葡聚糖硫酸钠诱导炎症性肠病大鼠结肠黏膜紧密连接蛋白表达及其通透性的改变

目的：建立葡聚糖硫酸钠（DSS）诱导的大鼠炎症性肠病（IBD）模型,观察其肠上皮紧密连接蛋白表达以及结肠黏膜通透性的变化。方法：将雄性Sprague-Dawley（SD）大鼠随机分为对照组和IBD模型组,每组27只,通过使用3% DSS持续经饮水途径饲养大鼠6 d后恢复正常饮水14 d建立IBD模型,对照组自由饮水。分别于DSS处理后第7天、第14天和第21天观察结肠黏膜病理变化,第21天取结肠组织标本检测髓过氧化物酶活性;采用Ussing chamber检测结肠上皮通透性;通过real-time PCR和Western blot从转录水平和翻译水平分析肠上皮紧密连接蛋白表达。结果：IBD模型组大鼠出现腹泻、便血、体重下降,炎症集中在远端结肠,表现为隐窝脓肿,炎症细胞浸润。与对照组比较,IBD模型组大鼠结肠髓过氧化物酶活性显著增加（P<0.01）,肠上皮跨膜电阻抗值和跨膜电势差显著降低（P<0.01）,短路电流值明显增加（P<0.01）;Real-time PCR和Western blot的结果均提示正常大鼠尚未检测出claudin2的表达,IBD模型组 claudin2 mRNA及蛋白表达阳性;IBD模型组 occludin、claudin3、ZO-1 mRNA及蛋白表达水平均显著低于对照组（P<0.01）。结论：IBD大鼠结肠黏膜屏障功能受损,多种紧密蛋白表达改变,其中紧密连接蛋白表达变化可能在慢性修复期IBD屏障受损发病机制中起到重要作用。     

蛋白芯片技术在儿童幽门螺杆菌感染诊断中的应用

目的：探讨幽门螺杆菌（HP）抗体检测蛋白芯片技术在儿童HP感染诊断中的应用价值。方法：本院经胃镜检查的120例患儿,行快速尿素酶试验（RUT）及组织切片Giemsa染色。同时采用HP抗体蛋白芯片检测患儿血清中抗CagA、抗VacA、抗Ure、抗Hsp60及抗RdxA IgG抗体。以RUT及Giemsa染色两项均阳性作为HP感染阳性的诊断金标准。结果：120例患儿中,确诊HP感染阳性者60例。Ure抗体、Ure +CagA抗体、Ure +VacA抗体及Ure +CagA +VacA抗体均阳性对HP感染的诊断价值与金标准比较,吻合度和Kappa一致性检验均有统计学意义（P<0.001）。其中Ure+CagA抗体诊断的敏感性为81.7%,特异性为91.7%,准确度为86.7%,阳性预测值为90.7%,阴性预测值为83.3%,诊断HP现症感染最具临床价值。结论：HP蛋白芯片抗体检测,特别是Ure 结合CagA抗体检测,对诊断HP感染有较高的临床价值,可作为HP现症感染的诊断方法。     

DNA测序研究维生素D受体基因多态性与儿童克罗恩病相关性

目的：初步探讨维生素D受体基因多态性TaqI、BsmI、ApaI位点在儿童克罗恩病（CD）发病中的作用。方法：选取19例CD患儿为病例组,122例正常健康体检儿童为对照组。ELISA方法检测血清25羟维生素D3 [25(OH)D3]水平;基因测序方法检测两组维生素D受体基因多态性TaqI、BsmI、ApaI位点,比较两组之间基因型和等位基因分布频率。结果：病例组血清25(OH)D3水平（17.3±2.4 ng/mL）较对照组（26.9±2.1 ng/mL）明显降低,差异有统计学意义（P0.05）。结论：CD患儿存在低25(OH)D3水平;维生素D受体基因多态性TaqI、BsmI、ApaI位点与CD的发生无关。     

