抗幽门螺杆菌重组VacA卵黄抗体保护剂的探讨

目的比较硫糖铝和多种糖类对抗幽门螺杆菌重组VacA卵黄抗体保护作用,为制备能耐受胃酸和蛋白酶的IgY制剂奠定基础。方法诱导DH5-αvacA-pQE30大量表达VacA蛋白,制备纯化的VacA IgY。在不同酸性的IgY液中加入同浓度各种保护剂,在相同酸性的IgY液中加入不同浓度的各种保护剂,然后加入不同浓度硫糖铝和正常胃内浓度或高浓度的胃蛋白酶,以ELISA法测定试验组IgY的剩余抗体活性（AR）。结果在pH2.0和3.0条件下,各保护剂均能提高IgY抗体活性,且硫糖铝对IgY抗体活性的保护作用优于糖类,在此条件下50%和40%硫糖铝均可完全保持IgY抗体活性。在pH2.0-3.0及正常或高胃蛋白酶浓度下,30%以上硫糖铝均可有效保护IgY的活性。结论低pH下硫糖铝对IgY抗体活性的保护作用优于糖类,且30%以上硫糖铝可增强VacA IgY对胃蛋白酶的耐受能力,是较理想的IgY保护剂。     

SIgA制备的研究进展

分泌型IgA(Secretory immunoglobulin A,SlgA)是60年代初Chodircker和Tomasi等首先在外分泌液中发现的一种lgA,主要存在于乳汁、胃肠液、呼吸道分泌液等外分泌液中,为区别于血清型lgA而命名为SlgA[1].     

封闭负压引流联合万古霉素对慢性骨髓炎创面不愈合及软组织缺损患者CRP、TNE-α、IL-6水平的影响

目的研究封闭负压引流+万古霉素运用于慢性骨髓炎创面不愈合及软组织缺损中的价值。方法选择该院2015年1月至2017年12月纳入的60例慢性骨髓炎创面不愈合及软组织缺损患者,按照数字表法随机分为两组各30例,研究组采取封闭负压引流+万古霉素,对照组采取常规治疗,对比两组治疗结果及血清C反应蛋白(CRP)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-6 (IL-6)水平。结果研究组骨吸收、骨缺损愈合时间短于对照组(P 0.05);治疗前两组VAS评分差异无统计学意义(P0.05),治疗后研究组评分低于对照组(P 0.05)。治疗前两组的CRP、TNF-α、IL-6水平差异无统计学意义(P0.05),治疗后研究组各指标水平均低于对照组(P 0.05)。两组1个月、3个月复发率差异无统计学意义(P0.05),研究组6个月、1年的复发率低于对照组(P 0.05)。结论封闭负压引流+万古霉素运用于慢性骨髓炎创面不愈合及软组织缺损中效果明显,可缩短治疗时间,促进骨缺损愈合,改善炎症反应,减少复发率,为预后提供保障。     

奥司他韦对流感病毒肺炎模型幼鼠的治疗效果及其对血清免疫球蛋白水平的影响

目的 探讨奥司他韦对流感病毒肺炎模型幼鼠的治疗效果及其对血清免疫球蛋白(Ig)G、IgM及IgA水平的影响.方法 建立幼鼠流感病毒肺炎模型,随机分为模型组和奥司他韦组,每组各8只,对照组幼鼠5只.显微镜下观察病理学特征,采用小动物肺功能仪进行机械通气,肺功能检测指标主要包括50％用力呼气流量(FEF50)、75％用力呼气流量(FEF75)、最大呼气中段流量(MMF)及呼气峰流速值(PEF).双抗体夹心检测血清IgG、IgM、IgA,Western blot检测Notch1、Notch胞内结构域(NICD)及Notch配体(Jagged1)蛋白.结果 模型组和奥司他韦组FEF50、FEF75、MMF及PEF均明显低于对照组,肺系数均明显高于对照组(P<0.05);奥司他韦组FEF50、FEF75、MMF及PEF均明显高于模型组,肺系数明显低于模型组(P<0.05).模型组和奥司他韦组IgG、IgM、IgA水平均明显低于对照组(P<0.05);奥司他韦组IgG、IgM、IgA水平均明显高于模型组(P<0.05).模型组和奥司他韦组Notch1、NICD、Jagged1蛋白水平均明显高于对照组(P<0.05);奥司他韦组Notch1、NICD、Jagged1蛋白水平均明显低于模型组(P<0.05).结论 奥司他韦治疗流感病毒肺炎模型幼鼠效果明显,可有效改善小鼠的肺功能及血清Ig水平.     

