人血管内皮细胞生长因子基因克隆、表达与纯化

目的研究人血管内皮细胞生长因子121(hVEGF121)基因在pET-24a(+)中的表达,获得高效表达、具有生物学活性的rhVEGF121。方法提取人原髓白血病细胞(HL60)总RNA,RT-PCR扩增hVEGF121基因,经DNA序列分析后,克隆于高效原核表达载体pET-24a(+),并转化到大肠杆菌B121(DE3)中,经IPTG诱导表达,超滤复性,DEAESephamseFastFlow阴离子交换和SephacryS-100分子筛色谱纯化后,以HUVEC测定其生物学活性。结果SDS-PAGE结果显示,目的蛋白质以包涵体形式存在,表达量达菌体总蛋白质的20%,纯化后rhVEGF121纯度达95%以上,生物学活性检测证实,具有刺激HUVEC增殖的功能。结论在原核系统中实现了hVEGF121的高效表达。     

天台乌药散治疗慢性浅表性胃炎65例

慢性浅表性胃炎属中医“胃脘痛”范畴。以病程迁延、反复发作、上腹部胀痛为特征。笔者根据中医“气滞血瘀”、“不通则痛”的理论,采用具有理气通络止痛的天台乌药散治疗肝气犯胃型的慢性浅表性胃炎65例,疗效显著,并与单用西药治疗的40例进行对照观察,现报告如下。     

支气管哮喘治疗体会

哮喘的治疗，《丹溪心法》有“哮喘专注于痰”，并提出“未发以扶正气为主，既发以攻邪气为急”的治则，至今仍具有指导意义。     

角质细胞生长因子-2的发酵及纯化工艺研究

目的研究重组人角质细胞生长因子 2 (rhKGF 2 )工程菌的高密度发酵和提纯工艺。方法通过增加培养基营养成分 ,发酵过程补加葡萄糖 ,获得高产率菌体。细菌裂解液经硫酸铵沉淀、分子筛、肝素亲和色谱和离子交换色谱等方法进行纯化 ,电泳分析结果。结果每 1L发酵液可获得菌体 12 .2g ,表达率达 2 8.7%。纯化后rhKGF 2纯度达 97%。结论rhKGF 2工程菌可获得高密度发酵。纯化工艺适用于rhKGF 2的大量制备     

VEGF与TNFR联合治疗股骨头坏死实验研究

目的 探讨应用血管内皮细胞生长因子(VEGF)与肿瘤坏死因子受体(TNFR)联合治疗股骨头坏死的治疗效果.方法 新西兰兔30只,26只兔耳缘静脉注射马血清,臀肌注射醋酸泼尼松龙,制造激素性股骨头坏死动物模型.动物随机分为4组:A组:VEGF/TNFR 治疗组;B组:VEGF治疗组;C组:对照组;D组:正常对照组.治疗组骨穿刺针行经皮注射血管内皮细胞生长因子脂质体及TNFR至股骨头.于治疗后,应用ELISA法测血清中TNF-α浓度的变化,病理组织学观察股骨头骨组织、骨髓造血组织及血管的变化.结果 VEGF/TNFR治疗组,TNF-α浓度及活性明显降低,HE染色结果 :VEGF/TNFR治疗组可见软骨细胞修复性增生,骨髓腔造血组织出现增生,栓塞的血管旁边出现新生的血管.结论 VEGF/TNFR联合治疗股骨头坏死能促进新血管生成及骨修复.     

大肠杆菌表达的人血管内皮细胞生长因子的复性与纯化研究

以包涵体的形式在大肠杆菌中表达人血管内皮细胞生长因子（VEGF121）,采用发酵罐进行工程菌的高密度发酵,得到菌干重46g／L,VEGF121包涵体4．5g／L。包涵体经洗涤、溶解、超滤法复性,得率为81％。复性后的目标蛋白经离子交换色谱及SepharcryS-100凝胶过滤色谱纯化,目标蛋白的纯度达到95％,目标蛋白的总得率31％。采用该工艺制备的VEGF121能刺激人脐静脉血管内皮细胞增殖,具有天然VEGF生物学活性。     

激素性股骨头坏死模型的建立及病理和影像学特征

目的建立兔激素性股骨头坏死动物模型,观察激素性股骨头坏死的病理及影像学特征。方法将20只健康新西兰兔随机分成两组,每组10只。A组:模型组,注射马血清及醋酸泼尼松龙造模;B组:正常对照组。采用X片及CT观察股骨头形态的变化,处死动物,标本进行常规组织病理学检查,并进行动脉墨汁灌注观察。结果X片及CT结果显示:造模组两侧股骨头密度不均一,关节面模糊;墨汁灌注血管造影显示股骨头血管显著减少;病理组织学观察结果显示:骨小梁骨细胞陷窝空疏,骨细胞核固缩,部分血管栓塞,骨髓腔内造血组织明显减少。结论马血清、激素诱导的激素性股骨头坏死动物模型病理变化、影像学改变符合临床典型股骨头坏死的特征,为进一步研究股骨头坏死发病机制及治疗方法提供基础。     

重组人血管内皮细胞生长因子工程菌高密度发酵工艺研究

目的建立人血管内皮细胞生长因子(BL21/pET-24a/hVEGF121)工程菌的高密度发酵工艺.方法采用发酵罐发酵,对影响工程菌生长及目的蛋白表达的因素如培养基、诱导时间及补料进行优化.结果采用M9复合培养基、活化至对数生长期时诱导4 h以及以甘油为碳源连续流加补料的条件发酵,可使菌体量提高至68 g/L,rhVEGF121的表达量达菌体蛋白总量的23%.结论该发酵工艺提高了工程菌的产量和rhVEGF121的表达水平.     

预刺激淋巴细胞的伸瘤运动

目的对淋巴细胞的伸瘤现象进行描述，并探讨伸瘤的一些影响因素及伸瘤运动与淋巴细胞功能的关系：方法分离外周血淋巴细胞．用PHA、IL-2、a—CD3、PHA＋IL-2预刺激后与口腔上皮癌细胞混合作用于倒置显微镜下直接观察淋巴细胞的粘（伸）瘤情况；取混合细胞经冷丙酮固定并Gimasa染色后在镜下观察淋巴细胞与瘤细胞作用情况，并于1、2、4、6h，取混合淋巴细胞于扫描电镜下观察伸瘤运动的发生、发展变化结果与未预刺激组比较．PHA组能提高粘瘤指数，IL-2．a-CD3、PHA＋IL-2均能提高淋巴细胞的粘（伸）瘤指数，以PHA＋IL-2对粘（伸）瘤率的提高作用最为显著．电镜下发现在粘（伸）瘤运动过程中，外周血淋巴细胞的形态也发生变化：结论淋巴细胞预刺激能促进伸瘤运动的发生．伸瘤运动可能是淋巴细胞的一种杀伤方式．