局部解剖学虚拟实验室的设计与应用

近年来随着招生规模的扩大,加之各医学院校相继开设局部解剖学实验课,尸源紧张,激发了我们利用校园网创办局部解剖学虚拟实验室,作为局部解剖实验教学的重要补充,使学生无论是在校还是在假期期间,都可以利用学校的网络资源或其他方式,通过互联网模拟尸体解剖操作。     

NIH3T3细胞中前脑啡肽原基因的稳定表达

目的:利用重组逆转录病毒载体pLNCX2-pENK,研究pENK基因在NIH3T3细胞中是否能够稳定表达.方法:用pLNCX2-pENK转染病毒包装细胞PT67,其病毒上清液感染NIH3T3细胞,检测pENK基因是否整合人NIH3T3细胞基因组中并通过RT-PCR及放射免疫法检测基因表达情况.结果:病毒基因组整合到NIH3T3细胞基因组中,并检测到目的基因转录及蛋白表达.结论:用逆转录病毒载体能将pENK基因整合到靶细胞NIH3T3基因组中,且该基因能长期稳定表达,为慢性疼痛的进一步治疗奠定了基础.     

左旋多巴对帕金森病大鼠结肠神经递质的影响

目的 探讨左旋多巴对帕金森病(PD)大鼠模型结肠平滑肌收缩性和神经递质的影响。方法 6-羟多巴胺损毁制备偏侧PD大鼠模型。动物分为对照组、PD组、左旋多巴组、PD+左旋多巴组4组;左旋多巴组和PD+左旋多巴组给予左旋多巴灌胃治疗35 d,对照组和PD组给予生理盐水灌胃治疗35 d;采用生物信号采集分析系统记录各组结肠平滑肌收缩频率和幅度;免疫组织化学SP法观察结肠肌间神经丛神经元型一氧化氮合酶(nNOs)、酪氨酸羟化酶(TH)和乙酰胆碱转移酶(CHAT)的变化;RT-PCR检测nNOS、TH、ChAT mR-NA在结肠的表达。结果 ①与对照组比较,PD组和PD+左旋多巴组收缩频率和幅度明显下降(P<0.05);与PD组比较,PD+左旋多巴组收缩频率和幅度增加(P<0.05)。②与对照组比较,PD组和PD+左旋多巴组nNOS免疫阳性产物积分光密度(IOD)和nNOS mRNA表达明显升高(P<0.05),TH免疫阳性产物IOD和TH mRNA表达明显降低(P<0.05);与PD组比较,PD+左旋多巴组nNOS免疫阳性产物IOD和mRNA表达降低(P<0.05),TH免疫阳性产物IOD和mRNA表达升高(P<0.05);各组ChAT免疫阳性产物IOD和CHAT mRNA表达无明显差异。结论 PD大鼠结肠收缩性下降,其机制可能与nNOS的增多和多巴胺的减少有关。左旋多巴可改善PD大鼠结肠收缩功能,可能与nNOS的减少和多巴胺的增多有关。     

大鼠闭合性脑损伤后星形胶质细胞的形态及GAP-43、ET-1 mRNA表达的变化

目的:探讨闭合性脑损伤后脑组织星形胶质细胞(Ast)形态学变化和生长相关蛋白(GAP-43)、内皮素-1(ET-1)mRNA表达的变化.方法:78只大鼠随机分为12个损伤组和1个假损伤对照组,每组6只.损伤组制备Marmaruu脑损伤模型.各组分别于伤后0h、0.5 h、1 h、1.5 h、2 h、6 h、12 h、36 h、48 h、60 h、66 h、72 h断头取脑,在脑干损伤灶周围取部分脑组织,常规固定切片HE染色,胶质纤维酸性蛋白免疫组化染色结合计算机彩色图像分析技术观察分析Ast形态,RT-PCR法检测GAP-43及ET-1 mRNA.结果:闭合性脑损伤后0.5 h Ast反应性肿胀最明显,以后随着时间的延长Ast反应性肿胀程度降低、肿胀Ast的数目减少.伤后6～72 h脑组织GAP-43 mRNA及ET-1 mRNA均较假损伤对照组增高(P＜0.01).结论:GAP-43及ET-1在脑损伤后血脑屏障损害的病理生理过程烫中起重要作用.     

pCDNA3.1(+)-PENK真核载体的表达与肿瘤镇痛

目的 构建人前脑腓肽原基因真核表达载体,将其转入NIH3T3细胞中表达,为晚期癌症的镇痛研究奠定基础.方法 用pCR的方法获得人脑腓肽原基因,构建人前脑腓肽原基因真核表达载体pCDNA3.1(+)-PENK,用脂质体2000包裹转染NIH3T3细胞,G418筛选稳定表达后检测培养液中脑啡肽的含量.结果 pCDNA3.1(+)-PENK真核表达质粒可以在NIH3T3细胞中高表达.结论 pCDNA3.1(+)-pENK可作为肿瘤镇痛基因治疗的实验研究的有力工具.     

