高糖对循环纤维细胞增殖和趋化因子受体4、结缔组织生长因子表达影响的研究

目的探讨高糖对循环纤维细胞增殖和趋化因子受体4(CXCR4)、结缔组织生长因子(CTGF)表达的影响。方法选取2016年6月至2017年6月于浙江医院心内科住院的15例T2DM患者(T2DM组),以及同期体检健康的15名血糖正常者(NGT组)。密度梯度离心法获取两组外周血单个核细胞,经培养、鉴定后分别用含不同浓度葡萄糖DMEM培养基(5.5、25、30 mmol/L葡萄糖和5.5 mmol/L葡萄糖+30 mmol/L甘露醇)干预不同时间(24、48、72h),采用细胞计数试剂(CCK-8)测定细胞增殖能力,Western blot检测CXCR4和CTGF的表达情况(48h)。另收集两组外周血各5 ml,采用流式细胞术测定外周血循环纤维细胞含量。结果经14d培养,循环纤维细胞光镜下呈典型梭形。激光共聚焦显微镜显示细胞CD45(绿色)和胶原蛋白Ⅰ(COL-Ⅰ)(红色)表达明显,且T2DM组梭形细胞较NGT组增多。CCK-8检测显示葡萄糖对循环纤维细胞的增殖能力呈明显的浓度依赖性,以30 mmol/L干预48h最显著(P0.01)。Western blot显示,干预48h后,葡萄糖呈浓度依赖性刺激循环纤维细胞CXCR4和CTGF的表达(P0.01)。流式细胞术检测显示,T2DM组外周血单个核细胞中的CD45+COL-Ⅰ+双染阳性的循环纤维细胞含量高于NGT组[(1.93±1.01)vs(0.52±0.35),P0.01]。结论 T2DM患者外周血中CD45+COL-Ⅰ+循环纤维细胞含量明显升高。体外高浓度葡萄糖可刺激循环纤维细胞的增殖能力,促进CXCR4和CTGF分泌,提示循环纤维细胞可能参与糖尿病器官纤维化的病理生理过程。     

iTRAQ技术筛选急性心肌梗死动物血清早期潜在标记物的试验研究

目的利用同位素标记相对和绝对定量（isobarictagsforrelativeandabsolutequantitation,iTRAQ）技术筛选急性心肌梗死（AMI）后表达的差异蛋白，寻找可早期诊断AMI的潜在血清标记物。方法32条成年比格犬分为假手术组和AMI组（采用冠状动脉注射聚乙烯微球悬浮制剂和凝血酶粉剂制作动物模型），分别收集造模前和造模后1、2、3、6h血清。利用8标iTRAQ技术分析两组血清中蛋白质的表达情况，将表达差异倍数＞1.2倍（上下调）且P＜0.05的蛋白视为差异蛋白，并对差异蛋白进行基因本体(Geneontology，GO)功能注释和富集分析。结果AMI后1h出现的差异蛋白有51种，上调28种，下调23种。AMI后2h出现的差异蛋白有54种，上调28种，下调26种。AMI后3h出现的差异蛋白有43种，上调24种，下调19种。AMI后6h出现的差异蛋白有54种，上调29种，下调25种。综合分析前6h差异蛋白，查阅文献资料排除未命名蛋白和犬特有蛋白后，共发现15种差异蛋白在AMI后6h内稳定表达，上调7种，下调8种。结论利用iTRAQ技术筛选出15种与早期AMI相关蛋白，对筛选出的差异蛋白进行功能分析并查阅相关文献，其中肌球蛋白作为早期诊断AMI的新型血清标记物可能有较大潜力。