脓肿分枝杆菌耐利福平机制的研究

目的 探讨脓肿分枝杆菌耐利福平的机制。方法 采用棋盘微量稀释法,分别测定利福平在加入不同浓度的改变细胞壁通透性的试剂和主动外排泵抑制剂时对脓肿分枝杆菌的最低抑菌浓度。通过利福平对脓肿分枝杆菌的最低抑菌浓度的变化情况来分析细胞壁通透性和主动外排在脓肿分枝杆菌耐利福平机制中的作用。结果 随着TWEEN-80、Trixon X-100、甲苯、乙醚、CCCP、利血平和泮托拉唑浓度的增加,利福平对脓肿分枝杆菌的最低抑菌浓度逐渐降低。对于TWEEN-80、Trixon X-100、CCCP和泮托拉唑,利福平对脓肿分枝杆菌的最低抑菌浓度由512 μg/mL降至小于32 μg/mL,0.1%的TWEEN-80、0.006 25%的Trixon X-100、0.1 μg/mL的CCCP和32 μg/mL的泮托拉唑为最适浓度;对于甲苯、乙醚和利血平,利福平对脓肿分枝杆菌的最低抑菌浓度由512 μg/mL降至64 μg/mL,0.25%的甲苯、0.25%的乙醚和8 μg/mL的利血平为最适浓度。它们均能促进利福平对脓肿分枝杆菌的抑菌作用。结论 细胞壁通透性和主动外排在脓肿分枝杆菌耐利福平的机制中有重要作用。     

偏心性髋臼旋转截骨与Chiari截骨治疗髋臼发育不良的短期疗效比较

目的:比较偏心性髋臼旋转截骨与Chiari截骨治疗髋臼发育不良的短期疗效。方法:将34例成人髋臼发育不良患者随机分为对照组18例和观察组16例。对照组给予Chiari截骨治疗,观察组给予偏心性髋臼旋转截骨治疗。比较2组患者手术时间、术中出血量和切口长度、手术前后日本骨科学会（JOA）评分、中心边缘（CE）角和髋臼（Sharp）角变化及术后并发症发生率。结果:2组患者手术时间、术中出血量和切口长度等指标差异无统计学意义（P>0.05）。2组患者术前JOA评分、CE角和Sharp角差异均无统计学意义（P>0.05）,观察组患者术后JOA评分和CE角均显著高于对照组（P<0.01）,且Sharp角明显低于对照组（P<0.01）。观察组患者术后并发症发生率与对照组差异无统计学意义（P=1.000）。结论:偏心性髋臼旋转截骨治疗髋臼发育不良短期疗效更优,具有临床应用价值。     

两种纯化幽门螺旋杆菌VacA-HpaA融合蛋白包涵体方法的比较

目的比较Ni^2＋-NTA树脂和切胶纯化重组VacA-HpaA融合蛋白的纯化效果,探讨纯化蛋白包涵体的简易方法。方法克隆并表达重组pQE30-vacA-hpaA-DH5α工程菌,获得重组VacA-HpaA融合蛋白的包涵体,分别进行Ni^2＋-NTA树脂和切胶纯化,获得可溶性重组蛋白,Western blot鉴定其抗原性;用纯化蛋白免疫BALB/c小鼠,ELISA法检测小鼠血清抗VacA、HpaA和VacA-HpaA的IgG水平,鉴定其免疫原性。结果两种方法均能纯化重组VacA-HpaA融合蛋白包涵体,得到可溶性的重组蛋白,Ni^2＋-NTA树脂纯化法获得的可溶性重组蛋白的纯度为95.8%,得率为63.5%;切胶纯化法获得可溶性重组蛋白的纯度为93.3%,得率为75.2%。Western blot鉴定纯化蛋白均具有良好的抗原性。ELISA法检测显示小鼠血清均能与重组蛋白VacA、HpaA和VacA-HpaA发生反应,两组IgG水平比较,差异无统计学意义（P〉0.05）,均具有良好的免疫原性。结论切胶纯化重组VacA-HpaA融合蛋白包涵体是一种简单、经济的可行方法,有利于重组蛋白包涵体的纯化。     

