HPV18E7重组质粒的构建及在大肠杆菌中的表达优化

目的构建HPV18E7基因重组质粒,并探索其在大肠杆菌中的最佳表达条件。方法以提取的HeLa细胞株中的DNA为模板PCR扩增HPV18E7基因;将HPV18E7基因与载体pET-32a(+)连接为重组质粒pET-32a(+)-HPV18E7;将该重组质粒转入大肠杆菌BL21-DE3-pLysS细胞中,探索优化表达的条件,以获得大量HPV18E7致癌蛋白。结果 PCR扩增的目标基因大小序列与HeLa细胞中的HPV18E7基因的大小序列一致。用LB培养基,IPTG和乳糖诱导表达显示不同浓度、不同温度、不同诱导起始量等表达量均不高,尝试用ZYM-5052自动诱导培养基诱导,HPV18E7融合蛋白的表达量远远高于用异丙基-β-D-硫代吡唃半乳糖苷(IPTG)和乳糖诱导表达的表达量。结论测序正确的HPV18E7重组质粒在自动诱导培养基ZYM-5052中获得远远高于用异丙基-β-D-硫代吡唃半乳糖苷(IPTG)和乳糖诱导表达的HPV18E7融合蛋白。     

血管阻断术用于15例妇产科难治性出血

目的探讨血管阻断术治疗妇产科难治性出血的临床价值.方法采用对血管阻断术治疗产科难治性出血11例和妇科难治性出血4例的治疗效果进行回顾性分析.结果平均出血1 800ml,除1例院外已次全子宫切除外,14例保留子宫.5例并发DIC,1例出现肾功能损害.15例全部存活,其中4例子宫动脉结扎加宫腔填塞纱条,3例骼内动脉结扎,8例行骼内动脉或子宫动脉栓塞.15例均无血管阻断后并发症.结论血管阻断术治疗妇产科难治性出血可提高治愈率,降低死亡率,保留患者生育功能.     

肺炎克雷伯菌耐药靶标KPC-2的免疫原性和保护效果评价及保护机制初步研究

目的采用肺炎克雷伯菌耐药靶标KPC-2为抗原制备重组蛋白疫苗, 在小鼠肺炎模型中评价疫苗的免疫原性、保护效果和保护机制。方法利用大肠埃希菌原核表达系统表达肺炎克雷伯菌KPC-2蛋白, 经GST亲和层析对目的蛋白进行纯化;采用KPC-2蛋白制备疫苗, 经皮下注射免疫新西兰兔, 心脏采血分离血清, 用Protein G亲和层析纯化多克隆抗体, 同时运用调理吞噬杀菌试验检测抗体的体外杀菌活性。采用KPC-2疫苗免疫雌性BALB/c小鼠3次, 间接ELISA检测血清中特异性IgG抗体滴度。末次免疫后7 d, 通过气管插管构建小鼠肺炎克雷伯菌肺部感染模型, 感染1 h后尾静脉给予0.1 mg美罗培南治疗, 通过比较免疫组与佐剂组的生存率、细菌定植量和组织病理学差异, 以及给药组与生理盐水组生存率的差异评价疫苗的保护效果。采用KPC-2多克隆抗体被动免疫评价抗体的保护效果。结果 KPC-2免疫组小鼠血清特异性IgG水平显著高于对照组(t=4.325,P<0.05), 免疫组生存率显著高于对照组[70% (7/10)vs 10% (1/10), P<0.05];免疫组小鼠肺组织炎性程度及...     

通过改变体位转胎位成功2例报道

我在西藏昌都地区类乌齐县医院援藏期间,遇到了2例通过改变孕妇体位转胎位成功的病例,现报道如下.     

电视胸腔镜治疗食管、贲门癌5例

随着电视胸腔镜外科(Ｖｉｄｅｏ-ａｓｓｉｓｔｅｄｔｈｏｒａｃｉｃｓｕｒｇｅｒｙ,ＶＡＴＳ)技术的发展,食管、贲门疾病经ＶＡＴＳ治疗已逐步成为现实。1997年11月～1998年10月,我院采用美国Ｂａｓｔｅｒ公司生产的胸腔镜进行了ＶＡＴＳ手术5例,其中食管癌4例、贲门癌1例,手术完成顺利,术后恢复快,随访3～12月,效果满意,无任何并发症,现报告如下。1　临床资料例1,男,58岁,贲门癌。贲门部肿块50ｃｍ×40ｃｍ大小,累及食管下段20ｃｍ,食管下段旁2枚直径08ｃｍ、05ｃｍ肿大淋巴结。手术切除近端半胃,行食管胃胸腔内吻合。例2,男,55岁,食管中段…