Effect on biological behavior of chemotherapy-resistant tumor cells by human wild-type p53, GM-CSF and B7-1 genes via recombinant adenovirus

　Objective To explore the effect on biological behavior of chemotherapy-resistant tumor cells by human wild-type p53, GM-CSF and B7-1 genes mediated via recombinant adenovirus. Methods p53-abnormal KB-v200 (VCR resistant) and KB-s (VCR sensitive) cell lines were used as model tumor cells, which are resistant and sensitive to chemotherapeutic drugs respectively. After infected with recombinant adenovirus carrying human wild-type p53, GM-CSF and B7-1 genes, changes in biological behavior (including drug sensitivity) of these two kinds of gene-transduced cancer cells were observed. Results Both of the cell lines were susceptible to adenovirus, all of three exogenous genes (p53, GM-CSF and B7-1) could be effectively expressed in these cell lines, their growth was suppressed, and apoptosis was induced. The drug-pumping-out function of Pgp glycoprotein on the cytomembrane of drug-resistant KB-v200 cells was markedly affected 48h after transfection of the recombinant adenovirus, revealed by increase of the amount of rhodamine 123 accumulation in the cells. The MTT assay also indicated the reversal of their sensitivity to VCR drugs. In vivo experiment in nude mice it was demonstrated reduction of tumorigenicity of the KB-v200 cells or KB-s cells infected with the recombinant adenovirus, and increase of their sensitivity to VCR. Conclusion The clinical application of this recombinant adenovirus carrying agents might be more effective in treatment of tumors with multidrug resistance (MDR).     

人树突状细胞与K562细胞的融合以及体外诱导p210蛋白特异性CTL的研究

目的：探讨人外周血单细胞来源的树突状细胞（Ｄdndritic cells,ＤＣ）与人白血病细胞 Ｋ５６２融合后，能否诱导同p２１０蛋白特异性的ＣＴＬ，为ＤＣ疫苗的临床应用提供理 论基础。方法：外周血来源的巾附单核细胞，在人ＧＭ－ＣＳＦ（１０００Ｕ/ml）作用下，培养５～７天后，与人白血病细胞Ｋ５６２进行融合，融合细胞再与自体的淋巴细胞共同孵育１０～１４天，采用乳酸脱氢酶释放试验分析其对p２１０蛋白阳性细胞的杀伤效果。     

重组腺病毒介导人野生型p53,GM-CSF和B7-1基因对肿瘤化疗耐药细胞生物学行为的影响

目的：探讨重组腺病毒介导人野生型p５３,ＧＭ－ＣＳＦ和Ｂ７－１基因对肿瘤化疗耐药 细胞生物学行为的影响,为临床使用该重组腺病毒治疗多药耐药的肿瘤提供实验基础。方法：选用p５３异常的ＫＢ-s（ＶＣＲ敏感）和ＫＢv２００（ＶＣＲ耐药）细胞作为肿瘤化疗药物敏感和耐药的模式细胞,感染携带人野生型p５３,ＧＭ－ＣＳＦ和Ｂ７－１基因的重 组腺病毒后,观察这两种转基因癌细胞的生物学行为（包括药物敏感性０的变化,结果：药     

p14ARF基因抑制喉癌细胞生长及其对内源性p53表达的影响

目的　探讨p14ARF对喉癌细胞生长的抑制作用及其对内源性p5 3表达的影响 ,为喉癌致癌的分子机理和基因治疗提供理论基础。方法　采用基因转染技术 ,将全长野生型p14ARF 互补DNA(complementaryDNA ,cDNA)转染到人喉鳞状细胞癌Hep 2细胞中 ,利用流式细胞仪、聚合酶链反应(polymerasechainreaction ,PCR)和Western Blotting等方法研究其对细胞周期、内源性野生型p5 3表达的影响。结果　转染p14ARF基因的Hep 2细胞的生长受到明显抑制 ,其克隆形成能力为转染空载体的5 7%。细胞分析表明 ,转染p14ARFcDNA 48h后 ,处在G0 G1和G2 M期的细胞皆增加了 1倍。同时Western Blotting分析结果表明 ,内源性野生型p5 3表达明显上升。结论　p14ARF 基因能上调Hep 2细胞中内源性野生型p5 3的表达并阻滞细胞于G0 G1和G2 M期 ,从而抑制其生长。     