氧化应激在小儿反流性食管炎黏膜损伤中的作用

目的：胃食管反流引起食管黏膜损伤的机制尚不清楚,该研究主要探讨氧化应激在小儿反流性食管炎（RE）黏膜损伤中的作用。方法：对36例（年龄7个月至16岁）经胃镜检查诊断为RE的患儿,测定其食管黏膜氧化应激指标如丙二醛（MDA）、谷胱甘肽（GSH）和一氧化氮（NO）的含量和总超氧化物歧化酶（T-SOD）活力及蛋白质含量。另20例（年龄3～16岁）胃镜检查时未发现食管黏膜损伤者作为对照组。结果：食管黏膜蛋白质含量在两组间差异无显著性意义（P>0.05）;RE组MDA值为每毫克蛋白15.36±16.67 nmol,高于对照组的7.51±6.17 nmol,差异有显著性意义（P<0.01）;RE组T-SOD活力每毫克蛋白为30.43±35.09 U低于对照组的56.34±51.73 U,差异有显著性意义（P<0.05）;而GSH和NO的含量在两组间差异无显著性意义（P>0.05）。结论：RE时食管黏膜MDA含量升高,SOD活力水平降低,表明氧化应激损伤在小儿食管黏膜损伤中起重要作用。［中国当代儿科杂志,2009,11（6）：425-428］     

锌缺乏对生长期大鼠小肠黏膜形态和消化酶活性的影响

目的 了解锌缺乏对大鼠小肠黏膜形态和消化酶活性的影响.方法 3周龄刚断乳SD雄性大鼠30只,随机分成3组,每组10只:正常组自由食用含锌30μg/g正常饲料;缺锌组自由食用含锌0.4μg/g的缺锌饲料(参照AIN-76配方);配饲组食用正常饲料,但进食量限制为缺锌组大鼠前1天的进食量,各组自由饮用去离子水.每日清晨称大鼠体重并记录前1天的进食量,观察有无厌食、腹泻、皮炎、生长迟缓等缺锌的症状.2周后处死,检测血清锌的浓度;留取空肠黏膜作病理切片和HE染色,测定空肠黏膜绒毛高度和隐窝深度的比例;检测空肠黏膜刷状缘乳糖酶、γ谷氨酰转肽酶(GGT)和氨基寡肽酶(APN)的活性.结果 实验开始时正常组、缺锌组、配饲组大鼠的平均体重分别为(67.4±5.3)g、(64.7±4.8)g和(66.5±4.1)g,平均日进食量分别为(11.2±1.0)g、(11.6±1.6)g和(11.2±1.4)g,差异均无统计学意义.实验第7天缺锌组平均进食量与正常组和配饲组差异不明显,而平均体重则明显低于正常组和配饲组(P＜0.01);而2周实验结束时缺锌组平均体重为(112.0±11.5)g,明显低于正常组和配饲组的(164.0±15.9)g、(137.5±16.2)g;缺锌组平均进食量(13.4±5.1)g明显低于正常组的(18.2±2.4)g,差异有统计学意义(P均＜0.01).缺锌组血清锌的含量(733±231)μg/L明显低于正常组的(1553±159)μg/L和配饲组的(1457±216)μg/L(P＜0.01).三组大鼠空肠黏膜绒毛高度与隐窝深度比例分别为(2.98±0.5)、(2.77±0.5)和(2.81±0.7);乳糖酶活性分别为(26.1±15.0)U/mg、(27.4±12.8)U/mg和(40.8±18.5)U/mg,差异均无统计学意义.缺锌组空肠黏膜GGT为(12.7±6.5)U/g明显低于正常组的(19.1±10.4)U/g和配饲组的(18.5±7.7)U/g,但差异无统计学意义;缺锌组空肠黏膜APN(25.5±7.5)U/g明显低于正常组的(48.7±16.8)U/g和配饲组的(43.9±14.5)U/g,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 锌缺乏可致食欲下降、体重减轻,可引起空肠黏膜刷状缘肽酶活性下降,但对绒毛高度与隐窝深度的比例和乳糖酶活性影响不大,表明锌缺乏最先影响的可能是蛋白质的消化与吸收功能.

