胶原蛋白特异性氨基酸测定方法的改进

目的　建立一种快速、准确、可靠的胶原蛋白定量检测方法。方法　采用 6 3 0 0黄金系统氨基酸分析仪 ,在钠柱 90min程序蛋白质水解分析方法基础上 ,根据羟脯氨酸 (HYP)和羟赖氨酸 (HYL)的特性 ,分别建立了HYP和HYL的快速测定方法 ,并用此方法检测了大白兔尺骨中段骨缺损处再生组织内HYP和HYL的含量。结果　用此方法完成HYP和HYL分析的时间均为 1 8min ,比原方法缩短了 72min,且有较好的重现性 (HYPCV :日内 0 .89% ,日间 1 .2 8% ;HYLCV :日内 2 .6 6 % ,日间 3 .48% )、回收率高 (HYP :97.5 % ;HYL :96 .0 9% )。结论　本方法是一种快速、准确、可靠的胶原蛋白定量检测方法 ,并利于大批量样品的快速测定     

低氧状态下海马神经元细胞信号转录因子和活化子3，5的基因表达状况

目的：探讨STAT3，5基因在缺氧性海马神经元细胞损伤中的可能作用。方法：分离新生Wistar大鼠双侧海马进行体外培养，采用Tripure试剂提取海马神经元细胞的总：RNA，自行设计大鼠STAT3，STAT5和阳性对照HPRT的PCR引物序列，通过半定量的逆转录多聚酶链反应(RT—PCR)技术检测常氧组、低氧2，6，12h组海马神经元细胞的STAT3和STAT5基因的表达水平；采用PCR产物纯化试剂盒纯化PCR产物，而后用四色荧光法直接测序。结果：图像分析结果显示低氧培养2h组海马神经元细胞中STAT3，5mRNA表达水平升高，目的片段与HPRT的光密度比值分别为0.57&;#177;0.1l和0.64&;#177;0.09，在低氧6h组(0.85&;#177;0.14和0.86&;#177;0.11)达最高，与正常组(0.34&;#177;0.12和0.40&;#177;0.08)比较差别均有显著性意义(T=24.59～-7.37，P&;lt;0.01)。低氧12h组的表达量低于6h组，但高于正常组(P&;lt;0.01)。测序显示，PCR扩增的产物STAT3，STAT5与大鼠Genbank中的序列完全一致。结论：低氧增强海马神经元细胞中STAT3，5基因的表达，在低氧所致的脑损伤中可能发挥重要作用。     

肌腱愈合及粘连形成机制的研究：胰岛素样生长因子1基因真核表达载体的构建及表达

目的：探讨真核表达载体介导外源性胰岛素样生长因子-1(IGF-1)基因转染肌腱细胞的可能性。方法：组织块法培养原代肌腱细胞，体外重组真核表达载体pcDNA3．1(+)-IGF-1，并以脂多胺DOGS为介导转染培养的肌腱细胞，反转录多聚酶链反应(RT-PCR)检测IGF-1mRNA的表达，ELISA法检测IGF-1活性蛋白表达。结果：成功构建真核表达载体pcDNA3．1(+)-IGF-1；RT-PCR检测显示转染后的肌腱细胞成功表达IGF-1mRNA；ELISA结果显示转染组IGF-1蛋白表达较对照组明显增高(t=-2．873，P&;lt;0．05)。结论：重组的真核表达载体pcDNA3．1(+)-IGF-1能够将IGF-1cDNA成功导入肌腱细胞并表达。     

约氏疟原虫动合子的体外纯培养

目的　探讨提纯的约氏疟原虫合子培养形成动合子的方法。　方法　经黄尿酸刺激体外诱导感染鼠血中的约氏疟原虫雌雄配子形成、受精 ,采用梯度离心法分离得到纯净的合子 ,并在 MEM培养基中培养。　结果　从 10～ 15只感染小鼠血液可分离到 10 6数量级的约氏疟原虫合子 ;在 2 2℃条件下 ,经 2 2 h～ 2 4 h培养有动合子形成。　结论　可以直接从感染鼠血诱导形成并分离到约氏疟原虫合子 ,所得合子经培养可发育为动合子。     

