人发角蛋白人工腱体内降解的形态学及泛肽、溶酶体酶的活性变化

目的阐明人发角蛋白(HHK)人工腱植入体内后的降解过程。方法选取30只新西兰大白兔,随机分为术后第1、3、6、9、12周实验组和正常对照组。实验组行跟腱切除后植入HHK人工腱,按期进行常规形态学观察和泛肽组化及酸性磷酸酶(AcP)酶细胞化学观察。结果光镜形态学观察显示,人工腱植入后第1周出现人发毛小皮脱落、消失,人发呈均质状,表面附着巨噬细胞和多核巨细胞,到第3~6周可见降解成颗粒的人工腱被巨噬细胞和多核巨细胞吞噬。泛肽酶组化显示第1~3周,人发周围的巨噬细胞、多核巨细胞和成腱细胞内反应呈强阳性,周围组织呈中等阳性,到第9周,大部分人发被降解,泛肽酶反应在基质呈弱阳性,在腱细胞中呈中等阳性。电镜形态学观察显示毛发之间出现成腱细胞,并开始分泌蛋白多糖和前胶原蛋白,第9~12周,人工腱基本被降解,同时完成了新生自体腱的形成。酶细胞化学观察显示被吞噬的颗粒呈AcP酶反应阳性。结论在HHK人工腱的降解过程中,泛肽系统首先在细胞外将大体积的人发降解,降解后期细胞内泛肽系统通路和溶酶体通路分别对吞入的人工腱颗粒进行降解,且具有协同作用。     

人发角蛋白人工腱植入后泛素的表达及分布

目的 研究HHK-Ⅱ人工腱植入后不同时期泛素(ubiquitin)的表达与分布。方法 将兔后腿屈肌腱切除一定长度后用HHK-Ⅱ人工腱连接,不同时间后用免疫组织化学法检测泛素在人工腱及其周围组织中的表达与分布,并与正常肌腱组织对照。结果 在正常自体腱组织中,泛素低表达,且均匀分布;HHK-Ⅱ人工腱植入后3周,人工腱周围及其附近的新生腱组织中泛素表达为强阳性;植入后6周及9周泛素的表达明显下调 (P< 0.05),其中9周的泛素表达接近正常腱组织。即在人工腱降解期泛素表达为强阳性,自体腱形成期及之后的时期泛素的表达明显下调。结论 人工腱角蛋白的降解可能主要由泛素承担;人工腱周围新生组织中不正常蛋白的清除除有溶酶体参与外,泛素也起主要作用。     

五种抗氧化剂对细胞膜紫外线损伤的防护作用

目的 研究５种抗氧化剂对细胞膜流动性的防护作用。方法 用粘附式细胞仪（ＡＣＡＳ５７０）检测。结果与结论 紫外线（ＵＶＢ）照射能迅速增高ＮＩＨ３Ｔ３细胞中的脂质过氧化物。ＵＶＢ照射１０ｍｉｎ的ＮＩＨ３Ｔ３细胞（阳性对照组）膜流动性明显低于阴性对照组（正常ＮＨ３Ｔ３）细胞,不同ＵＶＢ照射）。超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）的保护作用不明显,加入该抗氧化剂的样本其细胞膜的流动性降低到与阳性对照组相同的数量级。维     

