RNA干扰靶向抑制PI3K p85α蛋白对大肠癌细胞侵袭与转移的影响

目的:探讨RNA干扰靶向抑制PI3K p85α蛋白表达对大肠癌细胞侵袭与转移的影响。方法:设计4条shRNA干扰载体及1条阴性对照载体,分别稳定转染大肠癌LoVo细胞。用蛋白质印迹法筛选出一组抑制效率最高的细胞进行细胞划痕实验和Transwell实验。结果:转染shRNA/324干扰载体的LoVo细胞PI3K p85α蛋白表达降低最明显,抑制率达77%,选择该组细胞作为有效干扰组进行后续实验。细胞划痕实验显示,干扰组细胞的划痕愈合能力明显低于对照组细胞 (P<0.05)。Transwell实验显示,干扰组细胞的穿膜细胞数明显少于对照组细胞 (P<0.05)。结论:PI3K p85α蛋白表达缺失可明显降低大肠癌LoVo细胞的迁移运动能力,PI3K p85α可能成为治疗大肠癌转移的新靶点。     

阿来替尼治疗罕见EML4-ALK融合肺上皮样炎性肌纤维母细胞肉瘤1例

<正>患者男性,31岁。因咳嗽、胸闷、胸痛10余天,2020年12月就诊于南方医科大学附属广东省人民医院。既往患者吸烟史15年,10支/天。PET-CT示：右肺下叶肿块灶,区域多组淋巴结增大,肝内多个结节,左侧肾上腺肿物,胃小弯淋巴结肿大,全身多发骨质破坏,糖代谢增高,考虑右肺下叶来源恶性肿瘤并全身多发转移（图1）。神经元特异性烯醇化酶（neuron-specific enolase,NSE） 124.30 ng/mL。     

PI3K p85α在大肠癌癌变过程中的表达及意义

目的 研究磷脂酰肌醇3-激酶p85α亚单位(PI3K p85α)在大肠癌癌变过程中,即大肠正常组织、大肠腺瘤、大肠癌中的表达及意义.方法 用免疫组织化学二步法检测试剂盒检测116例大肠病变组织标本中PI3K p85α的表达情况,用等级相关的秩和检验分析PI3K p85α在大肠病变组织中表达的意义及其与临床病理特征间的关系.结果 PI3K p85α蛋白在大肠癌癌变过程中表达阳性率呈递增趋势,差异有明显统计学意义(P<0.05).统计分析显示在大肠癌中PI3K p85α蛋白与患者的肿瘤分化程度无关,但是与临床分期相关 (P<0.05).结论 在大肠癌的发生发展过程中存在PI3K p85α蛋白的异常表达并与临床分期密切相关,PI3K/AKT信号传导通路在大肠癌癌变过程中有重要作用.     

人HOXA1 3'-非翻译区荧光素酶报告基因载体的构建及鉴定

目的:针对人同源异型盒A1(HOXA1)基因的3'端非翻译区(3'-untranslated region,3'-UTR)构建HOXA1的荧光素酶报告基因载体,对其克隆进行鉴定并挑选出正确的克隆,为后续功能研究提供基础。方法:PCR扩增包含HOXA1 3'-UTR的DNA片段,克隆至荧光素酶载体psiCHECK-2,构建HOXA1 3'-UTR荧光素酶报告基因载体,经Not I和Xho I双酶切后测序进行鉴定。结果:克隆获得的DNA片段大小及序列与GenBank报道的一致,且插入方向正确。结论:成功构建了含hURAT1基因3'UTR区的荧光素酶报告载体,可用于后续功能研究。     

同源异型盒基因HOXA5对小细胞肺癌细胞多药耐药性的影响

目的研究同源异型盒基因HOXA5的变化对小细胞肺癌多药耐药性的影响,并探讨其作用机制,评价其作为小细胞肺癌
临床治疗靶点的可能性。方法实时荧光定量PCR 和免疫印迹法检测小细胞肺癌细胞H69 和多药耐药细胞株H69AR中
HOXA5 mRNA和蛋白水平,采用表达质粒和siRNA升高或降低HOXA5基因表达水平,CCK8法分析细胞对小细胞肺癌常用
化疗药物顺铂（Cisplatin,DDP）和足叶乙甙（Etoposide,VP-16）敏感性的变化。结果H69细胞中HOXA5 mRNA水平是耐药细
胞株H69AR中的8.99倍。HOXA5 siRNA显著降低H69细胞中HOXA5的表达水平,降低了H69细胞对DDP和VP-16的敏感
性。将HOXA5表达质粒稳定转染入H69AR细胞,建立稳定转染细胞株,细胞对DDP和VP-16敏感性增加。结论HOXA5可
能参与了小细胞肺癌耐药过程,可能会成为小细胞肺癌临床治疗的新靶点。
     

