RNA干扰在白血病基因治疗中的应用前景

RNA干扰(RNAi)作为一种进化保守的转录后基因沉默机制,是指双链RNA分子(dsRNA)被切割成21～23个核苷酸的小干扰RNA(siRNA),最终使其同源的mRNA特异性降解.RNAi现广泛用于多个生物体的功能基因组学研究,以及在基因表达异常导致的多种疾病的临床前模型中进行干预治疗.大约50%的白血病伴有异常基因的表达,利用RNAi肿瘤特异性基因靶向治疗为治疗白血病提供了一条新途径.随着siRNA在活体中的稳定性和转染效率的提高、非特异性作用的减少,正迅速应用于临床中.     

非清髓异基因造血干细胞移植治疗低增生性MDS1例并文献复习

目的探讨非清髓性异基因外周血造血干细胞移植治疗低增生性骨髓增生异常综合征(MDS)的疗效,观察其植入及并发症的发生情况。方法我院诊断为低增生性MDS患者1例,采用氟达拉滨+阿糖胞苷+环磷酰胺的非清髓预处理方案,环孢素A+甲氨蝶呤+骁悉预防移植物抗宿主病。结果 STR-PCR证实移植后30d及3个月骨髓植入为完全供者型,移植后3个月发生多发性脑梗塞,6个月出现面部皮疹及口腔溃疡,通过调整免疫抑制剂及输注间充质干细胞(5×107/次,2次)后症状明显好转。结论非清髓性异基因外周血造血干细胞移植治疗低增生性MDS获得较好的疗效。     

血栓性血小板减少性紫癜合并寻常银屑病、1型糖尿病:1例报告暨文献复习

血栓性血小板减少性紫癜（thrombotic thrombocytopenic purpura,TTP）的病理特征为血小板减少、微血管病性溶血性贫血和微血管内血小板聚集。其典型临床表现为Moschcowitz五联症：血小板减少、微血管溶血性贫血、波动的神经系统征象、肾脏损害和发热。近年报道发病率约为2～8／100万。     

急性白血病患者骨髓细胞中TIMP3、RUNX3蛋白表达情况检测及其临床意义

目的： 检测急性白血病(AL)患者骨髓细胞中的TIMP3、RUNX3蛋白表达的情况及其与基因甲基化的关系,并探讨其与AL患者预后的关系。方法: 采用Western blotting检测50例AL患者骨髓单个核细胞(BMMCs)及10例健康供者外周血单个核细胞(PBMCs)中TIMP3、RUNX3蛋白表达的情况,结合前期实验中TIMP3、RUNX3启动子区域甲基化检测结果,对与AL患者预后有关的因素进行统计分析。结果: 50例AL患者BMMCs中RUNX3甲基化组该蛋白表达明显少于未甲基化组及正常对照组(P<0.05),AL患者完全缓解(CR)率与RUNX3蛋白表达及骨髓中原始细胞比例有关,RUNX3蛋白失表达、骨髓中原始细胞比例高的患者CR率低,反之较高。结论: RUNX3启动子区域甲基化是导致该蛋白失表达的原因,其参与了AL的发病,并与不良预后有关,TIMP3甲基化与急性白血病发病无关。     

急性白血病p53基因P1启动子区域DNA甲基化研究

目的：通过检测急性白血病（AL）中p53基因P1启动子异常甲基化，探讨p53基因异常甲基化在急性白血病中的意义。方法:分别使用限制性内切酶MspⅠ、HpaⅡ、EcoRⅡ、BstNⅠ酶切提取基因组DNA，然后分别使用酶切后产物及基因组DNA为模板进行PCR扩增。产物电泳后在凝胶成像分析系统内观测电泳条带及摄像；部分标本的电泳条带经凝胶回收纯化后进行测序。结果:急性白血病患者p53基因第一启动子甲基化阳性率为38.7％，而急性淋巴细胞白血病（ALL）与急性非淋巴细胞白血病(ANLL)患者分别为45.5％、35.0％。正常对照标本中未检测到p53基因的异常甲基化。p53基因甲基化情况在急性白血病病人与正常人之间经过统计学检验，P<0.05；但急性淋巴细胞白血病与急性非淋巴细胞白血病患者之间无显著差异，P>0.05。分析急性白血病患者p53基因甲基化与患者临床资料之间的关系，其中，p53基因异常甲基化与肝脾淋巴结是否肿大之间的关系经统计学分析P<0.05。结论:①部分急性白血病患者存在p53基因第一启动子异常甲基化，正常对照中未检测到p53基因的甲基化；②p53基因第一启动子在急性淋巴细胞白血病与急性非淋巴细胞白血病均可发生异常甲基化，两者之间发生甲基化的概率无统计学差异；③p53基因异常甲基化与肝脾淋巴结肿大有显著差异，但p53基因异常甲基化与急性白血病治疗效果及预后的关系尚不能确定，须进一步研究确定。     

