基于PERK/eIF2α信号通路探讨龟鹿二仙胶含药血清对脂多糖诱导大鼠退变软骨细胞凋亡的作用机制

目的：观察龟鹿二仙胶含药血清对脂多糖（LPS）诱导的大鼠退变软骨细胞中蛋白激酶R样内质网激酶（PERK）/真核起始因子2α(eIF2α)信号通路相关蛋白表达的影响,探讨龟鹿二仙胶治疗KOA的作用机制。方法：制备龟鹿二仙胶含药血清及空白血清。采用4周龄SD大鼠膝关节软骨提取软骨细胞并进行体外培养,用甲苯胺蓝染色法对软骨细胞进行鉴定。采用CCK-8法筛选最佳含药血清浓度进行后续实验。用10μg/mL LPS诱导F2代软骨细胞复制退变软骨细胞模型,将细胞分为空白组、模型组、龟鹿二仙胶组、PERK抑制剂组,干预24 h后,分别采用CCK-8法检测软骨细胞活性;TUNEL法检测软骨细胞凋亡情况;RT-qPCR法检测软骨细胞PERK、eIF2α、前凋亡基因C/EBP同源蛋白（CHOP）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）、半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)、B淋巴细胞瘤-2基因（Bcl-2）mRNA的表达;Western Blot检测软骨细胞p-PERK、p-eIF2α、CHOP、Bax、活化的Caspase-3(Cleaved-Caspase-3)、Bcl-2蛋白的表达情况。结果：与空白组比较...     

新医科背景下中医骨伤科学专业本科教学的思考与探索

“新医科”的建设是新时代党和国家保障人民健康的战略安排,也是推动我国高等学校医学教育高质量发展的重要举措。在“新医科”背景下,如何回应人民群众对身体健康的美好生活需要,紧扣医学教育发展的时代要求,对中医骨伤科学专业教学体系进行整体优化和创新性发展,是高等学校中医骨伤科学教学面临的新的挑战和机遇。对标新医科需求,对当前中医骨伤科学专业教学中存在的热点、痛点、堵点进行分析,加强学科虚拟教研室建设、探索线上线下混合式教学应用、开展虚拟仿真教学实训,可以有效推动中医骨伤科学专业本科教学的高质量发展,进而为建设健康中国培育符合新医科需求的,具有较高人文科学素质和创新精神的中医专门人才。     

痹痿同治法对脂多糖诱导大鼠退变软骨细胞炎症和凋亡的影响

目的 探讨痹痿同治法方药化湿定痛汤合龟鹿二仙胶对骨关节炎的可能作用机制。方法 制备化湿定痛汤合龟鹿二仙胶含药血清及空白血清。采用4周龄SD大鼠膝关节软骨建立稳定的软骨细胞体外培养体系,采用免疫组化染色法对F2代软骨细胞进行鉴定。鉴定成功后分别用4个体积分数的含药血清(5%、10%、15%、20%)和空白血清处理软骨细胞(5×10³个/孔),培养24、48、72 h后,CCK-8法检测软骨细胞活性,选择提升软骨细胞活性的最佳含药血清体积分数进行后续实验。用10 mg/L脂多糖诱导F2代软骨细胞,复制退变软骨细胞模型,将细胞分为空白组、模型组、化湿定痛汤合龟鹿二仙胶含药血清组(简称“含药血清组”)。干预24 h后,采用CCK-8法检测各组软骨细胞活性,ELISA法检测各组细胞培养液上清中白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的水平,qRT-PCR法检测各组软骨细胞B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)mRNA的表达,Western blotting检测...     

化湿补肾法对膝骨关节炎大鼠软骨修复机制的研究

目的 探讨化湿补肾法治疗膝骨关节炎(KOA)的机制.方法 将48只SPF级SD大鼠随机分为空白组、模型组、化湿定痛汤组、龟鹿二仙胶组、化湿补肾法组,采用木瓜蛋白酶关节腔注射建立膝骨关节炎模型,造模成功后各组大鼠灌胃相应药物,化湿定痛汤组灌胃化湿定痛汤4.68 g/(kg·d),龟鹿二仙胶组灌胃龟鹿二仙胶汤2.7 g/(...     

基于IHH-Gli信号通路探讨龟鹿二仙胶含药血清调控大鼠膝关节软骨细胞肥大分化作用机制

目的 基于IHH-Gli信号通路探讨龟鹿二仙胶含药血清对大鼠膝关节软骨细胞肥大分化的调控机制。方法 取4周龄SPF级SD大鼠膝关节软骨细胞进行传代培养，将第三代生长良好的软骨细胞，设为空白组；采用含10 ng/mL IL-1β的10%FBS/DMEM培养上述第三代软骨细胞12 h后制备大鼠膝关节肥大软骨细胞模型，模型鉴定成功后随机分为模型组、龟鹿组、抑制剂组。空白组、模型组均采用含10%大鼠空白血清DMEM进行培养，龟鹿组和抑制剂组分别采用含10%龟鹿二仙胶大鼠含药血清和含10 nmol/L环巴胺的10%大鼠空白血清DMEM进行培养。培养72 h后在光镜下观察4组软骨细胞形态变化，qRT-PCR法检测4组印度刺猬（IHH）、膜受体Smoothened(Smo)、胶质细胞瘤转录因子（Gli）、Runt相关转录因子2(Runx2)、X型胶原α1(Col10A1)、基质金属蛋白酶13(MMP-13)mRNA相对表达水平，采用Western blot检测等4组IHH、Smo、Gli蛋白表达量。结果与空白组比较，模型组细胞不规则形态增加，细胞间隙变大、数量变少，细胞碎片、悬浮死细胞增多；与模型组...