兔出血症病毒VP60基因在昆虫细胞中形成病毒样颗粒及其特性

目的将兔出血症病毒（RHDV）VP60全长基因在昆虫细胞-杆状病毒系统中表达，验证重组蛋白形成病毒样颗粒（VLPs）的能力及其生物学特性，探讨VLPs作为检测抗原及亚单位疫苗的潜力。方法用Bac-to-Bac系统体外表达RHDVVP60全长基因。以免疫荧光及Western blotting检测蛋白表达情况及确定蛋白最佳表达条件；免疫电镜观察VLPs形态，并对VLPs的血凝性、免疫原性进行检测。结果SDS-PAGE电泳分析表明，表达的重组蛋白分子量大小约为68KDa，在免疫荧光、琼脂扩散、ELISA试验中均与RHD多克隆抗血清特异性反应；接种重组病毒的Sf9细胞裂解液在电镜下可观察到与RHDV形态相似的VLPs；该VLPs可凝集人“O”、“B”型红细胞，凝集可被RHD多克隆抗血清所抑制；含VLPs的Sf9细胞裂解液可不经纯化用作间接ELISA抗原，所建立的ELISA方法与进口商品化试剂盒相比，特异性良好，敏感性、检出率稍低；将含VLPs的细胞裂解液加氟氏佐剂免疫兔，HI效价可达1∶40，可经受致死量病毒攻击。结论RHDV-VLPs的获得及其良好的免疫原性，为RHD血清学检测试剂的标准化、亚单位疫苗研制应用奠定基础，同时在转移载体及RHDV受体方面研究亦有潜在应用价值。