纳米二氧化硅对16HBE细胞存活率及PARP-1表达的影响

目的探讨纳米二氧化硅(SiO_2)对人支气管上皮细胞(16HBE细胞)存活率和聚二磷酸腺苷核糖聚合酶-1(PARP-1)表达的影响。方法 (1)以质量浓度为0~100 mg/L纳米SiO_2处理16HBE细胞24.0 h,以CCK-8法检测细胞存活率。(2)将16HBE细胞分为6组:溶剂对照组(予等体积溶剂处理)、微米SiO_2对照组(予终质量浓度为20 mg/L微米SiO_2处理),5、10、20 mg/L纳米SiO_2组(予相应终质量浓度的纳米SiO_2处理),姜黄素组(先予终浓度为10μmol/L的姜黄素处理2.0 h,再予终质量浓度为20 mg/L的纳米SiO_2处理)。各组细胞经处理后,分别于培养4.0、12.0和24.0 h时间点收获细胞。采用荧光实时定量聚合酶链式反应检测细胞中PARP-1 mRNA的相对表达水平,以免疫印迹法检测PARP-1蛋白的相对表达水平。结果 (1)随着纳米SiO_2处理剂量的增加,细胞存活率下降,呈剂量-效应关系(P0.01)。(2)在12.0和24.0 h时间点,纳米SiO_2刺激后,16HBE细胞的PARP-1 mRNA和蛋白相对表达水平均出现剂量依赖性下降(P0.01);与同时间点溶剂对照组比较,5、10、20 mg/L纳米SiO_2组16HBE细胞在该2个时间点的PARP-1 mRNA和蛋白相对表达水平均下降(P0.05)。在12.0和24.0 h时间点,20 mg/L纳米SiO_2组16HBE细胞的PARP-1 mRNA和蛋白相对表达水平均低于同时间点的微米SiO_2对照组(P0.05);姜黄素组16HBE细胞的12.0 h时间点上述2个指标均高于20 mg/L纳米SiO_2组(P0.05)。结论纳米SiO_2刺激可导致16HBE细胞存活率下降并呈剂量依赖性;PARP-1表达的下调可能是纳米SiO_2致16HBE增殖抑制的机制之一。姜黄素对纳米SiO_2诱导的16HBE的细胞损伤具有一定的保护作用。     

胸腺基质淋巴细胞生成素在1-氯-2,4-二硝基苯致敏诱导皮炎小鼠中的表达

目的:了解胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)在1-氯-2,4-二硝基苯(DNCB)致敏诱导皮炎小鼠中的表达,并评价TSLP在小鼠皮炎免疫反应中的作用。方法:将20只11周龄SPF级BALB/c小鼠随机分为2组(每组10只):致敏组先后接受含1.0%和0.1%DNCB的橄榄油丙酮(4∶1)溶液反复刺激背部皮肤,对照组接受基质溶液(橄榄油∶丙酮=4∶1)涂抹背部皮肤。实验期间观察小鼠皮炎症状,监测小鼠挠痒次数和皮炎症状评分,观察皮肤组织病理改变。21 d后检测2组血浆总Ig E水平;利用实时荧光定量聚合酶链式反应(q PCR)法检测皮肤、肝脏、脾脏和肾脏组织中TSLP m RNA水平,采用western-blot法分析TSLP蛋白表达情况。结果:2组小鼠的抓挠次数和皮炎症状评分分别在致敏第8天和第6天后出现差异(P0.05);致敏组小鼠血浆总Ig E水平[(132.61±14.89)μg/L]较对照组[(109.13±2.51)μg/L]显著升高(t=4.92,P0.05)。与对照组(1)相比,致敏组皮肤(1.83)、脾脏(1.06)和肾脏(1.10)组织中TSLP m RNA相对表达量均升高,而肝脏(0.90)组织TSLP m RNA相对表达量降低,但组间比较差异均无统计学意义(P均0.05)。Western-blot结果示TSLP蛋白在上述组织中的表达均无差异。结论:TSLP在DNCB致敏诱导皮炎小鼠的皮肤、肝脏、脾脏和肾脏组织中表达均无明显差异,其在小鼠皮炎免疫反应中的作用仍需进一步的研究。     

