VEGF、BMP-2、BMP-7蛋白在复发脑胶质瘤术后的表达及分析

目的 探讨血管内皮生长因子(VEGF)、重组人骨形态发生蛋白-2(BMP-2)、重组人骨形态发生蛋白-7(BMP-7)在原发和复发脑胶质瘤患者术后瘤组织中的表达及临床意义。方法 回顾性分析笔者医院神经外科2012年1月~2015年1月72例脑胶质瘤患者首次手术及复发后再手术的完整临床资料和瘤组织标本,采用免疫组化法检测所有患者原发及复发标本蜡块中VEGF、BMP-2、BMP-7蛋白阳性表达水平,分析其与性别、年龄、WHO病理分级、脑胶质瘤原发或复发等临床病理资料的关系。结果 对复发脑胶质瘤患者临床病理资料采用Spearman等级相关分析结果显示,VEGF蛋白表达与WHO病理分级(r VEGF=0.375)及原发、复发情况相关(r VEGF=0.319),BMP-2、BMP-7蛋白表达与原发、复发情况相关(rBMP-2=0.492,rBMP-7=0.381),差异有统计学意义(P＜0.05)。VEGF、BMP-2、BMP-7蛋白在原发脑胶质瘤中的阳性表达率为52.8%(38/72)、61.1%(44/72)、59.7%(43/72),在复发脑胶质瘤中的阳性表达率为68.1%(49/72)、70.8%(51/72)、69.4%(50/72),复发脑胶质瘤中VEGF、BMP-2、BMP-7蛋白表达高于原发,差异有统计学意义(P＜0.05)。结论 脑胶质瘤复发与VEGF、BMP-2、BMP-7蛋白表达水平呈正相关,是判断脑胶质瘤生物学行为的重要指标,VEGF、BMP-2、BMP-7蛋白可作为脑胶质瘤分子标志物及治疗靶点。     

融合蛋白IP10-EGFRvⅢScFv的构建及表达

目的构建细胞因子融合蛋白IP10-EGFRvⅢScFv,建立并检测稳定表达融合蛋白的细胞株NIH3T3。方法通过RT-PCR法扩增小鼠IP10基因,全基因人工合成EGFRvⅢScFv,两段目的基因依次克隆于表达载体pcDNA3.1(-)PCMV启动子下游,二者以编码(Gly4Ser)3的柔性接头序列(linker)相连。将构建好的pcDNA3.1(-)IP10-EGFRvⅢScFv转染NIH3T3细胞,并用G418筛选出阳性克隆,采用实时定量PCR和Western blot法检测克隆细胞目的基因和蛋白的表达量,并观察转染后的NIH3T3细胞体外生长状况。结果成功构建了真核表达载体pcDNA3.1(-)IP10-EGFRvⅢScFv,经过浓度为200mg/L的G418工作液筛选出了稳定高表达IP10-EGFRvⅢScFv的细胞系NIH3T3,且其生长状态并未受转染基因的影响。通过荧光检测、实时定量PCR、Western blot法检测到转染72h后目的基因和蛋白表达量最高,和稳定克隆株相比,表达量并无明显差异(P>0.05)。结论构建的新型细胞因子融合蛋白可以在NIH3T3细胞内获得稳定表达,为后期融合蛋白的提取及功能研究打下基础。