基因枪介导人精子顶体膜相关蛋白32基因疫苗在小鼠骨骼肌中的表达

目的:观察pcDNA3.1( )-人精子顶体膜相关蛋白32(hSAMP32)基因疫苗经基因枪介导肌肉接种后在小鼠体内的表达.方法:BALB/c雌性小鼠6只,实验组鼠(4只)经后腿股内侧肌以基因枪多点注射重组质粒pcDNA3.1( )-hSAMP32 5μg,空载体对照组(1只)注射pcDNA3.1( )载体5 μg,空白对照组(1只)注射无菌生理盐水200μl.接种后第7 d取小鼠股内侧肌注射部位肌肉,RT-PCR和原位杂交法检测目的基因mRNA的表达,以自制抗血清进行免疫组织化学染色检测目的基因蛋白的表达.取小鼠心、肝、脾、脑、肾、胚胎组织,PCR扩增,行基因疫苗的安全性检测.结果:RT-PCR和原位杂交检测结果显示实验组小鼠注射部位肌肉组织有目的基因及其蛋白的表达,对照组未见表达.实验组小鼠心、肝、脾、脑、肾、胚胎的基因组DNA均未扩增出目的基因条带,说明外源性基因没有整合到宿主染色体.结论:该基因疫苗可在小鼠骨骼肌内有效、安全地表达.     

神经病理性疼痛小鼠背根神经节中SIRT3表达的变化

目的:探讨烟酰胺腺苷二核苷酸依赖性组蛋白去乙酰化酶Sirtuin3(SIRT3)在小鼠背根神经节(DRG)的表达、定位及其在神经损伤诱导的神经病理性疼痛状态下的表达变化。方法:选取27只成年雄性C57BL/6小鼠,随机选择其中3只作为正常组,用于检测正常生理状态下SIRT3在DRG中的表达;另24只随机分为假手术组和坐骨神经慢性压迫性损伤组(CCI组)。通过Von frey丝测试和热板测试检测小鼠机械痛和热痛行为,确定模型建立成功;随后运用免疫荧光标记和免疫印迹方法,检测SIRT3在CCI组和假手术组小鼠DRG中的分布及表达变化情况。结果:免疫荧光染色结果显示,正常生理状态下SIRT3与DRG大直径有髓神经元、肽能伤害性感受器和非肽能伤害性感受器标记物共标,与胶质细胞标记物不共标,提示SIRT3在DRG神经元而非胶质细胞中表达。CCI后DRG中SIRT3总蛋白水平降低,且大直径有髓神经元和非肽能伤害性感受器中SIRT3阳性细胞数减少,提示CCI导致了DRG大直径有髓神经元和非肽能伤害性感受器中SIRT3表达降低。结论:慢性神经损伤导致小鼠DRG大直径有髓神经元和非肽能伤害性感受器中SI...     

直肠癌术后局部复发42例分析

我国大肠癌发病率和死亡率逐年上升,在各种恶性肿瘤中,大肠癌的发病率已上升到第四位.而影响直肠癌治疗效果的主要原因是术后局部复发,而局部复发多在术后2年以内.1998年5月至2001年6月收治直肠癌患者中行根治术236例,术后局部复发42例（17.8%）,其中35例（83.33%）术后2年以内局部复发.本文将其与无复发194例比较分析如下.     

实验性大鼠脑损伤后脑组织中肿瘤坏死因子α基因表达的变化

目的:观察闭合性脑损伤后脑组织肿瘤坏死因子αmRNA表达变化,探讨对脑组织的影响。方法:实验于2004-09/2005-03在郑州大学基础医学院人体解剖学教研室神经分子生物学实验室进行,选择SD大鼠72只,随机分为实验组66只和对照组6只,实验组采用Marmarou法制备闭合性颅脑损伤模型,对照组不做任何处理。实验组又分为脑损伤后30min,1,3,9,12和1,2,3,4,5,6d11个时间点,每个时间点6只。应用反转录多聚酶链反应检测脑损伤后不同时间点脑组织中肿瘤坏死因子αmRNA表达。结果:72只大鼠全部进入结果分析。对照组未见肿瘤坏死因子α表达实验组损伤后30min及1h组与对照组无明显差别,9h～5d明显增加,12h～3d达到高峰,6d后开始下降。结论:大鼠闭合性脑损伤后脑组织肿瘤坏死因子αmRNA表达水平增加,是加重继发性脑损伤的重要因素。