基于蛋白质组学技术筛选葛根芩连汤防治胰岛素抵抗作用的血清差异表达蛋白

目的采用蛋白质组学技术筛选鉴定2型糖尿病胰岛素抵抗模型大鼠模型组、葛根芩连汤组血清差异表达蛋白,推测葛根芩连汤防治胰岛素抵抗的机制。方法葛根芩连汤组和模型组通过体内高脂饲料联合链脲佐菌素建立大鼠胰岛素抵抗动物模型,连续灌胃给药3个月,于末次给药后1h,取血清,去除高丰度蛋白后,进行蛋白变性、还原、烷基化、酶解及脱盐后,利用液相Thermo EASY-nlc1000和质谱仪LTQ orbitrap Elite分析鉴定,利用Xcalibur软件和Thermo Proteome discoverer1,4进行数据处理,采用SIEVE v2.1×64进行无标定量分析寻找相关差异蛋白,筛选并鉴定差异表达蛋白,并对差异表达蛋白进行生物信息学分析。结果通过质谱鉴定分析,葛根芩连汤组与模型组差异表达蛋白76个,其中上调49个,下调27个。分析显示差异蛋白主要涉及细胞周期调控、炎症反应、信号通路调节等生物过程。其中上调蛋白磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)(Q63788)、胰岛素受体底物蛋白(IRS)(P35570)等以及下调蛋白载脂蛋白C-Ⅲ(APOC-Ⅲ)(P06759)、肝型脂肪酸结合蛋白(FABP1)(P02692)等差异蛋白可能参与了胰岛素信号转导等通路。结论通过有效的比较分析,得到了一些参与胰岛素信号转导等通路的差异表达蛋白,为研究葛根芩连汤防治胰岛素抵抗的分子机制提供了新靶点。     

小檗碱和黄芩苷对葡萄糖氧化酶法测定葡萄糖含量干扰作用研究

目的：探讨小檗碱和黄芩苷对葡萄糖氧化酶（GOD）法测定葡萄糖含量的干扰作用。方法：用GOD法测定加入不同浓度小檗碱和黄芩苷的含血清培养基葡萄糖含量结果,对其结果进行分析、比较。结果：对照组与小檗碱和黄芩苷给药组间葡萄糖含量无显著差异,表明小檗碱和黄芩苷对GOD测定葡萄糖含量无明显干扰作用（1-200μmol/L）,结论：在用GOD法测定葡萄糖含量时,小檗碱和黄芩苷对GOD测定葡萄糖含量无明显干扰作用（1-200μmol/L）。     

黄芩-黄连抗神经炎症的配伍优势及其调控TLR4/MyD88/NF-κB信号通路的潜在靶点

目的 探索黄芩-黄连防治神经炎症的配伍优势,并基于Toll样受体4（TLR4）/髓样分化因子88（MyD88）/核转录因子-κB（NF-κB）通路,阐明黄芩-黄连配伍优势的作用特点及机制。方法 选取体外具有代表性的小鼠小胶质细胞（BV2）,将BV2分为8组,分别为正常组、模型组、黄芩-黄连组、吡拉西坦组、黄芩组、黄连组;利用细菌脂多糖（LPS）建立BV2细胞炎症模型,通过细胞增殖活性检测（CCK-8）试剂盒检测细胞活性;明场下观察细胞形态;酶联免疫吸附测定法（ELISA）、免疫荧光法测定药物对BV2细胞促炎因子产生及释放的影响;实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测TLR4、MyD88、NF-κB mRNA表达;细胞免疫荧光检测NF-κB p65核转位情况;通过TLR4信号转导抑制剂CLI-095、NF-κB阻断剂PDTC进行黄芩-黄连抗神经炎症作用靶点的确认。结果 与正常组比较,LPS诱导的模型组细胞大多处于激活状态,培养液及细胞内的IL-6、TNF-α、IL-1β含量显著升高（P<0.01）,TLR4、MyD88、NF-κB p50及NF-κB p65的mRNA表达显著升高（P<0.01）,NF-κB p65的入核现象明显;与模型组比较,黄芩-黄连、吡拉西坦组预处理后,BV2细胞形态大部分恢复,IL-6、TNF-α、IL-1β水平均显著降低（P<0.01）,TLR4、MyD88、NF-κB p50及NF-κB p65 mRNA表达明显降低（P<0.05,P<0.01）,NF-κB p65大多存在于细胞质中;黄芩组、黄连组与模型组比较,细胞形态略有恢复,促炎因子水平及TLR4、MyD88、NF-κB p50、NF-κB p65 mRNA表达量有所降低;与黄芩-黄连组比较,黄芩组、黄连组的促炎因子抑制作用效果显著低于药对组;与模型组比较,应用信号通路特异抑制剂“黄芩-黄连+CLI-095”组、“黄芩-黄连+PDTC”组,能够明显降低TLR4、MyD88、NF-κB p50及NF-κB p65的mRNA表达（P<0.05,P<0.01）,并明显抑制NF-κB p65转入细胞核内。结论 黄芩与黄连相须配伍后的抗神经炎症作用明显优于单味黄芩或黄连;该药对的抗神经炎症优势与抑制小胶质细胞中的TLR4/MyD88/NF-κB信号通路激活密切相关;通过验证说明TLR4、MyD88、NF-κB为黄芩-黄连发挥药对配伍优势的潜在靶点。     