唑来膦酸抑制U937细胞增殖及诱导凋亡

目的:研究唑来膦酸(ZOL)对人类急性髓系白血病细胞U937的增殖抑制及促凋亡作用。方法:CCK-8法检测不同时间ZOL对U937细胞的生长抑制率;流式细胞术检测ZOL对U937细胞周期的影响;Annexin V-PI法及Hoechst 33342法检测ZOL作用前后细胞凋亡情况变化,JC-1检测ZOL对U937细胞线粒体膜电位变化的影响;克隆形成实验检测U937细胞克隆形成能力;Western blot法检测ZOL对U937细胞周期和凋亡相关蛋白的变化。结果:CCK-8结果显示ZOL可以抑制U937细胞的活力,并呈时间-剂量依赖性;Annexin V-PI及Hoechst33342结果显示ZOL可以促进U937细胞凋亡,且呈时间-剂量依赖性;JC-1结果显示ZOL可以明显降低U937细胞线粒体膜电位;PI法证实ZOL将U937细胞周期阻滞在S期,克隆形成实验证实0.2 mmol/L ZOL可以完全抑制U937细胞的克隆形成能力;Western blot结果显示ZOL作用于U937细胞48 h后细胞周期相关蛋白p21表达显著增强,促凋亡蛋白Bax表达增强,抑凋亡蛋白Bcl-2表达明显减弱。结论:ZOL抑制U937细胞的增殖和克隆形成主要是由于抑制了细胞周期相关蛋白表达,同时ZOL可以促进U937细胞凋亡,这种作用主要是通过调节线粒体凋亡途径相关蛋白来实现的。     

大通道经皮肾镜取石患者围手术期出血原因及输血治疗的探讨

目的探讨经皮肾镜取石术患者围术期出血的原因及其输血治疗的策略。方法回顾性分析2008年6月至2010年6月在我院行大通道经皮肾镜取石术的202例患者临床资料,对各种可能影响出血量的因素进行多因素回归分析,以寻求影响手术出血量的主要因素,并统计各类成分血输注量,评价输血效果。结果202例患者平均出血量为150±30．5ml,平均血红蛋白降低为1．0±0．62g/dL,其中有9例忠者进行输血治疗,输血率为4．5％。输血以红细胞悬液为主。多因素回归分析发现孤立肾、高血压、术前尿路感染、结石面积、肾实质厚度、肾积水程度、通道数量和手术时间对出血量有明显影响。结论孤立肾、高血压、术前尿路感染、结石面积大、肾实质厚、肾积水轻、多通道和手术时间长会增加经皮肾镜取石术出血,输血对其治疗有重要意义。     

肝移植术中自体血液回收对红细胞功能及血液流变学的影响——附15例报告

目的:研究肝移植术中进行自体血液回收对红细胞功能及血液流变学的影响.方法:选择15例行肝移植术患者为研究对象,术中采用自体-2000型血液回收机(北京产)回收术中出血,测定与比较术前静脉血及术中回收血标本的红细胞功能(包括红细胞携氧功能及红细胞破坏程度)指标及血液流变学指标.结果:与术前静脉血比较,术中回收血游离血红蛋白增高,2,3-二磷酸甘油酸、Na+-K+-ATP酶、Ca+-ATP酶、Mg+-ATP酶、红细胞丙二醛和红细胞渗透脆性均无明显变化;全血中、高切黏度明显降低,卡松黏度明显增高;全血低切黏度、血浆黏度、血液相对黏度、红细胞聚集指数及卡松屈服应力无明显变化.结论:肝移植病人术中行自体血液回收对红细胞功能及血液流变学无明显不良影响.     

地西他滨治疗骨髓增生异常综合征10例疗效观察

目的:观察地西他滨治疗骨髓增生异常综合征(MDS)的疗效及不良反应.方法:对10例MDS患者采用地西他滨治疗,25 mg/d,连用5d,休息23 d,28 d为1疗程.国际预后评分0.5分4例、1分1例、1.5分2例、2分1例、2.5分2例.结果:其中3例患者使用1疗程,3例患者使用2疗程,4例患者使用4疗程.10例患者中3例患者因粒细胞缺乏时间长,严重的肺部感染导致呼吸及循环衰竭于治疗2个月内死亡.2例患者因骨髓抑制期血小板极低,出现消化道出血,积极抢救于1个月内无效死亡.随访另外5例患者,其中1例难治性血细胞减少伴多系发育异常(RCMD)患者治疗4个疗程后完全缓解,5个月后进展为急性白血病,于第7个月后死亡;1例环形铁粒幼细胞难治性贫血患者使用地西他滨1个疗程获完全缓解后未坚持巩固治疗,7个月后死亡;1例由MDS转变为急性白血病患者治疗2个疗程获完全缓解,目前仍存活;1例难治性贫血伴原始细胞增多(RAEB)治疗3个疗程后获血液学改善;1例RAEB患者治疗4个疗程后情况稳定.结论:地西他滨用于治疗中危-2及高危MDS患者,疗效尚可.     

核黄素光化学法灭活乙肝病毒的初步探讨

目的研究核黄素光化学法对乙肝病毒的灭活效果。方法随机选择慢性乙型肝炎患者15例,抽取其静脉血并使用核黄素光化学法进行病毒灭活,评价灭活效果;检测灭活前后红细胞功能。结果以1600μmol/L核黄素灭活2 h,HBV DNA拷贝数明显减少(P<0.05);灭活后红细胞Na+K+-ATPase有所降低,丙二醛(MDA)明显增高(P<0.05),而2,3-二磷酸甘油酸(2,3-DPG)、游离血红蛋白(FHb)、渗透脆性等无明显变化。结论核黄素光化学法能部分灭活血液中乙肝病毒,对红细胞功能无明显影响。