人三维体外血管模型的构建

目的 利用HUVEC建立人体外三维血管模型。方法原代培养HUVEC，利用Ⅰ型胶原蛋白建立三维系统，在上面培养HUVEC，随着胶原蛋白的降解，人体外三维血管模型逐渐形成，HE染色三维血管样结构。结果HUVEC成功培养，人体外三维血管模型顺利构建。结论利用Ⅰ型胶原蛋白建立的三维系统，能成功构建人体外三维血管模型。     

HESR1基因在血管新生中作用的初步研究

目的研究转录因子HESR1在血管新生中的作用。方法检测内皮细胞激活状态HESR1表达的影响,克隆HESR1基因,转染到HUVEC,绿色荧光和PCR观察HESR1在内皮细胞的表达,流式细胞仪检测它对血管内皮细胞增殖,boyden小室检测对细胞迁移的影响,建体外二维血管模型,观察HESR1对血管形成的影响。结果内皮细胞激活状态HESR1的表达下降,HESR1基因能抑制内皮细胞的增殖和迁移,减少血管新生。结论HESR1基因通过抑制内皮细胞的增殖和迁移,使内皮细胞从激活状态转入安静状态,减少血管的形成,维持血管的稳定状态。     

Notch1蛋白在胚胎干细胞向神经细胞诱导分化过程中的表达

背景:胚胎干细胞是体内各种成熟细胞的"种子"细胞,是神经移植和发育基因功能研究的有利工具.Notch1信号足多种神经细胞有序分化的关键性调控通路,目前对其在胚胎干细胞诱导分化过程中的动态表达尚无报道.目的:探讨胚胎干细胞向神经细胞定向诱导分化过程中,跨膜信号分子Notch1蛋向的表达.设计、时间及地点:细胞观察,于2003-10/2004-10在中山大学中山眼科中心完成.材料:中山大学实验动物中心自建BALB/C小鼠胚胎干细胞Ⅵ株,具备XY染色体,正常核型比例80%以上,由中山大学中山眼科中心黄冰教授惠赠.方法:胚胎干细胞复苏后,加入含20%胎牛血清、106 IU/L小鼠白血病抑制因子的高糖DMEM细胞培养基,置于37℃,5%CO2培养箱中,两三天常规消化传代.向传至11代的胚胎干细胞中加入含20%胎牛血清、5×10-7mol/L维甲酸的高糖DMEM诱导分化培养基,设立诱导1,5,9d 3个观察时间点.主要观察指标:倒置相差显微镜观察细胞形态变化.免疫荧光化学检测成熟神经元标志性抗原MAP-2的表达.免疫细胞化学、Western Blot法及流式细胞术检测Notch1蛋白的表达.结果:胚胎干细胞呈克隆样生长,至诱导第9天大部分克隆周围为单一密集的神经网络.随着诱导时间延长,胚胎干细胞分化出的MAP-2阳性神经细胞数逐渐增多.胚胎干细胞克隆内的细胞几乎均呈Notch1强阳性或刚性表达,诱导分化后Notch1蛋白的表达随时间延长而逐渐降低(P<0.01).结论:在胚胎干细胞向神经细胞的诱导分化过程中,Notch1信号逐渐关闭,提示Notch1可能对胚胎干细胞向神经细胞的特异性分化起重要作用.     

GM-1对大鼠视网膜缺血再灌注损伤的保护作用

目的 探讨单唾液酸神经节苷脂（monosialoganglioside,GM-1）对大鼠视网膜缺血冉灌注损伤后视网膜组织及超微结构的保护作用.方法 健康成年Wistar大鼠75只,随机分为3组：正常组5只、NS组35只,GM-1组35只.正常对照组不加任何处理因素,NS组和GM-1组通过升高眼压造成视网膜缺血60 min,分别于缺血前12 h、1 h及缺血结束时3次腹腔注射NS 3mL/kg或GM-1 3mL/kg（10 mg/mL）,并于再灌注0 h（单纯缺血后）、1 h、6 h、12 h、24 h、3 d和7 d共7个时间点取双眼眼球,每时间点5只,HE染色观察视网膜组织结构并测量视网膜内层平均厚度（mean thickhess of the inner retinal layers,MTIRL）,透射电镜观察视网膜超微结构变化.结果 缺血再灌注后,内层视网膜依次表现出水肿、凋亡、萎缩的损伤过程.GM-1可明显减轻其水肿和萎缩的程度,并减少凋亡的发生.结论 GM-1对视网膜缺血再灌注损伤具有明确的保护作用,可能是其有效治疗药物.     