外泌体miRNA在结核病诊断和预后中的作用

结核病(tuberculosis, TB）作为一种严重的传染病,目前对结核病的预防和治疗仍未取得重大突破,诊断也不够理想。由于结核病的早期发现对于控制和预防感染传播极其重要,并且由于目前结核病诊断的挑战,开发新型生物标志物至关重要。外泌体miRNA是长度为18~22个核苷酸的小非编码RNA,在调节基因表达、翻译和细胞间传递信息中起重要作用。它们作为一种有前途的研究工具,为结核病的诊断和治疗提供了新的视角,近年来研究发现,外泌体与结核病的发生发展有密切的联系。结核病患者的血清外泌体中的miRNA代谢水平失调,可能将这些外体失调的miRNA用作新型生物标志物,用于结核病治疗监测以及活动性疾病的诊断。外泌体miRNA在结核病方面的研究已成为当前的热点之一,被认为是最有前途的候选生物标志物。本文就外泌体miRNA在结核病诊断和预后中的作用研究进展进行综述。     

皮炎小鼠胸腺基质淋巴细胞生成素的表达未受膳食硒水平的影响

目的 了解不同膳食硒水平下皮炎小鼠胸腺基质淋巴细胞生成素（thymic stromal lymphopoietin,TSLP）的表达情况。 方法 40只BALB/c小鼠随机分为4组（n=10）,3个致敏组分别以低硒（0.01 mg/kg）、中量硒（0.25 mg/kg,正常水平）和高量硒（3.00 mg/kg）饲料喂养,对照组以中量硒（正常水平）饲料喂养。饲养8周后致敏组采用1-氯2 ,4二硝基苯（1-Chloro 2,4-dinitrobenzene,DNCB）激发特应性皮炎样症状。激发期间监测皮炎症状。激发3周后采样进行皮肤组织病理观察,血浆总IgE检测,组织硒含量测定,TSLPmRNA丰度和TSLP蛋白表达分析。 结果 激发小鼠均出现典型的皮炎症状和皮炎病理改变,皮炎症状评分、挠痒计数和血浆总IgE显著高于对照组（P<0.05）。与对照组（标化为1）相比,除缺硒组（2.51±0.43）皮肤组织外（P<0.05）,激发小鼠皮肤（中、高硒组：1.83±0.79,2.26±0.75）、脾脏（低、中、高硒组：1.33±0.17,1.06±0.13,0.99±0.45）、肾脏（低、中、高硒组：1.16±0.42,1.10±0.40,1.53±0.40）和肝脏（低、中、高硒组：0.95±0.30,0.90±0.31,1.11±0.43）组织TSLP mRNA相对表达量与对照组比较,差异均无统计学意义（P>0.05）,激发小鼠4种组织中TSLPmRNA的相对表达量在三个硒水平组之间差异无统计学意义（P>0.05）;线性回归分析发现,3个硒水平组激发小鼠皮肤组织中TSLP mRNA相对表达量与皮肤组织中硒水平无相关性（R²=0.006,P>0.05）。蛋白分析发现,致敏组TSLP蛋白在低中高三个硒水平致敏组小鼠皮肤组织中的表达差异无统计学意义;在致敏组小鼠肝脏、脾脏和肾脏中均未见明显表达条带。 结论 DNCB激发特应性皮炎样皮炎小鼠皮肤、肝脏、脾脏和肾脏组织中TSLP的表达不受膳食硒水平的影响,这可能与TSLP的亚型和表达时机有关。     

过量硒加重二硝基氯苯诱导的小鼠特应性皮炎样表现

目的 观察硒对小鼠特应性皮炎样表现的影响。方法 40只BALB/c小鼠随机等分为缺硒组（0.01 mg/kg）、正常硒组（0.25 mg/kg）、过量硒组（3.00 mg/kg）和对照组（0.25 mg/kg）,4组小鼠先用缺硒饲料饲养4周后,再分别以缺硒、正常硒、过量硒和正常硒饲料喂养4周。此后,3个致敏组（缺硒组、正常硒组、过量硒组）采用二硝基氯苯（DNCB）诱导特应性皮炎样表现。激发期间监测小鼠皮炎表现严重程度。激发3周后检测小鼠血浆总IgE、全血炎症细胞计数,并剪取小鼠背部皮肤组织进行组织病理检查,分析组织中硒含量。单因素方差分析方法评估多组间IgE、硒水平和细胞计数等检测结果差异, Pearson相关性分析和线性回归分析评估IgE等检测指标与硒水平的相关性。结果 致敏6 d后,致敏组小鼠皮肤表现评分明显高于对照组（致敏第6、8、11、13、15、18天时各组间比较,F值分别为44.897、76.622、114.866、33.352、28.605、11.271,均P < 0.01）,第11天过量硒组皮肤表现评分明显高于缺硒组和正常硒组（均P < 0.05）。与对照组相比,致敏小鼠均发生明显的皮炎病理改变,但3个致敏组之间皮损中炎症细胞计数差异无统计学意义（均P > 0.05）。致敏小鼠全血炎症细胞和血浆总IgE水平均随膳食硒水平的增加而升高;其中过量硒组血浆总IgE水平升高最明显,与缺硒组、正常硒组和对照组比较,差异均有统计学意义［（167.17 ± 8.49） μg/L比（124.78 ± 5.32） μg/L、（132.61 ± 4.71） μg/L、（109.13 ± 0.79） μg/L,t值分别为3.919、3.222、6.485,均P < 0.05］。致敏组小鼠皮肤组织硒含量与小鼠血浆总IgE水平（r = 0.579,P < 0.001）、全血白细胞（r = 0.414,P < 0.05）、中性粒细胞（r = 0.439,P < 0.05）、淋巴细胞（r = 0.417,P < 0.05）和嗜酸性粒细胞（r = 0.505,P < 0.01）均呈线性正相关。结论 不同硒水平对小鼠皮炎表现严重程度的影响不同,过量硒组皮炎表现更严重。     