小檗碱对白介素-6诱导胰岛素抵抗 3T3-L1脂肪细胞脂联素表达的影响

目的:观察小檗碱对白介素-6(IL-6)诱导胰岛素抵抗的3T3-L1脂肪细胞脂联素表达的影响。方法:选用IL-6诱导3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗(IR)模型。以20μg·L-1IL-6培养48 h,将3T3-L1脂肪细胞随机分为正常对照组、模型组、吡格列酮组(50μmol.L-1)和小檗碱高、中、低剂量组(10,20,50μmol.L-1),以葡萄糖氧化酶法测定葡萄糖消耗量,观察小檗碱对脂肪细胞葡萄糖摄取的影响,鉴定IR模型;采用实时荧光定量PCR技术测定脂肪细胞脂联素基因mRNA水平。结果:模型组葡萄糖消耗量及脂联素基因表达水平与正常对照组比较,均显著降低(P<0.05);小檗碱高、中、低剂量组及吡格列酮组均能显著增加葡萄糖消耗量及脂联素基因表达水平(P<0.05)。结论:小檗碱可增加白介素-6诱导胰岛素抵抗的3T3-L1脂肪细胞脂联素基因mRNA的表达,改善胰岛素抵抗状态。     

基于转录组学和蛋白质组学分析小檗碱抗糖尿病慢性炎症机制

目的:通过LPS诱导的RAW264.7细胞炎症模型,应用转录组学和蛋白质组学技术探究小檗碱抗糖尿病慢性炎症机制.方法:RAW264.7细胞通过LPS(0.1 μg·mL-1)诱导,给予小檗碱(1 μg·mL-1),分别提取蛋白和RNA,进行蛋白质组学和转录组学分析,分别找出差异表达蛋白和差异表达基因,并进行基因本体(G...     

补阳还五汤抗动脉粥样硬化与间隙连接蛋白关系的研究

目的:探讨补阳还五汤对同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)致动脉粥样硬化(AS)的保护作用与细胞间隙连接蛋白(connexin,Cx)的关系。方法:将32只雄性载脂蛋白E基因敲除(ApoE-/-)小鼠随机分为模型组、补阳还五汤低、中、高剂量组,以正常雄性C57BL/6J小鼠设正常对照组。模型组和治疗组采用Hcy ig造模,0.1 g.kg-1.d-1。造模同时,治疗组分别ig补阳还五汤(5,10,20 g.kg-1.d-1)。8周后观察和测量主动脉根部AS斑块面积、血管壁面积,检测主动脉组织活性氧(ROS)含量,p38MAPK,ERK,Cx37,Cx43蛋白表达变化。结果:模型组AS病变明显,主动脉组织中ROS含量(17.01±1.31)×105 RFU与正常对照组ROS含量(2.73±0.18)×105 RFU相比显著升高(P<0.01);模型组与正常组比p38MAPK,ERK,Cx43蛋白表达明显增高,Cx37蛋白表达显著降低;不同剂量的补阳还五汤改善AS病变的同时显著降低血管组织中ROS含量,下调p38MAPK,ERK,Cx43的蛋白表达水平,提高Cx37蛋白的表达水平。结论:补阳还五汤可能通过拮抗有丝分裂激活蛋白激酶磷酸化水平,改善细胞间隙连接而抗Hcy所致动脉硬化的作用。     

