人双突变型低氧诱导因子1α真核表达载体的构建及鉴定

目的构建能在哺乳动物细胞得到常氧下高表达的携带HIF-1α突变型HIF-1α-Ala402-Ala 564基因真核表达载体pShuttle2-HIF1α—Ala402-Ala564。方法 采用分子克隆技术,在业已完成的pShuttle2-HIF-1α—Ala564的基础上,用连续聚合酶链式反应（PCR）定点突变的方法将其第402位脯氨酸密码子CCA突变为丙氨酸密码子GCA,构建成双突变HIF-1α真核表达载体pShuttle2-HIF-1α—Ala402-Ala564。结果 经酶切鉴定及基因测序证实人双突变型低氧诱导因子1α真核表达载体pShuttle2-HIF1α—Ala402-Ala564构建成功。结论 成功构建重组人双突变型低氧诱导因子1α真核表达载体pShuttle2-HIF1α—Ala402-Ala564,为缺血性心脏病的HIF-1α基因治疗研究奠定基础。     

突变型HIF-1α基因对人骨髓间充质干细胞分化成心肌样细胞的影响

目的 探讨突变型低氧诱导因子1α（hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α）基因对体外诱导环境人骨髓间充质干细胞（human mesenchymal stem cells ,hMSCs）分化成心肌样细胞(cradiomyocyte-like)过程中的影响。方法 重组腺病毒Ad-HIF-1αnature、Ad-HIF-1α564、Ad-HIF-1α564/402和Ad-HIF-1α564/803以最佳转染复数转染体外5-氮胞苷（5-azacytidine, 5-aza）诱导的hMSCs,诱导培养后第4周,提取细胞浆蛋白,一步法酶联免疫分析检测心肌肌钙蛋白I(cTnI)含量;Western blot测定HIF-1α及VEGF蛋白表达水平。结果 5- aza诱导hMSCs第4周cTnI值 ：Ad-HIF-1αnature(0.426 ±0.001)、Ad-HIF-1α564(0.424±0.002)、Ad-HIF-1α564/402 (0.428±0.005)、Ad-HIF-1α564/803（0.441±0.003）、空白组（0.411±0.010）、Ad-LacZ（0.410±0.016）,各实验组有显著性差异（P<0.05）;Ad-HIF-1α564/803 组cTnI表达高于Ad-HIF-1αnature、Ad-HIF-1α564、Ad-HIF-1α564/402三组（P<0.05）。Western blot结果显示Ad-HIF-1αnature、Ad-HIF-1α564、Ad-HIF-1α564/402和Ad-HIF-1α564/803 四组HIF-1α及VEGF蛋白表达水平均较Ad-LacZ组高,有显著性差异（P=0.000）, 但Ad-HIF-1α564、Ad-HIF-1α564/402和Ad-HIF-1α564/803 与Ad-HIF-1αnature相比,各组间两种蛋白表达均无显著性差异(P<0.05)。结论 野生型HIF-1α 基因及突变型能促进5-aza诱导的hMSCs向心肌样细胞转化,为HIF-1α及hMSCs 在心肌再生中的联合应用奠定了实验基础。     

冠心病的超声诊断现状及进展

<正> 冠心病是严重危害人类身体健康的多发病、常见病,对其精确、全面的诊断直接影响到患者的生存和预后。长期以来,冠状动脉造影一直是诊断冠状动脉病变和用于指导冠状动脉介入治疗的主要方法和"金标准",然而冠状动脉造影仅显示被造影剂填充的管腔轮廓,通过管腔形态的改变间接反应位于管壁上的粥样硬化病变,在评价冠状动脉病变方面存在不可避免的缺陷。心脏超声技术在冠心病的辅助诊断中发挥着重要的作用,我们将结合冠心病的病理、生理发生机制介绍心脏超声技术对冠心病诊断的各种评价方法及进展。     

