慢病毒介导COX-2基因的shRNA对子宫内膜癌侵袭力的影响

目的：探讨慢病毒介导COX-2基因的shRNA对子宫内膜癌HEC-1B细胞侵袭力的影响。方法：设计、合成4对针对COX-2基因shRNA的寡核苷酸序列,分别构建质粒,转染293T细胞,据其对COX-2的抑制率,筛选最有效的COX-2基因RNAi靶序列,设计并合成其shRNA的双链DNA Oligo,与含绿色荧光蛋白（GFP）编码基因的pGCL-GFP线性化载体连接产生重组慢病毒质粒LV-COX-2-ShRNA,并行PCR和测序鉴定。将LV-COX-2-ShRNA,pHelper 1.0和pHelper 2.0三种质粒DNA共转染293T细胞,包装产生慢病毒,以293T细胞GFP蛋白的表达水平采用逐孔稀释滴度法测定病毒滴度。重组慢病毒感染人子宫内膜癌HEC-1B细胞,行RT-PCR和western-blot验证COX-2基因的沉默效果,用Transwell侵袭试验检测HEC-1B细胞体外侵袭力的改变。结果：成功构建COX-2基因RNA干扰慢病毒载体并获得相应的慢病毒,浓缩病毒悬液的滴度为5×107Tu/ml。和对照组相比,RNA干扰组HEC-1B细胞COX-2基因的mRNA水平和蛋白水平的抑制率分别为61.87%和67.48%;其穿过人工基底膜的平均数为16.6,明显少于空白对照组50.2及非特异性siRNA感染组47.2,侵袭抑制率为64.8%（P〈0.01）。结论：RNA干扰可有效抑制HEC-1B细胞的侵袭能力。     

塞来昔布对人子宫内膜腺癌细胞系HEC-1B侵袭力的影响

目的探讨环氧化酶-2(COX-2)选择性抑制剂塞来昔布对人子宫内膜腺癌细胞系HEC-1B侵袭力的影响及其相关机制。方法用噻唑蓝(MTT)法检测不同浓度塞来昔布作用HEC-1B细胞不同时间后细胞增殖的变化;不同浓度塞来昔布作用HEC-1B细胞24h后,Transwell小室法测定细胞的侵袭力,RT-PCR法测定细胞中COX-2mRNA的表达。结果MTT检测显示塞来昔布对HEC-1B细胞的增殖抑制作用呈时间依赖性和浓度依赖性;不同浓度塞来昔布作用HEC-1B细胞24h,Transwell侵袭实验结果表明,在50~200μmol/L塞来昔布组随着浓度的增加细胞穿膜数逐渐减少(P<0.05),RT-PCR结果显示,50~200μmol/L塞来昔布组随着药物浓度的增加COX-2mRNA的表达逐渐减弱(P<0.05)。结论塞来昔布能抑制HEC-1B细胞增殖,降低细胞的侵袭力,其机制可能与下调细胞中COX-2mRNA的表达相关。     

COX-2选择性抑制剂塞来昔布对裸鼠荷人子宫内膜腺癌的抑制作用

 目的 探讨环氧化酶-2（cyclooxygenase-2,COX-2）选择性抑制剂塞来昔布对人子宫内膜腺癌的治疗作用及其机制。 方法 建立人子宫内膜腺癌HEC-1B细胞裸鼠荷瘤模型,待成瘤后随机分为对照组与实验组,对照组予生理盐水口服2周,实验组分别予塞来昔布4mg/d和2mg/d口服2周。从治疗开始每3天计算瘤体积一次,描绘肿瘤生长曲线,治疗结束后处死裸鼠剥除瘤组织,计算抑瘤率,采用RT-PCR法测定移植瘤组织COX-2 mRNA的表达、免疫组化法测定COX-2蛋白的表达和微血管密度（MVD）。 结果 塞来昔布对裸鼠皮下移植瘤的生长具有明显的抑制作用,且随着药物浓度的增加,抑瘤作用逐渐增强（抑瘤率分别为 32.4％和48.6％）,RT-PCR结果显示移植瘤组织COX-2 mRNA的表达逐渐减弱,免疫组化结果显示移植瘤组织 COX 2蛋白的表达及微血管密度（MVD）逐渐减少,实验组与对照组之间及各实验组之间的差异均有统计学意义（P <0.05）,COX-2蛋白的表达与MVD数量呈正相关（r系数为0.921,P<0.01）。 结论 COX-2选择性抑制剂塞来昔布能够抑制裸鼠荷人子 宫内膜腺癌的生长,其机制可能与降低COX 2的表达、减少微血管的生成有关。     

