人羊膜间充质干细胞培养上清通过环状RNA⁃0001649/miR⁃203a/VEGFA/MMP9信号通路促进血管生成

目的：探究人羊膜间充质干细胞（human amnion?derived mesenchymal stem cell,hAMSC）条件培养上清（conditioned medium,CM）是否通过环状RNA?0001649（circ?0001649）促进人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cell,HUVEC）血管生成及其可能的机制。方法：将HUVEC分为对照组、CM刺激组、circ?0001649敲低后CM刺激组（si?circ?0001649+CM刺激组）、敲低对照加CM刺激组（si?NC+CM刺激组）,检测各组HUVEC的血管生成能力和迁移能力,以及血管内皮生长因子A（vascular endothelial growth factor A,VEGFA）、基质金属蛋白酶 9（matrix metalloproteinase 9,MMP9）的水平。同时通过敲低circ?0001649后转染miR?203a?inhibitor进行拯救实验验证hAMSC?CM促进HUVEC血管生成的作用机制。结果：hAMSC培养上清（hAMSC?CM）明显提高HUVEC的血管生成和迁移能力,促进VEGFA和MMP9以及细胞内circ?0001649 的表达。敲低circ?0001649后降低了hAMSC?CM对HUVEC血管生成和迁移能力的影响。生物信息学分析以及拯救实验发现circ?0001649可以通过结合miR?203a,减少miR?203a对VEGFA以及MMP9的抑制作用,促进hAMSC?CM对HUVEC的成血管和迁移能力。结论：hAMSC?CM可上调HUVEC细胞内circ?0001649表达,通过其竞争性结合miR?203a,促进VEGFA和MMP9表达进而发挥促血管生成作用。     

环状RNA-BIRC6促进血管新生的作用研究

目的 分析人脐静脉内皮细胞(HUVEC)经人羊膜间充质干细胞上清(hAMSC-CM)诱导后差异表达的circBIRC6在血管新生中的作用。方法 运用实时定量PCR检测HUVEC中circBIRC6的表达水平;设计针对circBIRC6的siRNA和过表达质粒,通过转染构建敲减和过表达circBIRC6的HUVEC细胞模型;通过Transwell小室迁移实验、成管实验、创愈划痕实验检测HUVEC的血管新生能力。结果 hAMSC-CM诱导HUVEC中circBIRC6的表达上升;实时定量PCR验证了HUVEC敲减和过表达circBIRC6细胞模型的可靠性;在Transwell小室迁移实验、成管实验、创愈划痕实验中,敲减circBIRC6降低了HUVEC的小室细胞迁移率、总成管长度和划痕迁移率,而过表达circBIRC6则反之。结论 本研究初步阐明circBIRC6促进HUVEC血管新生的作用,并揭示hAMSC-CM可能通过上调HUVEC中circBIRC6的表达进而促进血管新生。