缺氧预适应诱导人脐静脉内皮细胞释放的微囊泡对正常H9c2细胞的作用

目的:分离提取缺氧预适应（HPC）诱导人脐静脉内皮细胞（HUVECs）分泌的微囊泡(MVs),探讨HPC-EMVs对正常H9c2心肌细胞的作用和其Caspase 3、Bcl-2和Bax表达的影响。方法:采用HPC方法诱导HUVECs释放MVs,将其和正常培养的大鼠H9c2心肌细胞孵育,通过MTT法检测细胞存活率和比色法测定细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)活性; 通过Hoechst 33258染色观察细胞核的形态变化;比色法测定培养液中Caspase 3活性以及Western blot法检测H9c2细胞中Bcl-2和Bax的表达。结果:HPC模型构建过程中,与缺氧/复氧(H/R)组相比,HPC组细胞存活率显著升高（P<0.01）,即成功构建HUVECs 的HPC模型;HPC-EMVs处理H9c2细胞结果发现,与对照组H9c2细胞相比,HPC-EMVs 30、60 μg/mL组细胞存活率显著降低（P<0.001）,且LDH活性和Caspase 3活性显著升高（P<0.01或P<0.001）,凋亡细胞量增加, Bcl-2/Bax比值显著降低（P<0.001） 。结论:成功采用HPC的方法诱导HUVECs释放MVs,HPC-EMVs通过影响正常H9c2细胞Caspase 3、Bcl-2和Bax蛋白的表达发挥促凋亡作用。     

水溶性半乳糖酞菁类光敏剂T1联合光动力疗法治疗肝癌的研究

目的探讨水溶性半乳糖酞菁类光敏剂T1联合光动力疗法（PDT）对人肝癌细胞系的体外抑瘤效应和对小鼠肝癌H-22的体内抑瘤效果。 方法取对数生长期HepG2细胞培养，分设不同浓度T1给药组（0μM、0.06μM、0.125μM、0.25μM、0.5μM、1μM）。利用四甲基偶氮唑法检测PDT对HepG2增殖的影响，用激光共聚焦显微镜检测T1在HepG2细胞中的亚细胞定位，利用JC-1染色和高内涵细胞成像分析仪检测细胞凋亡及坏死情况，检测T1-PDT后HepG2细胞中活性氧（ROS）含量变化，利用RT-PCR检测Bcl-2、Bax mRNA的表达水平。选取健康小鼠24只，建立小鼠肝癌H-22荷瘤小鼠模型，按照随机数字表法将其分为4组，分别为对照组、低剂量组、中剂量组、高剂量组，每组4只，给予不同剂量T1-PDT，计算抑瘤率。 结果四甲基偶氮唑法结果表明一定剂量的单纯光敏剂或激光对肿瘤细胞的生长无影响或影响较小，而T1-PDT治疗能明显抑制HepG2肿瘤细胞的增殖，诱导HepG2细胞凋亡，T1存在于HepG2细胞的线粒体内，能促使HepG2内ROS含量增加，RT-PCR结果显示Bax的表达水平升高、Bcl-2表达水平降低。体内实验显示T1-PDT可以显著抑制小鼠移植瘤生长。 结论T1介导的PDT可以有效诱导HepG2细胞凋亡，其机制可能与T1的亚细胞定位、增加胞内ROS的含量、调节凋亡相关基因有关。