瑞芬太尼下调大鼠背根神经节和脊髓背角GIRK2的表达

【目的】观察G蛋白门控内向整流钾离子通道亚单位2(GIRK2)在瑞芬太尼诱导的痛觉过敏大鼠背根神经节和脊髓背角中的表达和分布的变化。【方法】成年雄性SD大鼠尾静脉输注瑞芬太尼4μg/（kg·min）2 h建立痛觉过敏模型。瑞芬太尼注射后6 h、1 d、3 d和5 d,采用免疫荧光化学法观察GIRK2在瑞芬太尼诱导痛觉过敏大鼠的背根神经节（DRG）和脊髓背角中分布的变化。采用免疫印迹法检测大鼠背根神经节和脊髓背角GIRK2总蛋白和膜蛋白的表达。最后,采用行为学评价瑞芬太尼输注后,鞘内注射GIRK2特异性激动剂ML297对痛阈的影响。【结果】免疫荧光结果显示,在背根神经节和脊髓背角I-II板层,GIRK2主要与IB4阳性的小神经元及其神经纤维共定位,而瑞芬太尼注射后GIRK2表达显著降低。免疫印迹结果显示,静脉输注瑞芬太尼1 d后,与对照组相比,背根神经节GIRK2总蛋白（0.47±0.10 vs. 1.01±0.17,P <0.001）和膜蛋白（0.47±0.11 vs. 1.06±0.12, P <0.001）表达水平均显著减少;与背根神经节结果相一致的是,脊髓背角GIRK...     

瑞芬太尼诱导的SH-SY5Y细胞中PKCε与MOR相互作用的研究

目的 利用人神经母瘤细胞（SH-SY5Y）,探讨瑞芬太尼对蛋白激酶Cε(PKCε)和μ阿片受体（MOR）之间相互作用的影响以及PKCε对瑞芬太尼诱导MOR内化的调节作用。方法 设置对照组和瑞芬太尼处理组（R2 h组）,R2 h组采用10μmol/L瑞芬太尼处理SH-SY5Y细胞2 h。采用细胞免疫荧光观察MOR蛋白分布变化,免疫印迹检测MOR蛋白膜浆组分表达变化;细胞免疫荧光检测PKCε与MOR共定位情况,免疫共沉淀检测瑞芬太尼作用不同时间后PKCε与MOR相互作用变化;构建PKCε、MOR及PKCε截短蛋白的原核表达载体并诱导表达和纯化蛋白,采用pull-down实验检测两者直接相互作用情况。分别通过PKCε特异性激动剂和抑制剂预处理,观察激活或抑制PKCε后对瑞芬太尼诱导MOR内化的影响。结果 免疫荧光结果显示,与对照组比较,R2 h组MOR显著内化[（0.72±0.07）vs.(12.57±1.10)],差异有统计学意义（t=8.90,P<0.000 1）。免疫印迹结果显示,胞膜MOR蛋白显著减少,胞浆组分MOR蛋白增加。细胞免疫荧光共染显示,SH-SY5Y细胞中的PKCε...