Abstract：

Objective In this study,a growing rat model of zinc deficiency was established to investigate the effect of zinc deficiency on intestinal mucosal morphology and digestive enzyme activity as well as to provide a scientific basis for zinc supplementation therapy in patients with diarrhea.Method Threeweek-old weaned Sprague-Dawley male rats(n =30)were randomly divided into 3 groups with 10 in each:rats in the control group(ZA)were fed with a normal diet containing 30 μg/g zinc; rats in the zinc deficient group(ZD)were fed with a zinc-deficient diet containing 0.4 μg/g zinc(refer to AIN-76 formula); and rats in the paired fed group(PF)were fed with a normal diet,but the food intake was limited to intake of rats in ZD group in the previous day.All rats were provided with deionized water for drinking.Their body weight was measured and the food intake during the previous day was recorded early in the morning of the following day.Symptoms of zinc deficiency,such as anorexia,diarrhea,dermatitis,and growth retardation,were observed. Two weeks later,the rats were sacrificed and serum zinc concentration was measured.Jejunal mucosa was taken for biopsy and was stained with hematoxylin and eosin(HE).The height ratio of the jejunal mucosal villi and crypts was measured.In addition,the activity of lactase in the jejunal mucosal brush border,γ-glutamyl peptidase(GGT),and aminopeptidase N(APN)were measured.Result The average weight of the rats in the ZA,ZD,and PF groups at the beginning of the experiment was(67.4±5.3)g,(64.7±4.8)g,and(66.5±4.1)g,respectively,and the average daily food intake was (11.2±1.0)g,(11.6±1.6)g,and(11.2±1.4)g,respectively.The intergroup differences were not significant.On the 7th day of experiment,no significant differences in average food intake were observed between the ZD group and the ZA and PF groups,but the average body weight in the ZD group was significantly lower than that in the ZA and PF groups(P＜0.01).At the end of the experiment(2 weeks),the average weight in the ZD group(112.0±11.5)g was significantly lower than that in the ZA(164.0±15.9)g and PF groups(137.5±16.2)g.The average food intake in the ZD group(13.4±5.1)g was significantly lower than that in the ZA group(18.2±2.4)g(P＜0.01).Serum zinc level in the ZD group(733±231)μg/L was significantly lower than that in the ZA(1553±159)μg/L and PF groups (1457±216)μg/L(P＜0.01).The height ratio of jejunal mucosa villus and crypt in the ZA,ZD,and PF groups was 2.98±0.5,2.77±0.5,and 2.81±0.7,respectively,and lactase activity was(26.1±15.0)U/mg,(27.4±12.8)U/mg,and(40.8±18.5)U/mg,respectively,without significant intergroup differences.The GGT activity in the jejunal mucosa in the ZD group(12.7±6.5)U/g was significantly lower than that in the ZA(19.1±10.4)U/g and PF groups(18.5±7.7)U/g,but the difference was not significant.The activity of APN in the jejunal mucosa in the ZD group(25.5±7.5)U/g was significantly lower than that in the ZA(48.7±16.8)U/g and PF groups(43.9±14.5)U/g(P＜0.01).Conclusion Zinc deficiency can cause loss of appetite,weight loss,and decreased activity of peptidase in the jejunal mucosal brush border.Zinc deficiency has little effect on the height ratio of the villus and crypt and lactase activity,thereby indicating that zinc deficiency may first affect protein digestion and bsorption.     

