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目的探索灯盏乙素对肿瘤细胞周期的影响,进一步阐述灯盏乙素对肿瘤细胞的增殖抑制的作用机制.方法采用实时荧光定量PCR的方法,检测不同浓度下灯盏乙素对乳腺癌MDA-MB-231细胞周期中最重要检查点的相关因子CDK1、CDK2、cyclin A2、cyclin E2和p21的m RNA相对表达量.结果灯盏乙素的剂量低于25μmol/L时,CDK1 m RNA的相对表达量显著增加,趋势随着剂量增加而降低;CDK2 m RNA在低剂量下相对表达量显著降低,在100μmol/L浓度下表达量显著增加;cyclin A2在剂量低于50μmol/L时m RNA的相对表达量显著增加;cyclin E2的m RNA的相对表达量在低剂量时相对表达量显著增加;p21的m RNA相对表达量在灯盏乙素剂量为50μmol/L、100μmol/L时显著增加.结论灯盏乙素显著影响CDK1、CDK2、cyclin A2、cyclin E2和p21的m RNA相对表达量,并且与剂量相关. 相似文献
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目的：构建以绿色荧光蛋白(GFP)为报告基因的重组真核表达载体pEGFP-N1-SUMO-3,观察GFP-SUMO-3融合蛋白在人前列腺癌细胞LNCaP中的表达与定位。方法：采用PCR扩增SUMO-3基因全长cDNA编码区序列,克隆入pEGFP-N1真核表达载体。重组质粒pEGFP-N1-SUMO-3通过酶切和测序鉴定正确后,脂质体法将重组质粒转染至LNCaP中,利用GFP抗体通过Western blotting检测 GFP-SUMO-3融合蛋白的表达,通过荧光显微镜观察其在细胞中的表达及分布。结果：重组质粒pEGFP-N1-SUMO-3经BamHⅠ和Xho Ⅰ双酶切鉴定,得到大小分别为4 700和312 bp的条带,与预期结果一致。测序结果显示,GFP在N端,是阅读框正确的SUMO-3的基因序列。在LNCaP细胞中过表达GFP-SUMO-3融合蛋白,Western blotting得到相对分子质量为39 000的蛋白表达条带,与GFP-SUMO-3大小相符。荧光显微镜观察,转染重组质粒pEGFP-N1-SUMO-3 的细胞中呈绿色荧光,主要在细胞核内表达,与DAPI重合。结论：成功构建重组质粒pEGFP-N1-SUMO-3,并表达代绿色荧光蛋白的SUMO-3融合蛋白,鉴定出SUMO-3在LNCaP细胞中的核定位性。 相似文献
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目的:构建pGEX-4T- 1/SUMO3重组表达质粒,并在大肠杆菌中表达和纯化出类泛素化修饰蛋白SUMO3/GST融合蛋白.方法:采用PCR技术利用pcDNA3.1-SUMO3质粒为模板,扩增出SUMO3全长编码序列(312 bp),并将其重组于谷胱甘肽硫转移酶(GST)融合蛋白表达质粒pGEX-4T-1中,酶切、测... 相似文献
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