纳米二氧化硅对16HBE细胞存活率及SOD1表达的影响

目的探讨纳米二氧化硅(nano-SiO_2)对人支气管上皮细胞(16HBE细胞)存活率和超氧化物歧化酶1(Superoxide Dismutase 1, SOD1)表达的影响。方法以质量浓度为0～100 mg/L nano-SiO_2处理16HBE细胞24 h,以CCK-8法检测细胞存活率,筛选合适的后续实验处理剂量。将16HBE细胞分为6组:溶剂对照组(予等体积溶剂处理)、微米SiO_2对照组(予质量浓度为20 mg/L微米SiO_2处理),5、10和20 mg/L nano-SiO_2组(予相应终质量浓度的nano-SiO_2处理),姜黄素组(先予终浓度为10μmol/L的姜黄素处理2 h,再予终质量浓度为20 mg/L的nano-SiO_2处理)。各组细胞经处理后,分别于培养4、12和24 h时间点收获细胞。采用荧光实时定量聚合酶链式反应检测细胞中SOD1 mRNA的相对表达水平,以蛋白免疫印迹法检测SOD1蛋白的相对表达水平。结果随着nano-SiO_2处理剂量的增加,细胞存活率下降,呈剂量-效应关系,有统计学意义(P0.01)。在12和24 h时间点,nano-SiO_2刺激后,16HBE细胞的SOD1的mRNA和蛋白相对表达水平均出现剂量依赖性下降(P0.01);与同时间点溶剂对照组比较,10和20 mg/L nano-SiO_2组16HBE细胞的在上述2个时间点的SOD1 mRNA和蛋白相对表达水平均下降,差异有统计学意义(P0.05)。在4、12和24 h时间点,20 mg/L nano-SiO_2组16HBE细胞的SOD1 mRNA和蛋白相对表达水平均低于同时间点的微米SiO_2对照组(P0.05),姜黄素组16HBE细胞的上述2个指标均高于20 mg/L nano-SiO_2组(P0.05)。结论 nano-SiO_2刺激可导致16HBE细胞存活率下降并呈剂量依赖性;SOD1表达的下调可能是nano-SiO_2致16HBE增殖抑制的机制之一。姜黄素对nano-SiO_2诱导16HBE细胞损伤具有一定的保护作用。     

治疗期肺结核患者外周血中免疫调节细胞特异性基因mRNA丰度动态观察

目的 动态监测治疗期肺结核（tuberculosis, TB）患者外周血中T-bet、GATA-3、RORγt和Foxp3等免疫调节细胞特异性基因mRNA丰度变化,探索结核病变过程中机体的免疫调节趋势及作用。方法 选择52例确诊肺结核患者为病例组,50名体检健康者作为对照组。通过实时定量PCR方法测定上述基因以及IFN-γ、IL-4、IL-17、IL-10等细胞因子特异性基因在治疗期第0个月、3个月、6个月的表达水平,动态观察患者及健康人群体内免疫调节平衡Th1/Th2和Th17/Treg变化。结果 初诊组T-bet mRNA表达、RORγt /Foxp3分别低于正常对照组(P<0.05),RORγt和Foxp3 mRNA表达分别高于正常对照组(P<0.05);初诊组和治疗3月组GATA-3 mRNA的表达均高于正常对照组(P<0.05),T-bet/GATA-3均低于正常对照组(P<0.05)。治疗6月组T-bet mRNA、T-bet/GATA-3分别高于初诊组和治疗3月组(P<0.05);治疗3月组和治疗6月组RORγt、Foxp3 mRNA均分别低于初诊组(P<0.05)。初诊组和治疗组IFN-γ mRNA均低于对照组,IL-4、IL-17、IL-10的mRNA均高于对照组(P<0.05)。结论 肺结核患者存在转录因子水平Th1/Th2失衡,呈现Th2漂移现象。Th17细胞和Treg细胞可能在TB的发生过程中起着重要的促炎作用和免疫抑制作用。抗结核治疗能够改善上述转录因子的异常表达。     