影响幽门螺杆菌阳性消化性溃疡患者病原菌根除效果的相关因素分析

目的 探讨影响幽门螺杆菌（Hp）阳性消化性溃疡患者病原菌根除效果的相关因素,为临床干预提供依据.方法 192例Hp阳性消化性溃疡患者接受Hp根除治疗,根据治疗效果将上述患者分为观察组与对照组,前者Hp根除成功,后者Hp根除失败.先采用卡方检验进行单因素分析,然后再采用非条件Logistic回归检验作多因素分析.结果 ①单因素分析结果显示两组患者年龄、吸烟习惯史、治疗依从性、阿莫西林耐药、克林霉素耐药、CYP2C19基因多态性相比,差异有统计学意义（P ＜ 0.05）.②多因素分析结果显示,吸烟习惯史、治疗依从性、阿莫西林耐药、克林霉素耐药、CYP2C19基因多态性是影响Hp阳性消化性溃疡患者病原菌根除效果的独立危险因素（P ＜ 0.05）.结论 根据相关因素分析结果,应采取相应的干预措施,以提高Hp阳性消化性溃疡患者病原菌的根除效果.     

儿童幽门螺杆菌感染根除治疗疗效分析

目的 了解儿童幽门螺杆菌（Hp）感染的临床根除治疗情况并分析原因。方法　以2012年1月至2015年10月浙江大学医学院附属儿童医院消化专科门诊的301例Hp感染患儿为研究对象, 判断Hp根除治疗后的临床根除率。 结果　初始治疗中OAC方案（奥美拉唑+阿莫西林+克拉霉素）根除率42.3%, 非OAC方案根除率56.7%, 两者间差异有统计学意义（P＜0.05）;含铋剂疗法根除率50.0%, 标准三联疗法根除率41.2%, 两者间差异无统计学意义（P＞0.05）。补救治疗中铋剂四联疗法根除率58.3%, 呋喃唑酮三联疗法根除率55.0%, 两者间差异无统计学意义（P＞0.05）。119株Hp对阿莫西林不耐药, 对克拉霉素和甲硝唑耐药率分别是27.7%和63.9%。结论　儿童Hp感染的临床根除率未能达到目标根除率80%,药敏试验为基础的治疗仍是儿童Hp感染根除治疗的首选。     

一氧化氮在慢传输型便秘大鼠中的作用及中药治疗评估

目的 了解一氧化氮(NO)在慢传输型便秘中的作用及中药治疗的疗效.方法 40只健康Wistar大鼠随机分成便秘组24只和对照组16只,分别饲喂含复方苯乙哌啶的混悬液和普通水,每5天记录一次大鼠大便粒数、大便干重及大鼠体重.饲养90 d后停药l周测定肠道传输功能,再进行2周的中药方剂(黄芪、白术、枳壳等)灌胃治疗.检测治疗前后结肠黏膜NO含量、神经元型NO合酶(nNOS)mRNA表达和内皮型NO合酶(eNOS)阳性细胞分布情况.结果 便秘组日均粪便粒数小于对照组,平均每粒粪便质量大于对照组,差异有统计学意义(P<0.001);便秘组首粒黑便排出时间为(420.3 ±129.5)min,慢于对照组的(337.2±74.7)min,差异有统计学意义(P<0.05).近端、中段、远端结肠黏膜nNOS mRNA表达水平和远端eNOS阳性细胞分布在各组问的若异无统计学意义,近、中段结肠黏膜NO含量在对照组与便秘组问的差异无统计学意义,但便秘组远端结肠黏膜NO含量经中药治疗后下降明显,差异有统计学意义(P<0.05).结论 慢传输型便秘大鼠结肠黏膜NO及其合酶的含量变化不大,以黄芪、白术、枳壳等组成的方剂能降低便秘大鼠远端结肠黏膜NO的合成,其治疗便秘的作用尚有待于验证.     

