在单核细胞中干扰SHP-2后对宫颈癌细胞的影响

目的:研究宫颈感染HPV后是否能通过干扰SHP-2从而负调控IFN-β信号通路,最终导致宫颈癌的发生。方法:通过SiHa细胞与THP-1细胞共培养,利用SHP-2 siRNA干扰片段瞬时转染THP-1细胞,干扰SHP-2基因的表达。将SHP-2封闭肽以0、0.5、2.5μg/ml浓度和2、24 h培养THP-1细胞,收集培养后的细胞进行Western Blotting实验,进而检测SHP-2的表达,确定封闭的最佳时间和浓度。收集正常和不同处理因素的THP-1细胞,Western Blotting法检测THP-1细胞中SHP-2蛋白表达。将THP-1细胞及不同处理因素处理好的THP-1细胞分别与SiHa细胞共培养后,在选定的时间和浓度点测其OD值。收集正常THP-1细胞的培养液上清、THP-1细胞给予SHP-2封闭肽处理的培养液上清和THP-1细胞给予SHP-2 siRNA干扰的培养液上清进行ELISA实验。结果:给予SHP-2的SiRNA后SHP-2蛋白表达明显降低,在干扰后48 h、200 pmol时干扰效果最好。给予SHP-2的封闭抗体后SHP-2蛋白表达明显降低,在封闭后24 h、2.5μg/ml时抑制效果最好。THP-1细胞与SiHa细胞相互作用,从两个细胞作用时间来看,THP-1细胞对SiHa细胞杀伤作用随着时间的增长而增强,从24 h始就起明显作用。给予siRNA干扰的THP-1细胞对SiHa细胞的杀伤作用最强(OD值最低),给予封闭肽的次之,无处理因素的最弱(OD值最高)。SiRNA干扰组的浓度值最高,其次是封闭肽组的浓度值,无处理因素组(仅培养THP-1的细胞组)的浓度值最低,SiRNA干扰组与无处理因素组之间差异有统计学意义(P<0.05),封闭肽组与无处理因素组之间差异有统计学意义(P<0.05),SiRNA干扰组与封闭肽组之间差异无统计学意义(P>0.05)。结论:抑制THP-1细胞中SHP-2的表达后,THP-1细胞分泌的IFN-β明显增多,导致它对SiHa细胞的杀伤作用明显增强。SHP-2在宫颈癌的发生中起着重要作用,它发挥作用的机制是通过抑制IFN-β的信号转导,减少I型干扰素IFN-β的生成,使宫颈癌发生成为可能。     

HPV16型存在状态与Treg/Th17细胞因子的相关性研究

目的 探讨人乳头状瘤病毒(HPV) 16 DNA存在状态与调节性T细胞(Treg)表面标志物Foxp3+的表达及外周血Treg/Th17相关细胞因子的关系和在宫颈癌进展中的作用和意义.方法 收集2012年1至10月于中国医科大学附属盛京医院妇科142例HPV16+病例,分为宫颈鳞癌(CC,60例),宫颈上皮内瘤变(CIN,65例),对照组(健康妇女,17例).采用多重实时PCR技术检测宫颈脱落细胞的E2和E6基因,通过E2/E6比值法评估HPV16型DNA的体内存在状态.采用免疫组化方法检测宫颈组织中Foxp3+调节性T细胞表达.采用酶联免疫吸附试验(ELISA)方法检测Treg/Th17相关细胞因子:转化生长因子-β(TGF-β)、白细胞介素(IL)-10、17、21.结果 (1)在HPV16DNA体内同一种存在状态下,CIN和CC组Foxp3+比例及TGF-β、IL-10浓度较对照组明显升高(P＜0.01);IL-17、IL-21浓度较对照组明显降低(P＜0.05);(2)在同一病变条件下,HPV16 DNA整合率随着Foxp3+、TGF-β、IL-10表达增加而升高,随着IL-21、IL-17表达降低而升高;(3)不同HPV16型DNA存在状态的宫颈癌中Foxp3+表达与FIGO分期、组织学分级及淋巴结转移密切相关(P＜0.05),而与年龄无关(P＞0.05).结论 Treg细胞因子与HPV16整合率和宫颈病变严重程度呈正相关,而Th17细胞因子与其呈负相关.Treg/Th17细胞因子在HPV持续感染所致宫颈癌的发生发展中可能起着重要作用.