GM-1对大鼠视网膜缺血再灌注损伤后NF-кB表达的影响

目的：观察神经节苷脂(monosialoganglioside，GM-1)对大鼠视网膜缺血再灌注损伤后视网膜结构的保护作用及对核因子-κB(nuclear factor-kappaB, NF-κB )表达的影响，探讨其可能的保护机制。方法：健康成年Wistar大鼠75只，随机分为3组：正常组5只、NS组35只、GM-1组35只。正常组不加任何处理因素，NS组和GM-1组通过升高眼压造成视网膜缺血60min，分别于缺血前12、1h及缺血结束时3次腹腔注射NS 3ml·kg-1或GM-1 3ml·kg-1，并于再灌注0(单纯缺血后)、1、6、12、24、72和168h共7个时点取双眼眼球，每时间点5只。HE染色观察视网膜组织结构并测量视网膜内层平均厚度(mean thickness of the inner retinal layers, MTIRL)，免疫组化SP法检测NF-κB的表达并计算阳性细胞率。方差分析法进行统计处理。结果：大鼠视网膜缺血再灌注后，内层视网膜相继出现水肿和萎缩。再灌注后大鼠视网膜内层NF-κB迅速激活，随后其表达逐渐下降。GM-1可明显减轻视网膜缺血再灌注后的组织损伤，并显著抑制NF-κB的活化。结论：NF-κB活化可能是视网膜缺血再灌注损伤的早期始动因素。GM-1对视网膜缺血再灌注损伤具有明确的保护作用，对NF-κB的抑制可能是其保护机制之一。     

RNA干扰HESR1基因质粒体的构建

目的:构建HESR1基因的RNA干扰(RNAi)载体。方法:根据人HESR1的基因序列设计短双链两条,人工合成后,连接到RNAi-ReadypSIREN-RetroQZsGreenVector载体中,构成两个HESR1/RNAi重组质粒,转入内皮细胞,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测两质粒对HESR1表达的影响,以确定HESR1/RNAi重组质粒进行下一步研究。结果:两质粒都有沉默HESR1基因的作用,1号作用更强烈一些,确定使用1号pSIREN/HESR1质粒进行下一步研究。结论:HESR1/RNAi重组质粒的成功构建,为下一步研究奠定基础。     

Ⅰ型角膜前弹力层营养不良的组织病理学与超微结构研究

目的：探讨Ⅰ型角膜前弹力层营养不良(eomeal dystrophy of Bowmanlayer,CDBI)的组织病理学和超微结构改变。方法：取2家系中4例CDBI患者板层或穿透性角膜移植术后的病变角膜,部分标本HE及特殊染色后行光学显微镜观察,部分标本做超薄切片,透射电子显微镜观察超微结构。以2例正常角膜组织标本为对照。结果：CDBI患者角膜上皮细胞微绒毛减少或消失,基底细胞间有小块高电子密度物质,基底细胞出现凋亡现象,前弹力层及前部基质中可见大量棒状高电子密度沉淀物。结论：CDBI患者角膜有特征性的结构改变,可能是造成其临床症状的原因之一。     

Good's综合征合并支气管扩张1例并文献复习

回顾性分析1例胸腺瘤相关免疫缺陷综合征(Good's综合征)合并支气管扩张病例,结合最新文献从发病机制分析Good's综合征患者的常见临床症状、实验室检查结果及治疗策略.因支气管扩张、反复感染就诊时,应警惕其免疫状态,详细了解病史.若当患者有胸腺瘤病史应考虑Good's综合征作为鉴别诊断.Good's综合征患者极易出现...     

Notch-Delta信号系统与神经胶质细胞的发育

Notch-Delta信号系统是一个在生物进化中起重要作用的古老而保守的机制。通过Notch受体-Delta配体的相互作用产生旁侧抑制效应,控制细胞对各种内、外源性发育信息产生反应的能力,最终导致细胞特异性分化命运的决定,是一种影响胚胎发育、器官形成和形态发生的普遍机制,是近年来发育学、分子生物学、遗传学等的研究热点。最近发现,除了抑制神经元分化以外,Notch鄄Delta系统还可以促进神经胶质细胞的产生,本文对Notch鄄Delta及其在神经胶质细胞发生发育中的研究进展作一综述。     

RBCD患者角膜上皮细胞的凋亡

目的观察Reis Bücklers角膜营养不良（RBCD）中角膜上皮细胞的凋亡现象,探讨凋亡在RBCD发病机制中可能的作用。方法2家系中4例RBCD患者(经基因检测均明确为TGFB I基因R124L突变),取其板层或穿透性角膜移植术后的病变角膜,HE及特殊染色后行光学显微镜观察;超薄切片后行透射电子显微镜观察超微结构;采用脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法（TUNEL）检测病变角膜中凋亡细胞的表达。以4例正常角膜组织标本为对照。结果RBCD患者角膜上皮细胞微绒毛减少或消失,基底细胞间有小块高电子密度物质,基底细胞出现凋亡现象,前弹力层及前部基质中可见大量棒状高电子密度沉淀物。TUNEL染色发现角膜上皮基底细胞层凋亡细胞,凋亡细胞阳性率为（15.02±3.09）%,显著高于正常对照角膜（P＜0.01）。结论RBCD患者存在角膜上皮基底细胞凋亡,可能是造成角膜前弹力层异常沉淀及其临床症状的原因之一。