2009-2011年深圳市头孢曲松低敏淋病奈瑟菌的流行特征

目的 调查2009-2011年深圳市头孢曲松低敏淋病奈瑟菌(淋球菌)流行的基因型和特征.方法 收集2009至201 1年深圳市淋球菌296株,采用琼脂稀释法筛选出头孢曲松低敏株(最小抑菌浓度为0.06 ～0.50 μg/ml),用logistic回归分析方法,分析与头孢曲松低敏淋球菌感染相关的因素;根据1∶1抽样原则抽取出高敏菌株,与低敏菌株一起进行淋病奈瑟菌抗原序列分析(NG-MAST)基因分型和邻接法(neighbor-joining,NJ)进化树分析.结果 在296株淋球菌中,未发现头孢曲松耐药菌株,头孢曲松低敏菌株53株(17.9％).近2个月的抗生素使用史与头孢曲松低敏淋球菌感染相关(OR=3.080,95％ CI:1.376 ～6.894).53株低敏株的NG-MAST共得到48个ST型,由5个成簇的ST(ST1768、ST3927、ST641、ST7076、ST7078各包含了2株淋球菌)和43个单一的ST构成,其中26个ST型中国香港等地曾有报道.NJ进化树未观察到低敏株单独成簇的情况.结论 深圳市2009-2011年分离到的296株淋球菌中头孢曲松低敏株的比例较高;深圳市头孢曲松低敏淋球菌菌株的流行可能有其独特的特点.     

深圳市居民血脂异常流行病学调查

目的 了解广东省深圳市15 ～ 69岁居民血清胆固醇(TC)、甘油三脂(TG)、高密度脂蛋白(HDL-C)的流行水平及分布特征,为心血管疾病预防提供依据.方法 按照分层随机抽样原则随机抽取深圳市73个社区,共8 751名15 ～69岁居民进行入户调查、体格检查和血脂测定.结果 深圳市15 ～69岁居民TC、TG、HDL-C水平分别为4.86,1.57和1.23 mmol/L;TC和TG水平男性高于女性(P＜0.05),随着年龄的增加而上升(P＜0.05);血脂异常患者3 568例,标化患病率38.08％,其中高TC、高TG和低HDL-C患者1 621,2 461和920例,标化患病率分别为17.22％,25.72％和10.65％,深圳市居民血脂异常类型主要为高TG型;血脂异常患病率男性高于女性(P＜0.05),高TC和高TG患病率均随着年龄的增长有上升趋势(P＜0.05),并具有阶段性特点;心血管病危险因素在血脂异常患者中有聚集现象.结论 深圳市居民血脂异常患病率高,控制人群血脂水平,可降低心血管疾病的发生.     

深圳市成人25-(OH)VD水平及其与血糖的相关性研究

目的了解深圳市企事业单位职工25-(OH)维生素D[25-(OH)VD]的营养状况,并分析其与血糖及糖化血红蛋白的相关性。方法选取2013年7~12月在深圳市某体检中心体检的深圳市机关和企事业单位员工作为研究对象,采集空腹外周静脉血,采用酶联免疫法对血浆25-(OH)VD的含量进行检测,并对血糖及糖化血红蛋白进行检测。分析检测指标的异常情况。结果深圳企事业单位人群中25-(OH)VD的平均水平为(60.98±15.92)nmol/L,25-(OH)VD缺乏或不足率为83.37%,且性别之间25-(OH)VD的营养水平及不足与缺乏率差异有统计学意义;血糖及糖化血红蛋白的平均水平分别为(5.45±0.88)mmol/L及(5.69±0.59)%;扣除年龄、性别及BMI的影响,血清25-(OH)VD水平与血糖呈负相关(r=-0.062,P0.01),与糖化血红蛋白有一定的相关性(r=-0.051,P0.01)。结论正常人群中25-(OH)VD水平与血糖及糖化血红蛋白有一定的相关性,维持人体正常25-(OH)VD水平可能对预防糖尿病的发生、降低糖尿病的患病率起到一定作用。