柯萨奇病毒Ａ 组１６型多克隆抗体的制备及其 在检定中的应用

摘要：目的　评价ＣＶ Ａ１６ Ｋ１６８免疫血清对ＣＶ Ａ１６不同毒株的中和抗体效价,确定完全中和不同病毒量 所需的最低血清量,为ＣＶ Ａ１６疫苗毒种检定中的鉴别试验和病毒外源因子检查提供参考。方法　将ＣＶ Ａ１６病毒抗原辅以弗氏佐剂以皮下多点注射方式免疫新西兰大白兔,多次免疫后取血清,采用微量细胞病 变法进行中和抗体效价检测和对１５ 株不同ＣＶ Ａ１６ 毒株的中和效价检测, 并用ＣＶ Ａ１６ ４Ｖ 和ＣＶ Ａ１６ １０Ｒ 两个毒株分析中和不同量病毒所需的抗体量。结果　浓缩抗原作为免疫原获得的兔抗ＣＶ Ａ１６血清中 和抗体效价可达１∶２０４８;该免疫血清对１５ 株ＣＶ Ａ１６ 不同毒株的几何平均滴度（ｇｅｎｏｍｉｃｍｅａｎｔｉｔｅｒ, ＧＭＴ）为１∶３１１８;完全中和７．５ｌｇＣＣＩＤ５０／ｍｌＣＶ Ａ１６病毒所需的最低血清量为１２８Ｕ,当病毒量在４．０ ～７．０ｌｇＣＣＩＤ５０／ｍｌ时,完全中和所需的最低血清量为４８Ｕ,当病毒量低于４．０ｌｇＣＣＩＤ５０／ｍｌ时,１Ｕ 的血 清即可完全中和本病毒。结论　ＣＶ Ａ１６ Ｋ１６８株作为免疫原可获得高效价的抗血清;用不同毒株检测得到 的抗体效价存在差异;完全中和病毒所需的最低血清量与病毒量呈正相关;病毒量与测得的血清中和效价 呈负相关。 关键词：柯萨奇病毒Ａ 组１６型;免疫血清;中和能力;疫苗检定 中图分类号：Ｒ３７８．２ ＋ Ｒ３９２ ３３　　文献标识码：Ａ　　文章编号：１００９ ６６３９ （２０１７）０７ ０４９７ ０４     

人呼吸道合胞病毒Long株的免疫原性初探

目的 评价人呼吸道合胞病毒（HRSV） Long株的免疫原性,为进一步的研究疫苗提供实验数据.方法 将HRSV制备成纯化抗原,取40只ICR鼠,随机分为4组,分别用纯化HRSV、纯化HRSV＋ Al（OH）3、并设0.01 mol/L PBS、Al（OH）3对照组,0天、28天免疫小鼠,采用中和试验检测血清中和抗体,流式检测7种细胞因子.结果 初免后28天,加Al（OH）3组与无Al（OH）3组抗体阳转率分别为60％和50％,抗体几何平均效价（GMT）分别为1∶4.49和1∶5.27;加强免疫后,Al（OH）3组与无Al（OH）3组小鼠血清抗体阳转率均达100％,抗体几何平均效价（GMT）分别为1∶17.15和1∶10.56,平均增长3.8倍和2.0倍;中和抗体在组间无差异,而组内初免与再免的中和抗体有统计学差异（P＜0.01）.加Al（OH）3样品组与无Al（OH）3样品组,所检测7种细胞因子均诱导IL-6及TNF,与两个对照组间有统计学差异（P＜0.05）,而另外5种细胞因子则无明显升高.结论 人呼吸道合胞病毒Long株可产生良好的免疫效应.     