醋酸精氨酸的毒理学试验研究

目的通过急性毒性实验和长期毒性实验,观察醋酸精氨酸对动物的毒性反应.方法急性实验选用KM小鼠80只,随机分成4组,每组20只,两个组分别从尾静脉注射0.5g/ml醋酸精氨酸和盐酸精氨酸25ml/kg体重;另两个组分别一次灌胃0.8g/ml的醋酸精氨酸和盐酸精氨酸40ml/kg体重,观察7d.长期毒性实验选用Wistar大鼠60只,分高、低剂量及正常对照组3个组.杂种狗6只,分高剂量组和正常对照组,高剂量组大鼠以20.0g·kg-1·d-1、狗12.0g·kg-1·d-1,低剂量大鼠组2.0g·kg-1·d-1 ,观察4周.结果小鼠急性试验(静脉和灌胃)所用剂量远大于拟用临床剂量的(0.4g·kg-1·d)80倍以上;长期毒性试验采用小鼠50倍于临床拟用剂量(20g/kg/d),狗30倍于临床拟用剂量(12.0g/kg/d),未发现明显的中毒反应,也未发现主要靶器官的损害.结论通过急性和长期毒性实验,证明大剂量或长时间使用醋酸精氨酸对机体无明显毒副作用.     

手掌部分解剖结构可视化的初步研究

目的：建立手的可视化模型。方法：采用新鲜成人手标本的冰冻薄层断面切片(0．2mm)，在PC机上对手部骨骼、指屈肌腱、掌部筋膜间隙以及手的外形进行三维重建。结果：初步建立了基于解剖结构的可视化手模型并精确显示手掌部主要解剖结构。结论：可视化手模型为手部某些疾病的诊断和治疗提供了三维的形态学资料，也为虚拟现实技术提供了数字模型。     

烧伤及烧伤焦痂脂类对大鼠肝线粒体脂肪酸含量的影响

我们用气相色谱法分析了15％Ⅲ度烧伤、烧伤焦痂脂类(D1)和正常皮肤脂类(D’1)对大鼠肝线粒体脂肪酸含量的影响。结果表明烧伤后第7天大鼠肝线粒体不饱和脂肪酸含量显著下降和饱和脂肪酸含量上升。D1和D’1能使孵育体系中离体肝线粒体不饱和脂肪酸含量下降和饱和脂肪酸含量上升,但D1的作用大于D’1,使不饱和脂肪酸含量下降更明显。本文讨论了烧伤后和D1及D’1使线粒体不饱和脂肪酸含量下降的可能机理。     

核小体诱导BALB/c小鼠产生狼疮肾的研究

目的 了解核小体在系统性红斑狼疮(SLE)发病中的作用。方法 用蔗糖连续密度梯度离心法从新鲜鸡血红细胞中提取核小体,皮下免疫BALB/c小鼠,采集小鼠血清和肾脏标本。ELISA方法检测其IgG型dsDNA抗体和ANA抗体水平;直接免疫荧光检测小鼠肾脏IgG型免疫复合物的沉积情况;组织病理观察小鼠肾脏损伤情况。结果 核小体免疫后14d,BALB/c小鼠血清中开始出现IgG型dsDNA抗体和ANA抗体,其滴度随时间延长逐渐升高;核小体免疫后35d,小鼠肾脏出现大量IgG型免疫复合物沉积,光镜观察显示有明显肾脏损伤。对照组小鼠无明显自身抗体产生和肾脏病变。结论 核小体可以诱导正常小鼠产生SLE样征候群,提示核小体参与SLE的发病。     

细胞培养实验带教体会

细胞培养是生物医学一项常见的实验技术 ,实验带教的质量直接决定着本课程的教学质量。根据参与医学本科学生的实验带教过程中的一些经验体会 ,从如何引入设置问题的角度 ,探讨运用启发式教学提高细胞培养实验带教的质量 ,进行了一些尝试     

细胞培养实验带教体会

细胞培养是生物医学一项常见而重要的实验技术，与其它学科不同，细胞培养作为一项实验技术教学，其实验教学部分是课程教学的中心内容，所以实验带教的质量直接决定着本课程的教学质量，作参与医学本科学生的实验带教过程中的一些经验体会，从如何引入设置问题的角度探讨运用启发式教学提高细胞培养实验带教的质量，进行了一些偿试。