仿松质骨的胶原／纳米羟基磷灰石人工骨修复免大段骨缺损

背景：课题组自主研发一种仿松质骨生物活性纳水人工骨，在临床试验前进行系列的动物实验提供必需的技术资料。目的：评价自主研发的仿松质骨胶原／纳米羟基磷灰石人工骨的生物可降解性、骨引导性和骨诱导性。设计、时间及地点：随机对照动物实验，于2007-03—01／06-08在广东省医学实验动物中心完成。材料：纳米羟基磷灰石粉末通过共沉淀反应合成。将纳米羟基磷灰石粉末按一定比例加入胶原溶液中充分混合，然后冷冻干燥即得块状纳米人工骨。15只新西兰大白兔，随机分成3组，每组5只，分别为空白对照组、羟基磷灰石珊瑚组和纳米人工骨组。方法：所有动物局部麻醉后在侧尺骨造成10mm全缺损，纳米人工骨组和羟基磷灰石珊瑚组分别植入纳米人工骨、羟基磷灰石珊瑚，空白对照组不植入任何物质。在植入后30，60d，通过大体观察、X射线摄片、电子显微镜及组织学评价该人工骨的的生物相容性和骨诱导性。主要观察指标：纳米人工骨的超微结构，创面愈合情况，人工骨降解情况和缺损区骨组织再生情况。结果：该人工骨具有与天然松质骨相似的内连孔结构、孔隙率和孔径，这种结构有利于骨细胞的长入和血管新生；植入后30d可见纳米人工骨组缺损处被纳米人工骨修复，人工骨被彻底降解。植入后60d羟基磷灰石瑚瑚组未见骨修复和骨降解，仅见大量软组织再生。结论：自制仿松骨胶原／纳米羟基磷灰石人工骨可降解，成骨效果好，可替代自体骨移植修复大段骨缺损。     

人发角蛋白植入对大鼠脊髓损伤功能与形态的影响

目的：研究脊髓损伤后植入人发角蛋白（human hair keratin，HHK）对动物行为学影响及其对损伤脊髓的形态学影响与HHK本身的形态学变化。方法：采用重物下落撞击法制备大鼠脊髓损伤模型，在损伤处移植入HHK，分别于植入后5、10、15、20、25、30d进行行为学检查，于20d与30d脊髓进行形态学观察。结果：HHK植入后在30d内对大鼠的行为学影响与模型对照组没有统计学意义，但HHK可降解吸收融入损伤的脊髓组织，而受损伤的脊髓组织中可见大量胶质细胞、成纤维细胞与巨噬细胞浸润、神经纤维与髓鞘朗革非氏细胞。结论：HHK可能在脊髓损伤后的修复与重建中起作用。     

磷酸氢钙/胶原复合人工骨与羟基磷灰石/胶原复合人工骨修复大段骨缺损的比较

摘要 背景：羟基磷灰石及与其他成分的复合体已成为国际通用的骨修复材料,广泛用于临床治疗及实验研究,其生物相容性已得到充分验证,但其可降解性能差及诱导骨缺损再生能力有限也为大家公认。作者认为用羟基磷灰石作为骨诱导材料只是机械地模仿天然骨的成分,用其他钙磷盐作为无机成分有可能突破现有科研思维的定势,为人工骨的研发代来新的突破。 目的：比较磷酸氢钙/胶原复合人工骨和羟基磷灰石/胶原复合人工骨的骨传导性和骨诱导性。 方法：使用15只新西兰大白兔作为实验动物,制备左侧尺骨1 cm全缺损,分别植入磷酸氢钙/胶原复合人工骨、标准羟基磷灰石/胶原复合人工骨和合成羟基磷灰石/胶原复合人工骨。术后92 d拍X射线片后处死动物进行解剖观察及组织学观察。 结果与结论：磷酸氢钙/胶原复合人工骨组动物术后92 d的X射线照片显示缺损处由于骨组织增生完全愈合,处死动物进行解剖可见缺损处修复与未手术部位外观接近。组织切片可见缺损处形成骨板并完全骨化,骨单位明显,尚未形成明显的层状骨板,散布的骨窝中有骨细胞,中央管可见新生血管,未见人工骨残留,人工骨被彻底降解吸收。标准羟基磷灰石/胶原复合人工骨组植入92 d愈合处成骨较差,易折断。合成羟基磷灰石/胶原复合人工骨组植入92 d不愈合。实验表明南京脉迪森医药科技有限公司生产的磷酸氢钙/胶原复合人工骨(仿松质骨生物活性人工骨)的骨传导性和骨诱导性能明显优于羟基磷灰石/胶原复合人工骨。 关键词：磷酸氢钙;羟基磷灰石;人工骨;胶原蛋白;体内实验 doi:10.3969/j.issn.1673-8225.2010.47.005     

