AS-miR-21对非小细胞肺癌A549细胞增殖、迁移及对PTEN/PI3K/Akt信号通路的作用

目的 探讨miR-21的反义寡核苷酸(AS-miR-21)对非小细胞肺癌(NSCLC) A549细胞增殖和迁移能力的影响及对PTEN/PI3K/Akt信号通路的调控作用机制.方法 将NSCLC A549细胞分为3组,分别为AS-miR-21组、miR-NC组和Blank组,前两组分别应用阳离子脂质体LipofectamineTM 2000瞬时转染AS-miR-21及阴性对照miRNA(miR-NC),后者未进行任何干预.应用qRT-PCR检测AS-miR-21对NSCLCA549细胞中miR-21表达的影响;应用MTT检测NSCLC A549细胞增殖抑制率;Giemsa染色检测NSCLCA549细胞克隆形成;细胞划痕实验检测NSCLCA549细胞迁移潜能;qRT-PCR检测AS-miR-21对NSCLC A549细胞中PTEN mRNA表达水平的影响;蛋白质免疫印迹法检测AS-miR-21对NSCLC A549细胞中PTEN、PI3K、Akt蛋白表达水平的影响.结果 与miR-NC组和Blank组比较,AS-miR-21组miR-21表达水平下调(P ＜0.05);AS-miR-21显著抑制NSCLCA549细胞增殖能力(P＜0.05),显著减少NSCLCA549细胞克隆形成(P＜0.01)和迁移率(P＜0.01);AS-miR-21显著上调NSCLC A549细胞中PTEN蛋白表达水平(P＜0.01),而显著下调PI3K和Akt蛋白表达水平(P＜0.01).结论 AS-miR-21能抑制NSCLCA549细胞增殖及迁移,此外,AS-miR-21通过负调控PTEN/PI3K/Akt信号通路有可能成为NSCLC治疗新靶点.     

长链非编码RNA LINC01410对B细胞非霍奇金淋巴瘤细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨长链非编码RNA(LncRNA)LINC01410对B细胞非霍奇金淋巴瘤(B-NHL)细胞增殖和凋亡的影响.方法 采用Cox回归模型筛选GEO数据集(GSE10846)中与B-NHL预后相关的LncRNA.将体外培养B-NHL细胞系Raji和Ramos,随机分为慢病毒对照组、LINC01410敲低组、多柔比星...     

miRNA-24对血管内皮细胞eNOS表达/活性及其代谢产物NO生成的影响

目的 探讨微小RNA(miRNA)-24对血管内皮细胞内皮型一氧化氮合酶(eNOS)基因表达、活性调节的分子机制及其代谢产物的影响.方法 构建miRNA-24高表达质粒,并转染人脐静脉内皮细胞(HUVEC).MTT法检测细胞的增殖情况,划痕实验检测细胞的迁移能力,RT-PCR和Western印迹法检测细胞eNOS mRNA和蛋白的表达情况,ELISA法检测eNOS的表达活性,硝酸还原法测定细胞培养上清液中NO的含量.结果 与对照组相比,转染miRNA-24后细胞增殖能力下降54.32%、迁移能力下降48.62%;转染miRNA-24后eNOS mRNA降低43.92%,蛋白表达量减少42.71%;转染miRNA-24后eNOS的酶活性降低73.20%,同时NO的合成与释放减少55.29%.结论 miRNA-24高表达抑制eNOS的表达及酶活性;miRNA-24抑制代谢产物NO的合成与释放,这可能成为心血管疾病防治的分子靶点.     

LncRNA ZEB1⁃AS1对B细胞非霍奇金淋巴瘤增殖和凋亡的影响及其下游调控网络的分析

目的 探讨长链非编码 RNA（lncRNA） ZEB1-AS1对B 细胞非霍奇金淋巴瘤（B-cell non-Hodgkin's lymphoma,B-NHL）细胞增殖和凋亡的影响,构建lncRNA、miRNA、mRNA相关竞争性内源RNA（ceRNAs）网络。方法 采用Cox回归模型筛选GEO数据集（GSE31312）中与弥漫大B细胞淋巴瘤(diffuse large B-cell lymphoma,DLBCL)预后相关的lncRNAs。采用慢病毒转染技术建立ZEB1-AS1敲低的B-NHL细胞模型,采用CCK-8法和流式细胞术分别检测敲低ZEB1-AS1及不同浓度（50 ng/mL、100 ng/mL、200 ng/mL、400 ng/mL）多柔比星（doxorubicin,Dox）处理后的细胞增殖与凋亡情况。构建以ZEB1-AS1为节点的 lncRNA-miRNA-mRNA ceRNA调控网络,利用GO、KEGG和PPI分析该调控网络下游相关的核心mRNA及其功能。结果 共筛选了20个高风险lncRNAs。预测与ZEB1-AS1有相互结合的miRNA 4个,与ZEB1-AS1呈共表达关系又与miRNA相结合的潜在下游mRNA 1 208个,以此构建lncRNA-miRNA-mRNA调控网络及PPI调控网络。在体外实验中,与空载组相比,敲低ZEB1-AS1可显著抑制细胞增殖和促进细胞凋亡（均P<0.05）,敲低ZEB1-AS1+Dox作用对抑制淋巴瘤细胞增殖和促进细胞凋亡有协同作用。结论  ZEB1-AS1敲低可抑制B-NHL细胞增殖和促进细胞凋亡,且可能增强Dox的药物敏感性;以ZEB1-AS1为节点构建的ceRNA调控网络,可能是DLBCL重要的调控机制和诊疗靶点。