慢病毒介导COX-2基因的shRNA对子宫内膜癌侵袭力的影响

目的:探讨慢病毒介导COX-2基因的shRNA对子宫内膜癌HEC-1B细胞侵袭力的影响。方法:设计、合成4对针对COX-2基因shRNA的寡核苷酸序列,分别构建质粒,转染293T细胞,据其对COX-2的抑制率,筛选最有效的COX-2基因RNAi靶序列,设计并合成其shRNA的双链DNA Oligo,与含绿色荧光蛋白(GFP)编码基因的pGCL-GFP线性化载体连接产生重组慢病毒质粒LV-COX-2-ShRNA,并行PCR和测序鉴定。将LV-COX-2-ShRNA,pHelper 1.0和pHelper 2.0三种质粒DNA共转染293T细胞,包装产生慢病毒,以293T细胞GFP蛋白的表达水平采用逐孔稀释滴度法测定病毒滴度。重组慢病毒感染人子宫内膜癌HEC-1B细胞,行RT-PCR和western-blot验证COX-2基因的沉默效果,用Transwell侵袭试验检测HEC-1B细胞体外侵袭力的改变。结果:成功构建COX-2基因RNA干扰慢病毒载体并获得相应的慢病毒,浓缩病毒悬液的滴度为5×107Tu/ml。和对照组相比,RNA干扰组HEC-1B细胞COX-2基因的mRNA水平和蛋白水平的抑制率分别为61.87%和67.48%;其穿过人工基底膜的平均数为16.6,明显少于空白对照组50.2及非特异性siRNA感染组47.2,侵袭抑制率为64.8%(P<0.01)。结论:RNA干扰可有效抑制HEC-1B细胞的侵袭能力。     

塞来昔布对人子宫内膜腺癌细胞系HEC-1B增殖和凋亡的影响

目的探讨环氧化酶-2(COX-2)选择性抑制剂塞来昔布对人子宫内膜腺癌细胞系HEC-1B增殖及凋亡的影响及其作用机制。方法噻唑蓝(MTT)法检测不同浓度塞来昔布作用HEC-1B细胞后细胞增殖的变化;不同浓度塞来昔布作用HEC-1B细胞24 h后,流式细胞仪检测细胞周期和凋亡;RT-PCR检测细胞中COX-2 mRNA的表达。结果MTT结果显示,塞来昔布对HEC-1B细胞的增殖抑制作用呈现时间依赖性和浓度依赖性;不同浓度塞来昔布作用HEC-1B细胞24 h后,流式细胞仪结果显示G0/G1期细胞增加,S期和G2/M细胞减少,细胞凋亡率增加,各药物组与对照组相比差异均有统计学意义(P<0.05);RT-PCR结果显示,在50~200μmol/L塞来昔布组,随着药物浓度的增加COX-2 mRNA的表达逐渐减弱(P<0.05)。结论塞来昔布能抑制HEC-1B细胞的增殖,并能改变细胞周期和诱导凋亡,其机制可能与下调细胞中COX-2 mRNA的表达有关。     

塞来昔布对人子宫内膜腺癌细胞系HEC-1B增殖和凋亡的影响

目的 探讨环氧化酶-2(COX-2)选择性抑制剂塞来昔布对人子宫内膜腺癌细胞系HEC-1B增殖及凋亡的影响及其作用机制.方法 噻唑蓝(MTT)法检测不同浓度塞来昔布作用HEC-1B细胞后细胞增殖的变化;不同浓度塞来昔布作用HEC-1B细胞24 h后,流式细胞仪检测细胞周期和凋亡;RT-PCR检测细胞中COX-2 mRNA的表达.结果 MTT结果显示,塞来昔布对HEC-1B细胞的增殖抑制作用呈现时间依赖性和浓度依赖性;不同浓度塞来昔布作用HEC-1B细胞24 h后,流式细胞仪结果显示G0/G1期细胞增加,S期和G2/M细胞减少,细胞凋亡率增加,各药物组与对照组相比差异均有统计学意义(P＜0.05);RT-PCR结果显示,在50 ～ 200 μmol/L塞来昔布组,随着药物浓度的增加COX-2 mRNA的表达逐渐减弱(P＜0.05).结论 塞来昔布能抑制HEC-1B细胞的增殖,并能改变细胞周期和诱导凋亡,其机制可能与下调细胞中COX-2 mRNA的表达有关.     

环氧化酶-2在子宫内膜癌的研究进展

引言环氧化酶-2(Cyclooxygen-2,COX-2)是花生四烯酸转化为前列腺素过程中重要的限速酶,在结直肠癌、食管癌、肺癌、胃癌、膀胱癌、宫颈癌等多种上皮性肿瘤中都有COX-2表达的异常增高。子宫内膜癌(endometrial carcinoma)是妇科第二位恶性肿瘤,严重危害中老年妇女的生命健康,其发病呈年轻化趋势,并表现为时间依赖式发展,从子宫内膜复杂型增生过长到原位癌再到浸润癌。早期肿瘤仍然存在一定的复发和侵袭的特性,严重影响预后。本文就COX-2的特性及其在子宫内膜癌组织中的表达、在子宫内膜癌的发生、侵袭等方面的相关机制做一综述。1COX-2的特性COX是催化花生四烯酸转化成前列腺素H2(prostaglandinH2,PGH2)的限速酶,PGH2可以进一步转化成为其他多种前列腺素、前列环素和血栓素A2(统称为前列腺素类化合物)。前列腺素在多种生物学过程中发挥重要作用,包括免疫反应调节、生殖和生长发育、维持正常胃肠道粘膜的完整性等。COX有两种异构酶,其中COX-l是结构性酶,为1976年Miyamoto从公牛囊状腺中分离出来的。1991年COX-2的cDNA被分离和测序,人的COX-2基因位...