两种免疫程序下的抗体动力学曲线分析

目的通过分析抗体产生及其动力学变化的规律,为制备高效价血清提供参照。方法将EV71灭活病毒和HAV灭活病毒按照两种免疫程序注射新西兰兔,检测其在不同时间段的免疫血清效价。结果加强免疫2d后抗体效价有明显的下降,之后逐步升高并在5～7d时到达一个新的峰值,且每周加强一次与每2周加强一次所得到的抗体效价基本一致。结论再次免疫后,抗体水平的升高并非是呈光滑的曲线式上升,而是呈折线式上升;获得高效价的免疫血清,需通过3次加强免疫,再次免疫的间隔时间以一周为宜,在第3次加强7d后可收集血清,整个免疫过程应在8周内完成。     

5种不同细胞对柯萨奇病毒A组16型和肠道病毒71型的敏感性研究

 目的   评价肠道病毒研究中常用的5种细胞对柯萨奇病毒A组16型（coxsackievirus A16,CA16）和肠道病毒71型（enterovirus 71,EV71）的敏感性,为分离和培养CA16和EV71提供实验室依据。方法  用分离的各15株CA16和EV71分别感染RD、Vero、KMB17、Hep2和L20B细胞,每天观察细胞病变情况,按Karber法计算病毒感染性滴度。采用不同的统计学方法（包括方差分析和卡方检验）比较5种细胞对CA16和EV71的敏感性差异。 结果   5种细胞的CA16和EV71病毒感染性滴度间的差异具有统计学意义（CA16：F＝18.481,P＝0.000;EV71：χ²＝63.106,P＝0.000）。在5种细胞中,RD细胞对2种病毒的敏感性最高,CA16和EV71的病毒感染性滴度分别可达7.8和8.2 lgCCID₅₀/ml,且均于接种细胞后48 h达增殖高峰,第4天进入增殖平台期;2种病毒在Hep2和L20B细胞中的病毒感染性滴度均较低,CA16分别为5.2和4.2 lgCCID₅₀/ml,EV71分别为4.9和4.0 lgCCID₅₀/ml,且2种病毒在接种后第6~7天才达增殖高峰,但仅L20B细胞中的2种病毒于接种后第7天进入增殖平台期;CA16在Vero和KMB17细胞中的病毒感染性滴度分别为6.9和7.3 lgCCID₅₀/ml,EV71分别为7.1和6.8 lgCCID50/ml,2种病毒均在接种Vero和KMB17细胞后第3天达到增殖高峰,第5天进入增殖平台期。 结论   RD细胞对CA16和EV71的敏感性最好,其次是Vero和KMB17细胞,而Hep2和L20B细胞并非是分离和培养这2种病毒的理想细胞。     

医学生物学研究所健康人群甲型肝炎病毒抗体水平调查及分析

目的了解医学生物学研究所健康人群抗甲型肝炎病毒抗体(抗HAV)水平,为制定防制措施提供科学依据。方法采集职工体检血清标本419份,采用酶联免疫吸附实验(ELISA法)对血清中抗HAV进行检测。结果职工HAV抗体总阳性率达83.3%;51~岁年龄组阳性率最高,为95.8%,22~30岁组阳性率最低,为73.1%;从事甲肝疫苗生产及相关人员抗HAV阳性率为83.3%,与生产无关人员抗HAV阳性率为82.7%;男性抗HAV阳性率为85.7%,女性抗HAV阳性率为81.0%。结论 HAV抗体阳性率随着年龄增长呈上升趋势,性别和工种无差别。建议对30岁的年轻职工进行HAV疫苗接种,以提高这部分人员的整体免疫水平。     

IPV-D抗原检测试剂参考品的制备及标定

目的 制备一套可对IPV-D抗原检测进行质量控制的参考品。方法 用组织培养的方法制备出3套用于IPV-D抗原Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型的参考品;每个型别参考品有22份样品,包含10份阳性参考品,10份阴性参考品,1份灵敏度参考品,1份精密性参考品;每个型别参考品经9人次标定。结果 IPV-Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型参考品中10份阳参全部阳性,10份阴参全部阴性,灵敏度标定值分别1413.13、1684.66、1561.95DU/ml,精密性参考品平均CV值分别为4.52%、6.54%、5.68%;参考品37℃放置5天,反复冻融5次稳定性良好。结论 制备的IPV-D抗原检测试剂参考品经各项试验检测结果合格,可用于IPV-D抗原检测试剂的质控。