中药及其天然产物通过靶向铁死亡治疗癌症研究进展

铁死亡是一种独特的铁依赖性的细胞死亡方式,一种不同于细胞凋亡、各种形式的坏死和自噬的新型死亡表型。许多从中药中提取的活性成分可在不同癌症中通过诱导铁死亡发挥抗癌作用。越来越多的研究发现,对铁死亡的调控可影响肿瘤细胞对药物的敏感性,甚至逆转耐药。一些天然产物与化学治疗药物如顺铂、氟尿嘧啶、吉西他滨等联用可通过诱导铁死亡增强癌细胞对药物的敏感性。该文主要总结了可以通过诱导铁死亡发挥抗癌作用的中药及其天然产物,可为癌症治疗和逆转耐药提供新思路,同时也为发掘中药的潜在优势、拓宽中药的应用范围提供参考。     

复方木姜叶柯活性茶对高尿酸血症肾病小鼠尿酸和肾功能的影响

目的 探究复方木姜叶柯活性茶对高尿酸血症肾病小鼠的尿酸和肾功能的影响,为开发治疗高尿酸血症肾病的药物和功能性食品提供实验依据。方法 采用氧嗪酸钾联合腺嘌呤建立高尿酸血症肾病小鼠模型。小鼠随机分为空白组、模型组、阳性组(10 mg/(kg·d))、复方茶高、中、低剂量组(10 g/(kg·d))、3.33 g/(kg·d)、1.11 g/(kg·d))。末次给药1 h后,取尿液,采用CBB法测定尿蛋白(UP),脲酶法检测尿液尿素氮(UUN);眼眶取血,采用酶比色法检测尿酸(UA)含量,脲酶法检测血清尿素氮(BUN)含量,酶联免疫法检测白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子(TNF-α)含量;取肾组织,荧光定量分析法检测尿酸盐转运蛋白1(URAT1)及葡萄糖转运体9(GLUT9)含量,HE染色观察肾组织病理变化情况。结果 与空白组相比,模型组小鼠中UP、UUN、UA、BUN、IL-6、URAT1、GLUT9及TNF-α水平显著增高(P<0.01,P<0.05),肾组织结构正常。与模型组相比,阳性组中UP、UUN、UA、BUN、URAT1、IL-6、TNF-α水平显著降低(P&l...     

片仔癀治疗肝脏疾病的药理作用研究进展

片仔癀为国家中药一级保护品种,具有清热解毒、活血化瘀、消肿止痛之功效。现代药理学研究结果表明,其具有抗炎、抗氧化、抗细胞凋亡、促进脂肪代谢和促进酒精代谢等药理作用,被广泛应用于慢性肝炎、酒精性肝病、化学性肝损伤、肝癌等各种肝脏疾病的治疗。流行病学研究表明,无论临床研究,还是实验研究,片仔癀在肝病治疗上具有明显的保肝护肝效果,其可能机制与抗病毒促转阴、调控脂质代谢及调控NF-κB信号、抗氧化、抑制癌细胞增殖等密切相关。然而片仔癀是如何通过具体生物学内在作用机制来治疗肝系疾病还尚不明了。因此,进一步深化研究片仔癀保肝护肝的物质基础及作用靶点,对于片仔癀等中药复方的二次开发具有重要价值。     

黄芩黄连药对改善2型糖尿病KK-ay小鼠肝组织炎症作用与TRAF6、IL1α、NF-κB2、RSK1、RSK2蛋白表达下调相关

目的 采用蛋白质组学方法探讨黄芩黄连药对改善2型糖尿病KK-Ay小鼠肝组织的炎症作用机制.方法 从2型糖尿病模型组和黄芩黄连药对组KK-Ay小鼠肝组织中提取全蛋白,使用nano-LC-LTQ/Orbitrap MS检测差异蛋白,使用Proteome Discoverer软件鉴定蛋白,Sieve软件对肝组织蛋白进行数据分...