺分泌皮脂过多，则可能诱发皮肤疾病。     

2015—2019年海南省省级结核病定点医疗机构收治的肺结核患者耐药特征及相关因素分析

目的 分析2015—2019年海南省省级结核病定点医疗机构收治的肺结核患者耐药特征及相关因素,为海南省结核病的防治提供科学依据。 方法 收集2015—2019年海南省结核病定点医疗机构所有分枝杆菌培养阳性、经分枝杆菌菌种鉴定试验确证为结核分枝杆菌,并且对主要抗结核药品(利福平、异烟肼、链霉素和乙胺丁醇)进行药物敏感性检测的肺结核患者,共纳入1229例。回顾性收集研究对象的临床资料,采用条件logistic回归模型分析肺结核患者出现耐多药的影响因素。 结果 1229例肺结核患者耐药率为41.66%(512/1229),初治患者和复治患者耐药率分别为21.01%(137/652)和64.99%(375/577),差异有统计学意义(χ²=243.600,P<0.001)。4种抗结核药品耐药顺位由高到低依次为利福平(32.06%,394/1229)、异烟肼(31.49%,387/1229)、链霉素(21.24%,261/1229)和乙胺丁醇(9.93%,122/1229)。2015—2019年肺结核患者耐药率年平均下降5.10%[(0.391/0.482)^1/4-1],耐多药率年平均下降4.07%[(0.249/0.294)^1/4-1],差异均有统计学意义({\chi }_{\mathrm{趋势}}^2=8.837,P=0.003; {\chi }_{\mathrm{趋势}}^2=4.802,P=0.028)。多因素条件logistic回归分析显示,复治患者耐多药发生风险是初治患者的12.305(6.778~22.337)倍,合并高尿酸血症者耐多药发生风险是非高尿酸血症者的2.720(1.064~6.951)倍,肺部有空洞者耐多药发生风险是无空洞者的2.017(1.143~3.560)倍。 结论 海南省肺结核患者耐药水平较高。肺结核患者中复治、并发高尿酸血症及肺部有空洞患者是耐多药的高危人群,应对其进行重点监测。     

黄芪甲苷对脓毒症小鼠的保护作用研究

目的 研究黄芪甲苷的抗脓毒症作用.方法 采用盲肠结扎穿孔术(CLP)复制小鼠脓毒症模型,黄芪甲苷分别于小鼠CLP术前、术后1h两次灌胃给药.结果 黄芪甲苷显著提高实验性脓毒症小鼠的存活率,降低肺湿、干重比,降低血清MPO、NO、LDH、AST、ALT水平,降低肝脏组织中iNOS和IL-1β mRNA表达.黄芪甲苷还能提高肝脏组织中蛋白C(PC)mRNA和内皮细胞蛋白C受体(EPCR)mRNA表达,恢复受损的PC系统.结论 黄芪甲苷对脓毒症小鼠具有保护作用,其机制与抗炎及上调PC系统有关.