免疫-PCR法检测儿童尿中生长激素水平

目的 :建立超灵敏度的免疫 PCR法检测尿中生长激素的水平。方法 :在经戊二醛处理的PCR管中完成双抗夹心酶免疫反应 ,通过PCR扩增连接在抗原 抗体复合物上的DNA分子 ,琼脂糖电泳及扫描判断结果。结果 :处理后的PCR管完全能够进行免疫反应 ,其灵敏度可达 0 1pg ml左右。琼脂糖电泳及扫描结果表明 ,30例正常青春发育期前儿童与 1 0例经常规生长激素激发试验诊断为生长激素缺乏 (growthhormone deficient,GHD)的儿童 ,1 2h夜尿生长激素 (GH)水平有明显差异。结论 :此法的敏感度比酶标法高 1 0 3 ～ 1 0 4倍 ,适于儿童尿中微量GH水平的检测     

干扰素-α及长效干扰素抗肝炎病毒作用机制的研究进展

干扰素-α是治疗慢性病毒性肝炎的主要药物之一,可通过影响肝细胞Jak-STAT信号通路,促进2′-5′-OAS、PKR和MxA等蛋白的生成发挥抗肝炎病毒作用。干扰素-α还可通过影响MAPK通路、IRS-1/PI3K-p70S6激酶通路等信号转导通路发挥作用。为延长其半衰期、增强疗效,目前已开发出多种长效干扰素,如聚乙二醇干扰素、人血清白蛋白融合干扰素、干扰素脂质体等,并有逐渐取代普通干扰素的趋势。开发出长效、高效的干扰素也越来越成为干扰素及病毒性肝炎治疗的重要发展方向。     

骨化型腰椎间盘突出症50例分析

自 1997- 0 4～ 2 0 0 1- 12我科共手术治疗腰椎间盘突出症 2 5 7例 ,其中手术证实椎间盘骨化 5 0例 ,占 17.4% ,分析如下。1　临床资料本组男 32例 ,女 18例 ,年龄 2 1～ 6 3岁。有腰部外伤史者2 6例。病程 8个月～ 2 0 a;发生于 2个间隙 6例 (L3～ 4、L4～ 51例 ,L3～ 4、L5S1 1例 ,L4～ 5、L5S1 4例 )。合并其它椎间盘突出 (非骨化型椎间盘突出 ) 6例 ,合并腰椎管狭窄 12例 ,合并神经根管狭窄2 3例。 X线片显示椎间盘有骨化影仅 10例 ,CT显示 40例。 5 0例患者的症状体征见表 1表 1症状例数 %体征例数 %腰痛 2 754脊柱曲变改变 2 95…     

重组人白蛋白干扰素α-2b融合蛋白的抗HBV机制

IFN-α是目前临床上常用的抗HBV药物,但普通IFN-α半衰期只有4～6 h,患者不得不接受频繁的皮下注射,疗程至少半年.重组人白蛋白融合干扰素α-2b(rHSA-IFNα-2b)是通过生物工程技术,构建编码人血清白蛋白(HSA)和IFNα-2b的融合基因并在载体中获得高效表达而成的一种长效干扰素~([1]).本研究以HepG2 2.2.15细胞为模型,对rHSA-IFNα-2b的体外抗HBV作用进行了研究,为rHSA-IFNα-2b用于临床治疗慢性乙型肝炎提供实验依据.     

突变人干扰素-α2b基因5'端提高其在大肠杆菌中的表达

目的 对人干扰素-α2b(hIFN-ao2b)基因的5'端进行突变,构建重组人干扰素-α2b(rhIFN-α2b)原核高表达工程菌,以提高rhIFN-α2b的表达水平.方法 依据大肠杆菌密码子偏好性,在不改变hIFN-α2b的氨基酸序列的情况下,定点突变hIFN-α2b基因5'端序列并PCR扩增出rhIFN-α2b',克隆至温控型表达载体pJW2,转化大肠杆菌DH5α,筛选阳性重组子,温度诱导表达,表达产物进行SDS-PAGE、Westernblot鉴定分析并以WISH-VSV系统检测其抗病毒活性.结果 SDS-PAGE分析表明rhIFN-α2b表达量约占菌体总蛋白20.6%,Westem blot表明rhIFN-α2b具有与hIFN-α2b相同的免疫原性,WISH细胞-VSV病毒系统证实其比活性达1.2×108 IU/mg,与未突变工程菌一致.结论 突变hIFN-α2b基因5'端可以提高其表达水平,并成功构建出rhIFN-α2b原核高表达工程菌.     

重组人干扰素α-2b的梯度凝胶色谱柱复性和同步纯化

利用盐酸胍浓度梯度凝胶色谱柱复性法从大肠杆菌表达的重组人干扰素α-2b（rhIFNα-2b）包涵体的溶解液中复性rhIFNα-2b。通过考察线性盐酸胍梯度下盐酸胍终浓度、梯度长度、流速、复性液中还原型／氧化型谷胱甘肽比例等因素，探索了盐酸胍梯度凝胶色谱柱复性rhIFNα-2b的优化条件。结果表明，复性后rhIFNα-2b的蛋白收率是透析复性法的4．2倍，活性回收率为68．7％，比活力1.77×10^8IU／mg，纯度高于90％。