人三突变型低氧诱导因子1α真核表达载体的构建及鉴定

目的：为了深人研究人低氧诱导因子1α（HIF-1α）基因对冠心病患者的血管新生作用，构建人三突变型HIF-1α真核表达载体（pShuttle2-HIF-1α-A1a4O2-Ala564-Ala803）。方法：双酶切pShuttle2-HIF-1α-Ala402-A1a564、pShuttle2-HIF-1α-Ala564-Ala803，胶回收前者酶切片段中300bp的小片段及后者6300bp的大片段，并将两者连接，重组成三突变型穿梭质粒pShuttle2-HIF-1α-Ala402-Ala564-Ala803，并进行酶切和PCR鉴定。结果：经酶切鉴定及基因测序证实，重组三突变型穿梭质粒构建成功。结论：成功构建重组人三突变型HIF-1α真核表达载体pShuttle2-HIF-1α-Ala402-Ala564-Ala803，为进一步促进基因治疗缺血性心脏病的研究奠定基础。     

心力衰竭合并肾功能不良患者行心脏再同步治疗一例

患者男,52岁,因反复胸闷、气促1年入院。患者既往有多囊肾病史lO年,肾功能异常4年,规律透析1年。入院诊断：（1）扩张性心肌病,心功能Ⅲ级（NYHA分级）;（2）心律失常,频发室性早搏;（3）慢性肾功能不良尿毒症5期（CKD－5期）,肾性高血压;（4）多囊肾。入院后,行6min步行测试,距离为295m。超声心动图检查,示左心室舒张末内径76mm,左心室收缩末容积229ml,左心室射血分数0．25,     

早期心肌缺血状态下左心室腔内涡流特征研究

运用超声心动图的血流向量成像技术（VFM）定量评估早期心肌缺血患者左室涡流的结构及位置等特征,以期发现有助于诊断早期心肌缺血的新指标。方法 疑似心绞痛患者共105例,射血分数正常,既往无心脏病史和心梗病史。依据冠脉造影结果分成早期心肌缺血组（冠脉狭窄>75%）n=56和对照组（无明显冠脉狭窄或<75%）n=49例,进行常规超声检查后,行VFM检查,存图后将VFM资料导入超声工作站脱机分析得到涡流各项参数并将两组结果进行比较和统计学分析。涡流各项参数包括：涡量（QMAX）、涡流半径、直径（r、R）、面积（S）及涡强(Q/S)。结果 与对照组相比,涡流的流量、面积及半径等参数无差异（P>0.05）,但是早期心肌缺血组涡强比对照组显著降低,两者比较有差异,分别为：23.68±11.66/20.20±6.29 (P<0.05）。结论 超声心动图的VFM技术对于定量评估左室涡流的可行性较高,其中涡强(Q/S)可能成为诊断早期心肌缺血的新指标。     

人双突变型低氧诱导因子1α腺病毒载体的构建及鉴定

目的 构建人双突变型HIF-1α-Ala402-Ala564腺病毒表达载体,研究人双突变型低氧诱导因子1α基因对冠心病的血管新生作用.方法 在业已完成的pShuttle2-HIF-1α-Ala564的基础上,用PCR定点突变的方法将其第402位脯氨酸密码子CCA突变为丙氨酸密码子GCA,构建成双突变HIF-1α真核表达载体pShuttle2-HIF-lα-Ala402-Ala564,通过体外连接法与线性化的腺病毒骨架质粒连接,重组成pAdeno-HIF-1α-Ala402-Ala564腺病毒质粒,经酶切及测序鉴定正确后,包装成为重组Adeno-HIF-1α-Ala402-Ala564腺病毒.结果 经酶切鉴定及基因测序证实重组腺病毒质粒构建成功.结论 成功构建重组腺病毒Adeno-HIF-1α-Ala402-Ala564(双突变型),为冠心病的突变型HIF-1α基因治疗研究奠定基础.     

