2017-2019年贵州省结核分枝杆菌多位点序列分析及与耐药的相关性

目的了解贵州省2017-2019年结核分枝杆菌分离株的等位基因型别特征及其与耐药的相关性,为贵州省结核病的防治提供科学依据。方法收集贵州省毕节市、安顺市、仁怀市和威宁县4个国家级结核病耐药监测点2017-2019年分离的52株结核分枝杆菌,采用基于7个管家基因位点(recX、rpsl、rmlC、rpmG1、mprA、gcvH、ideR)的MLSA技术进行ST分型。选用异烟肼(INH)、链霉素(SM)、乙胺丁醇(EMB)、利福平(RFP)、卡那霉素(KAM)和氧氟沙星(OFX)6种抗结核药物对52株结核分枝杆菌进行药敏试验,分析菌株耐药与ST型别的相关性。结果52株结核分枝杆菌经MLSA分为11个ST型,其中优势ST型为ST11型(占32.7%)、ST1(占23.1%)和ST5型(占15.4%)。药敏试验显示,52株结核分枝杆菌总耐药率为42.3%(22/52),其中单耐药率为15.4%(8/52),耐多药率为19.2%(10/52),多耐药率为3.8%(2/52)。基于7个管家基因位点的聚类分析和最小间距图分析结果显示,ST2、ST4和ST6型菌株全部为敏感菌株,ST7和ST8型菌株均为多耐药菌株,ST9型菌株均为耐多药菌株,其余ST型由耐药和敏感菌株构成。结论贵州省2017-2019年结核分枝杆菌以ST11、ST1和ST5型为主,ST型呈现多样性。菌株以单耐药和耐多药为主,ST型与耐药具有一定的相关性。     

Caspase-11非经典炎症小体对问号钩端螺旋体诱导J774A.1细胞炎性细胞因子分泌水平的影响

目的:了解caspase-11非经典炎症小体对问号钩端螺旋体(钩体)诱导J774A.1细胞分泌炎性细胞因子的影响。方法:采用钩体56601株感染小鼠单核-巨噬细胞株(J774A.1)建立细胞模型,应用real-time RT-PCR检测J774A.1细胞caspase-11、IL-1β、IL-1α和IL-18 mRNA水平,采用ELISA定量检测J774A.1细胞上清液中caspase-11、IL-1β、IL-1α和IL-18水平。结果:Real-time RT-PCR检测结果显示,钩体感染J774A.1细胞1、2、4、8、12和24 h后,caspase-11 mRNA水平分别为未感染细胞的5.12、14.21、8.94、14.06、18.58和0.93倍,caspase-11阻断后分别下降至0.10、0.07、0.10、0.09、0.07和0.45倍( P<0.05);钩体感染后,IL-1β、IL-1α和IL-18 mRNA水平均显著上调,caspase-11阻断后IL-1β mRNA水平分别下降至0.05、0.03、0.02、0.05、0.06和0.02倍( P<0.05);IL-1α mRNA分别下降至0.14、0.07、0.15、0.10、0.03和0.06倍( P<0.05);IL-18 mRNA分别下降至0.08、0.10、0.16、0.18、0.10和0.07倍( P<0.05)。ELISA检测结果显示,钩体感染J774A.1细胞后细胞上清液中caspase-11、IL-1β、IL-1α和IL-18水平均显著上调,caspase-11阻断后caspase-11分别下降至43.07、41.64、51.96、86.56、105.36和129.95 pg/ml( P<0.05);IL-1β分别下降至15.01、14.19、68.02、31.20、173.13和104.98 pg/ml( P<0.05);IL-1α分别下降至12.14、15.40、38.01、21.97、24.48和27.09 pg/ml( P<0.05);IL-18分别下降至96.27、102.21、85.34、116.28、155.36和114.03 pg/ml( P<0.05)。 结论:Caspase-11非经典炎症小体参与介导问号钩体诱导小鼠单核-巨噬细胞IL-1β、IL-1α和IL-18的分泌。     

贵州省两个结核病监测点RFP和INH耐药基因检测与分析北大核心CSCD

目的应用分子生物学技术对贵州省威宁县和仁怀市2个结核病省级耐药监测点2018年确诊结核病患者感染结核分枝杆菌(MTB)RFP和INH耐药基因进行检测与分析,为结核病的防治提供参考数据。方法采用半巢式全自动实时荧光定量PCR结合PCR-线性杂交酶显色法对威宁县和仁怀市97例确诊结核病患者的痰培养物进行MTB核酸及利福平(RFP)和异烟肼(INH)耐药基因检测,分析结核病患者性别年龄构成。结果威宁县52份痰培养物样品经半巢式全自动实时荧光定量PCR检测出MTB核酸阳性49份,阳性率94.23%,RFP耐药基因阳性3份,RFP耐药率为6.12%。对RFP耐药基因阳性标本进行菌株分离培养和PCR-线性杂交酶显色检测,结果显示其中1株为RFP和INH双重耐药,双重耐药率为2.04%;仁怀市45份样品经半巢式全自动实时荧光定量PCR检测出MTB核酸阳性33份,阳性率73.33%。对RFP耐药基因阳性的2份标本进行菌株分离培养和PCR-线性杂交酶显色检测,结果显示RFP和INH耐药基因均阳性,双重耐药率为6.06%。患者性别构成分析结果显示,威宁县结核病患者男女比例为1.9∶1,仁怀市为1.6∶1,均为男多于女。患者年龄段分析显示,以青年及中年(18-65岁)多见,威宁县占86.53%(45/52),仁怀市占75.56%(34/45)。结论威宁县结核病患者感染MTB RFP耐药率6.12%,RFP和INH双重耐药率为2.04%;仁怀市结核病患者感染MTB RFP耐药率为6.06%,RFP和INH双重耐药率为6.06%。两地患者中均呈现男多于女,且以青年及中年占多数,结果可为当地结核病的防治提供参考依据。     

外源性H2S对血管性痴呆大鼠缺血再灌注后神经元线粒体损伤及其相关信号通路的影响

目的 以二血管(2-VO)法制作血管性痴呆(VaD)大鼠模型，探讨神经元自噬及相关信号通路的变化及外源性硫化氢(H₂S)的神经保护作用。方法 改良2-VO结扎SD大鼠双侧颈总动脉制作VaD模型，按缺血进程急性缺血期、缺血损伤期、损伤恢复期共设置1、7、30 d 3个时间段，每个时间段各有假手术(Sham)组、模型(VaD)组、阳性对照[尼莫地平(Nimodipine)组、硫氢化钠(NaSH)低剂量(Low-NaSH)组、NaSH高剂量(High-NaSH)组。为保持药物处理时间一致，1 d及7 d,各组术前灌胃给药30 d, 30 d各组术后灌胃给药30 d, VaD组和Sham组生理盐水灌胃，Nimodipine组Nimodipine灌胃给药，Low-NaSH组、High-NaSH组NaSH灌胃给药。利用水迷宫检测30 d各组学习记忆能力。Western印迹检测海马神经元线粒体蛋白中Beclin1、P62、蛋白激酶B(Akt)、P-Akt、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、P-mTOR表达。结果 术后1 d,与Sham组比较，VaD组Beclin1、P-Akt...