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1.
小鼠胚胎整体原位杂交实用技术的建立 总被引:3,自引:0,他引:3
目的 优化小鼠胚胎整体原位杂交及数据分析方法。方法 小鼠胚胎用4%多聚甲醛4%固定过夜,10mg/L蛋白酶K(PK)室温消化30min,预杂交2h后,加入探针63℃反应16~18h,用盐溶液高温洗涤多次,RNA酶37℃消化1h,封闭4h后加入地高辛抗体4℃过夜。抗体反应后反复洗涤并在水平摇床上振摇,NBT和BCIP显色系统避光显色。提取图像灰度值,扣除背景、对照等假阳性信号。结果 KIAA1708探针在脑、脊髓等8个区域有杂交信号,对图像数据分析结果表明,只有1个区域的信号在95%可信限范围内,为阳性信号。结论 通过控制蛋白酶K消化时间、探针和地高辛抗体浓度,以及洗涤、显色过程,得到了低本底、着色清晰的杂交结果,结合图像的数据分析步骤,消除假阳性结果。建立了一套实用的小鼠胚胎整体原位杂交方法。 相似文献
2.
目的探讨Cpne5蛋白在SH-SY5Y细胞凋亡中表达量的变化。方法显微镜观察细胞形态及流式细胞术检测凋亡率,鉴定A23187诱导SH-SY5Y细胞凋亡及血清剥夺诱导凋亡的模型;免疫印迹法检测两种凋亡过程中Cpne5蛋白表达量的变化。结果 10μmol/L A23187诱导SH-SY5Y细胞24h,细胞出现皱缩、凋亡率增加。A23187诱导0.5h,Cpne5蛋白表达量即出现明显的上升,持续至12h;在24h时Cpne5蛋白表达量回落至诱导前水平。血清剥夺72h的SH-SY5Y细胞24份,凋亡率为23.2±2.1%,与对照组1.1±0.1%比,差异有统计学意义(P〈0.01)。免疫印迹结果表明,SH-SY5Y细胞分别经血清剥夺1h、6h、12h、24h、72h对Cpne5蛋白表达量无明显变化。结论 A23187诱导SH-SY5Y细胞凋亡早期Cpne5蛋白表达量有显著变化;提示Cpne5基因可能参与凋亡调控的钙信号通路。 相似文献
3.
目的明确小鼠Cpne5基因在mRNA水平的组织表达分布及其在胚胎的表达定位。方法提取新生、成年小鼠主要脏器的总RNA,利用RT-PCR法检测Cpne5 mRNA的表达量;合成针对Cpne5 mRNA的杂交探针,取不同胎龄胎鼠进行整体原位杂交。结果 Cpne5 mRNA在成年小鼠10种脏器组织均有不同程度的表达,以大脑,小脑,睾丸和肺脏表达量较高;而肝脏和肌肉未表达。新生小鼠9种脏器中,Cpne5表达量最高的是脑组织,眼和肾次之,肺和肝脏表达量很少。制备并评估Cpne5原杂探针的产量,SP6转录的反义探针浓度为100ng/μL,T7转录的正义探针浓度为10ng/μL,原位杂交结果显示Cpne5 mRNA主要表达于胎鼠的端脑、间脑、中脑及菱脑原节。结论在新生和成年小鼠的脑组织中Cpne5基因mRNA高水平表达,并在胎鼠发育过程中定位于胎脑。 相似文献
4.
5.
应用核酸杂交技术(dot-blot)分析了癌基因。-myc、 N-ras和抑癌基因 p53在骨髓增生异常综合征(MDS)和急非淋白血病(ANLL)中的扩增情况。结果发现,有 3 例(33%)的 MDS存在 p53抑癌基因的 2倍扩增,本实验中 p53抑癌基因的扩增发生在 MDS的较晚期阶段; 1例 ANLL中存在癌基因 c-myc和抑癌基因 p53的共扩增,且发现扩增与 MDS的分型及 ANLL的临床病情有一定的相关性。 相似文献
6.
实验大鼠预先分别给予不同药物后置于相同的热环境中,实施热损伤,同时观察大鼠体温升高速率。损伤后立即检测纹状体中 D_1R的平衡解离常数和最大结合容量,测定纹状体中cAMP的浓度,检测纹状体细胞中的钙调素(CSM)的相对活性,从 D_1R及其信号转导的角度,探讨多巴胺受体影响体温调节的机制。结果表明,多巴胺受体激动剂左旋多巴能明显加快动物升温,而D_1R桔抗剂SCH23390则明显阻止升温;多巴胺两种受体分别具有相互桔抗的促进动物体温升高和阻滞体温升高的作用,神经活性物质神经节昔脂由于其稳定生物膜的作用,而在热损伤模型中同样具有损伤保护作用。 相似文献
7.
目的从人组织cDNA文库克隆胆管癌相关基因FXYD6并进行功能区定位分析。方法利用人胎肝、脑及脾cDNA文库,通过Goldkey软件进行引物设计,从组织cDNA文库获得FXYD6全长和转录编码区序列,对其进行克隆与纯化;对FXYD6基因重组克隆进行测序鉴定;并应用GenBank核酸数据库及Goldkey软件对其功能区进行定位分析。结果在胎肝和脑cDNA文库中,扩增出FXYD6特异条带,但在脾cDNA文库未见扩增产物。将PCR扩增产物与pGEM-T载体连接,进行转化后确认回收组、阳性对照组均可见单菌落生长。选取阳性克隆进行菌落收获和质粒提取,并行测序分析,该序列包含已测序FXYD6基因大片段和可能的编码区序列。通过序列分析,得到最可能编码区序列为+1相位编码区序列,进一步分析得到该基因产物作为膜蛋白的可能功能区分布。结论 FXYD6基因克隆、纯化及功能区定位的成功为进一步研究该基因的功能奠定了基础。 相似文献
8.
目的:采用直接ELISA法检测人源化抗叶酸受体抗体的抗原结合活性。方法:以固定量的重组人叶酸受体a做包被抗原,辣根过氧化酶标记的抗人IgG(H+L)为二抗,直接测定不同浓度参比品和供试品与抗原的结合活性,通过数据处理软件对结果绘图,根据供试品及参比品EC50值计算供试品的相对结合力。结果:同一批次的3支供试品分别经3次测定,相对结合活性分别为参比品的(80.61±12.19)%,(88.82±12.70)%,(103.57±6.07)%,平均值(91.0±13.72)%。3次试验的RSD分别为15.12%,14.30%,5.86%。结论:直接ELISA法精密性良好,结果客观,影响因素少,可用于人源化叶酸受体抗体抗原结合活性的常规检测。 相似文献
9.
10.
<正> 1985年6月至1995年9月笔者采用冬病夏治——穴位贴敷中药的方法(以下简称贴敷)治疗慢性支气管炎518例,疗效显著。该方法简便,经济,无痛苦,无副作用,患者乐意接受,值得临床推广,现报告如下: 相似文献