迷走神经C传入纤维通路在胃食管反流性咳嗽中的作用

目的探讨迷走神经C传入纤维通路在胃食管反流性咳嗽中的作用。方法普通级健康雄性Wistar新生大鼠45只,按随机数字表法分为4组：R1组、R2组、R4组大鼠各10只,R3组大鼠15只。R1组：阳性对照组（盐酸灌注组）;R2组：暂时性食管迷走神经C传入纤维变性型实验组;R3组：持久性食管迷走神经C传入纤维变性型实验组;R4组：阴性对照组（0.9%氯化钠溶液灌注组）。所有小鼠均喂养至8周,麻醉后按照以下方式完成建模：R1组用浓度0.1mol/L盐酸溶液连续灌注2周;R2组皮下连续注射50mg/kg辣椒素2d后,给予酸灌注2周;R3组在出生2d后,先皮下注射50mg/kg辣椒素,连续2d,8周龄后连续酸灌注2周;R4组连续食管内0.9%氯化钠溶液灌注2周。采用支气管激发试验检测大鼠吸入不同浓度的乙酰甲胆碱（Mch）后大鼠的肺顺应性及肺阻力的变化;HE染色观察4组大鼠气管组织、肺组织和食管组织的病理改变;RT-PCR法检测肺组织中神经激肽受体1（NK1R）、神经激肽受体2（NK2R）、神经激肽受体3（NK3R）mRNA表达水平及食管组织中5-羟色胺受体3（5-HT3R）、瞬时感受器电位香草酸受体1（TRPV1）和酸敏感离子通道3（ASIC3）mRNA表达水平。结果当Mch浓度升到0.25、0.5mmol/L时,R1组大鼠肺阻力增加百分比明显大于R2组、R3组、R4组（均P＜0.05）;当Mch浓度升到0.5mmol/L时,R1组大鼠动态肺顺应性减少百分比大于R2组、R3组及R4组（均P＜0.05）。HE染色发现,与R1组比较,R2、R3和R4组大鼠气管组织纤毛柱状上皮无明显增厚,炎症细胞浸润不明显;肺组织仅见少量炎症细胞浸润;食管组织鳞状上皮增厚不明显,固有层炎症细胞浸润较少等。各组大鼠肺组织中NK1R、NK2RmRNA表达水平比较差异均无统计学意义（均P＞0.05）,R3组大鼠肺组织中NK3RmRNA表达水平高于R1组、R2组和R4组,差异均有统计学意义（均P＜0.05）。各组大鼠食管组织中5-HT3R、TRPV1和ASIC3mRNA表达水平比较差异均无统计学意义（均P＞0.05）。结论灌注盐酸可引起大鼠食管黏膜损害及气道高反应性,持久性食管迷走神经传入纤维变性可引起大鼠肺组织NK3R水平升高,迷走神经C传入纤维通路可能在胃食管反流性咳嗽中发挥作用。     

肠神经系统递质和Cajal间质细胞在大鼠慢传输型便秘中的作用

目的：探讨肠神经系统递质一氧化氮（NO）、P物质（SP）、血管活性肠肽（VIP）和Cajal间质细胞（ICC）在慢传输型便秘中的作用。方法：32只健康Wistar大鼠随机分成便秘组和对照组,分别饲喂含复方苯乙哌啶的混悬液和普通水,每5 d记录1次大鼠大便粒数、大便干重及体重。饲养90 d后停药1周,测定肠道传输功能、结肠黏膜肠神经系统递质含量和ICC细胞的特异性标志物c-kit+细胞分布情况。结果：便秘组日均粪便粒数小于对照组,平均每粒粪便质量大于对照组,差异有非常显著性意义（P<0.01）;便秘组首粒黑便排出时间为430.2±132.1 min,长于对照组的337.2±74.7 min,差异有显著性意义(P<0.05)。远端结肠黏膜NO含量、SP水平、VIP阳性细胞分布在两组间差异无显著性意义,而c-kit+细胞在便秘组的数目少于对照组,差异有显著性意义（P<0.05）。结论：远端结肠黏膜ICC数量减少可能是慢传输型便秘大鼠的主要病理生理机制。［中国当代儿科杂志,2009,11（6）：481-485］