人发角蛋白导管修复周围神经缺损的实验研究

目的 探索用人发角蛋白（HHK）制成的导管对大段缺损的周围神经的修复效果。方法 将25只新西兰兔分成3组，对照组不接受手术；另2组切除胫神10mm，分别用缝合线（无HHK组）和HHK导管（HHK组）连接神经两断功能恢复快，解剖观察发现，神经两断端之间以及HHK导管的腔隙被白色新生组织充满，人发部分消失，残余的人发易脆易断。在光镜下可见人发周围大量再生的雪旺细胞和较幼稚的神经纤维，神经纤维无序 排列，人发被初步降解，术后1年，人发被完全降解。神经缺损部位修复完好。结论 HHK导管可诱导神经纤维再生，跨过10mm的缺损间隙，从而修复神经缺损，HHK是制作神经导管的较为理想的材料。     

仿松质骨生物活性人工骨修复兔尺骨大段缺损的动态实验研究

目的本研究的目的是研究由南京脉迪森医药科技有限公司生产的仿松质骨生物活性人工骨(磷酸氢钙/胶原复合人工骨)诱导大段骨缺损的动态过程。方法使用5只新西兰大白兔作为实验动物,所有动物被戊巴比妥钠溶液局部麻醉后在一侧尺骨造成1cm全缺损,在缺损处植入上述人工骨。在术后立即及0、7、14、21、35、42、49、55、62、69、76天拍X线照片,最后处死动物进行解剖观察及组织学观察。结果 X线照片显示术后7天可见缺损处骨组织大量增生,至术后49天可见缺损处合拢但尚未完全愈合,术后49至55天出现明显的过度增生及与桡骨粘连,此后经历增生与吸收的过程直至完全愈合,术后76天可见完全愈合。处死动物进行解剖可见与桡骨粘连处已被吸收,缺损处修复与未手术部位外观接近。组织切片可见缺损处形成骨板并完全骨化、骨单位明显、尚未形成明显的层状骨板,散布的骨窝中有骨细胞、中央管可见新生血管,未见人工骨残留,人工骨被彻底降解吸收。结论本实验表明南京脉迪森医药科技有限公司生产的仿松质骨生物活性人工骨可替代自体骨移植修复大段骨缺损,植入后3个月内即诱导自体骨再生而使缺损部位完全复原,是一种性能优异的骨修复材料。     

仿松质骨的胶原/纳米羟基磷灰石人工骨治疗兔股骨头坏死的动物实验

背景：自体松质骨因具有促进骨再生的3大要素：良好的骨引导性、骨诱导性和骨细胞,目前仍然是骨缺损修复的最佳移植材料。 目的：观察自主研发的仿松质骨纳米人工骨修复股骨头坏死的效果。 设计、时间及地点：随机对照动物实验,于2007-05/08在广东省医学实验动物中心完成。 材料：新西兰大白兔10只,体质量1.5~ 2.0 kg,用注入液氮的方法制备股骨头坏死模型。 方法：10只大白兔随机分为2组,每组5只。实验组：骨坏死处植入HA/CO纳米人工骨,对照组：坏死处不加任何植入物。 主要观察指标：在植入材料即刻及之后的7,14 d摄X射线观察、大体积及组织学观察评判骨坏死的发展及治愈情况。 结果：实验组骨坏死被抑制并被修复,所钻骨孔因松质骨和皮质骨的再生而完全愈合,纳米人工骨被逐渐降解吸收;而空白对照组骨坏死逐渐恶化,所钻骨孔处无任何骨组织再生。 结论：该纳米人工骨不仅能替代自体骨作为移植物,而且还具有抑制骨坏死发展的功能,可望成为临床治疗Ⅱ期及较早期股骨头坏死的替代疗法。     

紫外辐射损伤NIH_3T_3细胞的特征

从形态学和生物化学上研究了UVA、UVB和UVC对细胞的杀伤作用，现报告如下。1材料和方法用紫外线荧光灯（功率为15W、UVA365urn。UVB320urn、UVC254urn）产生紫外线。照射前弃去培养基、加入O．5mlHank液。经巴氏染色后在光镜下计数。每个样本重复做三张细胞涂片，每张涂片计数50O个细胞，分别算出正常细胞、坏死细胞和调亡细胞的百分率，以3种细胞百分率的平均值作图。DNA提取和水平电泳场倒转凝胶电泳（FIGE）FIGE由水平凝胶电泳槽和一个脉冲转换器组成。电泳液由Tris一乙酸盐和lmmolEDTA组成，pHS．6；电压为SOV；倒转…