CD40配体及其应用的研究进展

CD40配体是肿瘤坏死因子超家族中的一员,主要活化T细胞表面的共刺激分子,特别是CD4＋T细胞.CD40配体通过与其受体CD40的相互作用,在诱导机体产生免疫应答中起重要作用.此文就CD40L配体的结构和功能以及在病毒DNA疫苗和肿瘤治疗中的应用作一综述.     

CD40L对单纯疱疹病毒2型DNA疫苗的免疫增强作用研究

目的 研究重组质粒pcDNA3-Kan/CD40L辅佐HSV-2 DNA疫苗增强小鼠体液免疫和细胞免疫的作用效果,探讨其作为HSV-2 DNA疫苗佐剂的潜力。 方法 (1)构建鼠CD40L基因的重组真核表达质粒pcDNA3-Kan/CD40L。(2)体外细胞实验:检测重组质粒pCD40L刺激小鼠外周血淋巴细胞增殖情况和脾细胞分泌IFN-γ的能力。(3)体内动物实验:48只雌性BALB/c小鼠随机分为4个免疫组pK组、pgD组、pcCD40L+pgD组和pK+pgD组。小鼠后腿肌内注射,共免疫2次,间隔3周。末次免疫3周后,每组随机取4只小鼠进行致死剂量攻毒实验验证疫苗的保护作用。 ELISA检测小鼠血清抗HSV-2 IgG抗体水平和趋化因子RANTES;流式细胞术检测全血中CD4⁺和CD8⁺T细胞百分率以及分泌IFN-γ和IL-4的T细胞的百分率;MTS法检测小鼠脾脏T细胞的增殖能力。 结果 (1)体外实验结果:重组质粒pcDNA3-Kan/CD40L对小鼠外周血淋巴细胞的增殖能力和刺激脾细胞分泌IFN-γ的能力均显著大于空质粒pcDNA3-Kan(P<0.05)。(2)体内实验结果:小鼠血清抗HSV-2 IgG水平、趋化因子RANTES、脾淋巴细胞刺激指数和外周血CD4⁺T细胞数和分泌IFN-γ的Th1细胞数均高于其他免疫组(P<0.05)。pcDNA3-Kan/CD40L+pgD组预防小鼠感染HSV-2效果好于其他免疫组。 结论 (1)重组质粒pcDNA3-Kan/CD40L能够诱导外周血淋巴细胞增殖并刺激脾细胞分泌IFN-γ具有作为疫苗佐剂的潜力。(2)pcDNA3-Kan/CD40L可以辅助HSV-2 DNA疫苗诱导BALB/c小鼠产生特异性抗HSV-2的体液免疫和细胞免疫,具备作为HSV-2 DNA疫苗免疫佐剂的能力。     

检测痕量单纯疱疹病毒Ⅱ型荧光定量PCR方法的建立

目的 建立一种高敏感度的检测痕量单纯疱疹病毒Ⅱ型(HSV-2)DNA的实时荧光定量PCR方法,为针对HSV-2潜伏感染的治疗性疫苗和抗病毒药物疗效提供一个评价方法。方法 依据HSV-2糖蛋白D(gD)基因序列,使用序列比对软件,选取其保守区序列设计引物及TaqMan探针并进行筛选;以gD基因重组质粒pcDNA3-HSV-2 gD作为标准模板,对该检测方法的反应条件进行优化,提高其检测特异性、敏感度和重现性。结果 该检测方法特异性好,检测的最低拷贝数可达到2个拷贝,线性范围为2×10⁰~2×10⁸拷贝/反应,是普通PCR敏感度的10³倍。该检测方法组间和组内变异系数均低于5%,说明该检测方法具有良好稳定性。结论 本研究建立的TaqMan实时荧光定量PCR方法用于检测痕量HSV-2 DNA具有特异、敏感、定量和重现性好的优点。