大肠癌转移相关基因FMNL2的生物信息学分析

目的:研究各转移能力不同细胞系中的基因表达差异.方法:各转移能力不同的细胞系SW480、SW620、SW480/M5标本的mRNA与表达谱芯片杂交,获得表达差异基因.用生物信息学方法对基因FMNL2进行初步分析,以及用荧光定量PCR检测了转移能力不同的细胞系SW480、SW620、SW480/M5中FMNL2的表达.结果:表达谱芯片共找出了422条差异表达基因.用生物信息学方法分析了表达上调的基因FMNL2的结构、染色体定位、编码蛋白质的理化性质、亚细胞定位等信息.对FMNL2蛋白的多物种相似蛋白进行了系统进化分析,基本明确了该基因编码一种在胚胎和肿瘤细胞中高表达、进化中保守的核蛋白,以及证实了该基因在转移能力高的SW620和SW480/M5中比SW480中要高.结论:生物信息学分析表明,FMNL2是一个有研究价值的癌相关蛋白.这个蛋白可能参与正常的胚胎发育,但也与肿瘤转移能力有一定的关系.     

RNA干扰靶向抑制PI3Kp85α蛋白对大肠癌细胞增值的影响

目的:探讨RNA干扰靶向抑制PI3K p85α蛋白表达对大肠癌细胞增值的影响。方法:设计4条shRNA干扰载体及1条阴性对照载体,分别稳定转染大肠癌SW480细胞。用Western Blot筛选出一组抑制效率最高的细胞进行CCK-8细胞增值实验。结果:转染shRNA/324干扰载体的SW480细胞PI3K p85蛋白表达显著降低,抑制率约90%,选择该组细胞作为有效干扰组。CCK-8细胞增值实验显示,接种48h、72h及96h后,干扰组细胞生长速度明显低于对照组细胞(P<0.05)。结论:PI3K p85α蛋白表达缺失可降低大肠癌SW480细胞的增值速度,PI3K p85可能是大肠癌靶向治疗的新靶点。     

Cdx2蛋白在不同亚型肠上皮化生中的表达及其与H.pylori感染的关系

目的探讨胃黏膜肠上皮化生（intestinal地metaplasia,IM）中尾型同源异型盒基因2（caudal type homeobox genes2,Cdx2）蛋白的表达及其与幽门螺杆菌（helicobacter pylori,H.pylori）感染的关系。方法选取内镜下活检的18例正常胃黏膜和53例IM胃黏膜。采用高铁二铵-爱先蓝-过碘酸雪夫反应（HID-AB-PAS）将胃黏膜IM分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型,然后用Cdx2单克隆抗体进行免疫组织化学染色,检测Cdx2在正常胃黏膜及不同亚型IM中的表达。采用一分钟快速尿素酶实验及甲苯胺蓝染色检测H．pylori感染。结果Cdx2蛋白在正常胃黏膜中不表达,IM中Cdx2阳性表达率为83．02％（44／53）,其中Ⅰ型IM阳性率为95．45％（21／22）。Ⅱ型为83．33％（15／18）,Ⅲ型为61．53％（8／13）,三者间Cdx2蛋白表达有显著性差异（P=0．036）。IM中H．pylori感染阳性率为47．17％（25／53）,其中Ⅰ型IM中H．pylori感染阳性率为27．27％（6／22）,Ⅱ型为55．56％（10／18）,Ⅲ型为69．23％（9／13）,三者间Mpylori感染率亦有显著性差异（P=0．038）。Cdx2蛋白表达主要集中于H．pylori感染阴性者,但H．pylori感染阳性者和阴性者Cdx2表达无统计学差异（P〉0．05）。结论Cdx2蛋白异常表达可能参与了胃黏膜IM向胃癌的转变,检测其表达有助于预测胃黏膜IM向胃癌转变的可能性。