基因修饰细胞介导的肿瘤治疗

肿瘤的基因治疗最终是通过基因修饰细胞介导完成的。本文就免疫基因修饰的肿瘤细胞疫苗、自杀基因或抑癌基因修饰的细胞疫苗、基因修饰的树突状细胞疫苗以及基因修饰的淋巴细胞、造血干细胞等各种基因修饰细胞在介导肿瘤治疗中的特点、作用及进展作一综述。     

p14ARF基因抑制肿瘤细胞增殖的研究

目的：从正常人肝细胞系Ｌ０２细胞中扩增人的肿瘤抑制基因Ｐ１４＾ＡＲＦ,以研究其对人的多种肿瘤细胞生长的影响。方法：应用ＲＴ－ＰＣＲ技术,从培养的下沉人肝细胞系Ｌ０２细胞中扩增出０．４Ｋｂ的Ｐ１４＾ＡＲＦＣＤＮＡ片段,测序正确后郫具核表达载体ｐｃＤＮＡ３上的ＢａｍＨＩ和ＥｃｏＲＩ位点,命名为ｐｃＤＮＡ３ＡＲＦ。此质粒同脂质体Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ＾ＴＭ介导转染肿瘤细胞Ｈｅｐ２、ＫＢ、ＫＢ－ｖ２０     

重组腺病毒介导入野生型p53,GM-CSF和B7-1基因对肿瘤化疗耐药细胞生物学行为的影响

目的：探讨重组腺病毒分导入野生型ｐ５３,ＧＭ－ＣＳＦ和Ｂ７－１基因对肿瘤化疗耐药细胞生物学行为的影响,为临床使用该重组腺病毒治疗多药耐药的肿瘤提供实验基础。方法：选用ｐ５３异常的ＫＢ－ｓ（ＶＣＲ敏感）和ＫＢ－ｖ２００（ＶＣＲ耐药）细胞作为肿瘤化疗药物敏感和耐药的模式细胞,感染携带人野生型ｐ５３,ＧＭ－ＣＳＦ和Ｂ７－１基因的重组腺病毒后,观察这两种转基因癌细胞的生物学行为（包括药物敏感性）的变化。结果：药物敏感和耐药细胞都对腺病毒易感,重组腺病毒携带的三个外源基因（ｐ５３、ＧＭ－ＣＳＦ、Ｂ７－１基因）在两种细胞中都能得到有效表达,并且能抑制它们的生长及诱导其凋亡。耐药细胞 ＫＢ－ｖ２００在转染该重组腺病毒 ４８ｈ后,其细胞膜上 Ｐｇｐ糖蛋白的泵出药物的功能却受到显著影响,表现为罗丹明１２３在其细胞内的积累增加。ＭＴＦ的实验结果也显示出其对ＶＣＲ药物敏感性的增加,裸鼠体内实验证实了感染上述重组腺病毒的ＫＢ－ｖ２００细胞的致瘤性降低,同时能增加对化疗药物ＶＣＲ的敏感性。结论：实验研究结果提示,使用该重组腺病毒并结合化疗药物,对临床治疗多药耐药的肿瘤可能会更有效。     

基因修饰细胞介导的肿瘤治疗

肿瘤的基因治疗最终是通过基因修饰细胞介导完成的。本文就免疫基因修饰的肿瘤细胞疫苗、自杀基因或抑癌基因修饰的细胞疫苗、基因修饰的树突状细胞疫苗以及基因修饰的淋巴细胞、造血干细胞等各种基因修饰细胞在介导肿瘤治疗中的特点、作用及进展作一综述。     

p14^ARF基因抑制喉癌细胞生长及其对内源性p53表达的影响

目的 探讨p14^ARF对喉癌细胞生长及其对内源性p53表达的影响，为喉癌致癌的分子机理和基因治疗提供理论基础。方法 采用基因转染技术，将全长野生型p14^ARF互补DNA（complementary DNA,cDNA）转染到人喉鳞状细胞癌Hep-2细胞中，利用流式细胞仪、聚合酶链的 （polymerase chain reaction,PCR）和Western-Blotting等方法研究其对细胞周期、内源性野生型p53表达的影响。结果 转染p14^ARFcDNA48h后，处在G0－G1和G2－M工 细胞皆增加了1倍。同时Western-Blotting分析结果表明，内源性野生型p53表达明显上升。结论 p14^ARF基因能上调Hep-2细胞中内源性野生型p53的表达并阻滞细胞于G0－G1和G2－M期，从而抑制其 生长。     

树突状细胞疫苗的制备及其临床应用研究

本文主要就近 2年来树突状细胞 (DC)疫苗的发展和临床应用等方面作一综述 ,着重讨论DC疫苗的制备方法及存在问题。