排序方式： 共有2条查询结果，搜索用时 15 毫秒
1
1.
构建人基质细胞衍生因子(SDF-1)突变体SDF-1α/54/KDEL重组真核表达质粒,并考察其对T细胞性白血病细胞株Molt-4细胞表面受体CXCR4表达的影响,为尝试表型敲除肿瘤细胞CXCR4以抑制肿瘤的转移提供理论和实验依据.以SDF-WT-Gly×4-Dec/PET30a( )质粒为模板,用PCR法扩增出SDF-1α/54并将其亚克隆至真核表达质粒pEGFP-C3构建成真核表达载体pEGFP-C3/SDF-1α/54/KDEL.经酶切及测序验证后,脂质体介导转染入COS-7细胞,通过Western blot检测SDF-1α/54/KDEL的表达.电穿孔法将重组载体瞬时转染CXCR4高表达的Molt-4,并用流式细胞仪检测CXCR4含量的变化.DNA测序证明:读码框完全正确,重组真核表达载体含有SDF-1α/54基因和编码4肽KDEL的基因,Western blot证明融合蛋白能在COS-7细胞表达.电穿孔转染Molt-4细胞后发现,SDF-1α/54/KDEL可以显著降低胞膜表面CXCR4表达量.由此提示: KDEL介导的SDF-1α/54对Molt-4细胞CXCR4具有表型敲除作用,且此效应不受SDF-1α C端α螺旋缺失的影响. 相似文献
2.
目的制备表达基质细胞衍生因子(SDF-1)拮抗剂P2G与饰胶蛋白聚糖(decorin,DCN)嵌合基因的重组腺病毒,并检测其在HEK-293细胞中的表达情况。方法以前期构建的pET-30a+/P2G-DCN为模板,PCR扩增目的基因P2G-DCN,并克隆到穿梭质粒pAdTrack-CMV;然后将化学合成的SDF-1信号肽序列插入P2G-DCN的5’端,构建为重组穿梭质粒pAdTrack-CMV/SP-P2G-DCN;经PmeⅠ酶切线性化,与骨架质粒pAdEasy-1在大肠杆菌BJ5183中进行同源重组,筛选重组腺病毒质粒pAd-SP-P2G-DCN。PacⅠ酶切线性化的pAd-SP-P2G-DCN通过脂质体介导转染人胚肾转化细胞系HEK-293,包装并扩增重组腺病毒Ad-P2G-DCN。荧光计数确定病毒感染滴度,并以Western blot法检测嵌合蛋白P2G-DCN在HEK-293细胞中的表达情况。结果构建了携带P2G-DCN基因的重组腺病毒,该重组腺病毒感染HEK-293细胞后可高效分泌表达重组嵌合蛋白P2G-DCN。结论成功构建了重组腺病毒Ad-P2G-DCN,为后续系统研究Ad-P2G-DCN在肿瘤基因治疗中的作用奠定了实验基础。 相似文献
1