幽门螺杆菌hp1188基因的原核表达及免疫学鉴定

目的:构建高效表达Hp1188重组蛋白的基因工程菌pQE30-hp1188-DH5α,提纯重组蛋白,鉴定其抗原性和免疫原性.通过小鼠灌胃试验,验证Hp1188蛋白阻止幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)在胃内定植的作用.方法:构建重组质粒pQE30-hp1188,DNA测序分析正确后,转化大肠杆菌DH5α,IPTG诱导表达.表达蛋白用Ni2+-NTA树脂纯化,SDS-PAGE分析纯度,Bradford法测定浓度,Western blot鉴定对相应抗原的特异性,双向琼脂扩散实验检测效价.纯化重组蛋白和粘膜佐剂霍乱毒素B亚单位(Cholera toxin subunit B,CTB)的混合液灌胃免疫接种预防组BALB/c小鼠,同时设阴性对照组和阳性对照组,免疫4周后用H.pylori NCTC 11637攻击3次,末次攻击4周后处死小鼠,进行胃组织H.pylori 培养;H.pylori 定植半定量、炎症程度及其炎症活动度的评分,以评价重组蛋白对胃组织H.pylori 感染的免疫保护作用.结果:构建的重组表达质粒pQE30-hp1188经DNA测序证实序列完整,插入的基因片段全长810 bp,与基因文库中的hp1188基因同源性达98%,并在大肠杆菌DH5α中表达出分子量约为30 kD大小的可溶性目的蛋白,表达量占全菌总量的47%,表达蛋白纯化后纯度达90%,浓度为1.0 mg/ml.Western blot证实有良好抗原结合特异性,双向琼脂扩散效价为1∶16.预防组H.pylori 感染率、定植及炎症程度评分均明显低于阳性对照组(P＜0.05).预防组不仅可以降低H.pylori 的定植,而且能减轻H.pylori造成的小鼠胃组织的局部慢性炎症反应.结论:成功构建了基因工程菌pQE30-hp1188-DH5α,并高效表达了Hp1188重组蛋白,表达蛋白具有良好的抗原性和免疫原性,在小鼠体内能阻止H.pylori 的定植.     

射频消融术与宫腔镜电切术治疗功能性子宫出血临床疗效对比

目的比较超声引导下射频消融术与宫腔镜电切术治疗功能性子宫出血的疗效。方法选择2006年1月～2013年1月确诊为功能性子宫出血的110例患者,根据手术治疗方式分为射频消融术组（观察组）和宫腔镜电切术组（对照组）,比较两组手术时间、术中出血、住院天数、治疗效果等。结果手术时间：观察组6～15（7.5±2.2）min,对照组16～45（25.4±4.3）min;术中出血：观察组0～5（1.0±0.5）ml,对照组10～50（30.0±6.5）ml;住院天数：观察组0～2（0.3±0.1）d,对照组3～6（4.2±1.1）d。两组均有显著性差异（P〈0.01）。治疗效果：观察组55例中,治愈46例,有效9例;对照组55例中,治愈25例,有效15例,好转10例,无效5例,观察组疗效显著优于对照组（P〈0.01）。结论与宫腔镜电切术比较,射频消融术治疗功能性子宫出血具有手术时间短、术中出血少、治愈率高、无需住院等优点,并且操作简单,易于掌握。     

异烟肼对脓肿分枝杆菌L型的诱导作用

目的探讨异烟肼对脓肿分枝杆菌L型的诱导作用。方法将脓肿分枝杆菌分别接种于含128μg/ml异烟肼和无异烟肼的结核分枝杆菌快速液体培养基中培养。含异烟肼的培养物经0.45μm孔径滤膜过滤,滤液接种于无异烟肼的结核分枝杆菌快速液体培养基内返祖培养。将含异烟肼和无异烟肼的培养物及返祖菌进行细胞壁染色和透射电镜观察其细胞壁完整性,扫描电镜观察其表面微观结构。含异烟肼的培养物转种L型菌琼脂平板培养,无异烟肼的培养物和返祖菌转种营养琼脂平板培养,观察其菌落形态。对返祖菌及诱导前接种菌的16S rDNA进行鉴定。结果在含128μg/ml异烟肼浓度的结核分枝杆菌快速液体培养基中培养的脓肿分枝杆菌细胞壁缺失,形态为球形,L型细菌琼脂平板上菌落呈典型油煎蛋样,而无异烟肼的结核分枝杆菌快速液体培养基中培养的脓肿分枝杆菌细胞壁完整,形态为杆状,营养琼脂平板上呈圆形菌落。128μg/ml异烟肼浓度的结核分枝杆菌快速液体培养基中培养的脓肿分枝杆菌经返祖后,返祖菌细胞壁完整,形态为杆状,营养琼脂平板上菌落也呈圆形。16S rDNA鉴定返祖菌与诱导前接种菌的同源性达100%,为同一种细菌,即脓肿分枝杆菌。结论异烟肼成功诱导脓肿分枝杆菌L型,可用于脓肿分枝杆菌耐药机制和防治研究。