携EGFP的人低氧诱导因子-1α腺病毒载体的构建及鉴定

目的 构建携EGFP的人低氧诱导因子(hypoxia-induciblefactor 1 alpha,HIF-1α)腺病毒表达载体,为研究人HIF-1α基因对冠心病的血管新生作用奠定基础.方法 采用分子克隆技术,以Kpn Ⅰ、Apa Ⅰ双酶切pcDNA3.1( )-HIF1α质粒获得HIF-1α cDNA,克隆到质粒pEGFP-C1,以Nhe Ⅰ、Apa Ⅰ双酶切得到EGFP-HIF-1α cDNA,重组到穿梭质粒pShuttle2,再以PI-Sce Ⅰ和I-Ceu Ⅰ双酶切重组穿梭质粒,获得含有EGFP-HIF-1α cDNA的表达盒,与线性化的腺病毒骨架质粒Adeno-X Viral DNA连接,重组成pAdeno-EGFP-HIF-1α腺病毒质粒,脂质体法转染HEK293细胞,荧光显微镜下观察结果,在HEK293细胞中包装成为重组Adeno-EGFP-HIF-1α腺病毒,并进行PCR鉴定及滴度测定.结果 经酶切鉴定及PCR证实重组腺病毒质粒构建成功,包装后冻融细胞的上清PCR检测重组腺病毒包装成功,病毒滴度为2×109nfu/ml.结论 成功构建重组腺病毒Adeno-EGFP-HIF-1α,为冠心病的HIF-1α基因治疗研究奠定更直观的基础.     

扩张型心肌病患者左心室涡流特征研究

目的 运用血流向量成像技术（vector flow mapping,VFM） 评价扩张型心肌病（dilated cardiomyopathy,DCM） 患者左心室涡流特征,探索临床评价心功能的新方法。方法 选取健康志愿者40 例和DCM 患者20 例作为研究对象,行常规超声心动图和VFM 检查,采集图像后进行脱机分析,观察左心室涡流的演变规律,定量评估涡流各项参数,并进行统计学分析。结果 与对照组相比,DCM 患者涡流形态和位置变化更多,最大流量（Qmax） 增大（P ＜0.05）,半值面积（S） 及半径（r） 明显增大（P ＜0.01）,而涡流的涡强（Qmax/S） 显著减小（24.21±10.62 vs 15.27±7.92,P ＜0.01）,涡强与左室射血分数呈正相关（r =0.417,P =0.000）。结论 DCM 患者左室涡流的演变规律与正常状态大致相同,但涡流明显增大;舒张期涡流的涡强可能成为评价左心收缩功能的新指标。     

突变型HIF—1α基因对人骨髓间充质干细胞分化成心肌样细胞的影响术

目的探讨突变型低氧诱导因子1α（hypoxia inducible factor—1α,HIF-1α）基因对体外诱导环境人骨髓间充质干细胞（human mesenchymal stem cells,hMSCs）分化成心肌样细胞（cardiomyocyte—like）过程中的影响。方法重组腺病毒Ad—HIF-1αnature、Ad—HIF-1α564、Ad—HIF-1α564／402和Ad—HIF—1α564／803以最佳转染复数转染体外5-氮胞苷（5-azacytidine,5-aza）诱导的hMSCs,诱导培养后第4周,提取细胞浆蛋白,一步法酶联免疫分析检测心肌肌钙蛋白I（cTnI）含量;Western blot测定HIF-1α及VEGF蛋白表达水平。结果5-aza诱导hMSCs第4周cTnI值：Ad—HIF—1αnature（0．426&#177;0．001）、Ad—HIF—1α564（0．424&#177;0．002）、Ad—HIF—1α564／402（0．428&#177;0．005）、Ad—HIF—1α564/803（0．441&#177;0．003）、空白组（0．411&#177;0．010）、Ad—LacZ（0．410&#177;0．016）,各实验组有显著性差异（P〈0．05）;Ad—HIF—1α564/803组cTnI表达高于Ad—HIF—1α nature、Ad—HIF-1α564/803、Ad—HIF-1α564/803三组（P〈0．05）。Western blot结果显示Ad—HIF—1αnature、Ad—HIF—1α564、Ad—HIF—1α564／402和Ad—HIF-1α564／803四组HIF-1α及VEGF蛋白表达水平均较Ad—LacZ组高,有显著性差异（P=0．000）,但Ad—HIF-1α564、Ad—HIF-1α564／402和Ad—HIF-1α564／803与Ad—HIF-1αnature相比,各组间两种蛋白表达差异均无显著性（P〉0．05）。结论野生型HIF-1α基因及突变型能促进5-aza诱导的hMSCs向心肌样细胞转化,为HIF-1α及hMSCs在心肌再生中的联合应用奠定了实验基础。