重组人降钙素在大肠杆菌的表达和纯化

重组人降钙素在大肠杆菌的表达和纯化王官将毛积芳窦鸿蔡在龙邹鲁峰人降钙素（Ｈｕｍａｎｃａｌｃｉｔｏｎｉｎ，ｈＣＴ）是甲状腺滤泡旁细胞分泌的多肽激素，在体内参与钙、磷代谢的调节。临床上降钙素用于治疗各种疾病，如高血钙症、骨质疏松症和骨瘤病等，具有副作用小...     

烫伤早期大鼠肾皮质细胞氧自由基、Ca~（2＋）细胞化学和Ca~（2＋）－Mg~（2＋）－ATP酶活性的变化

研究重度烫伤大鼠肾皮质细胞膜（质膜、内质网及线粒体膜）Ｃａ２＋－Ｍｇ２＋－ＡＴＰ酶活性、细胞内Ｃａ２＋定位和半定量及肾皮质内Ｈ２Ｏ２（氧自由基）定位，以探讨烫伤早期肾损伤的机制。方法：化学法和细胞化学法。结果：发现肾小管细胞内Ｃａ２＋浓度升高在烫伤后６０ｍｉｎ达到高峰，Ｃａ２＋－Ｍｇ２＋－ＡＴＰ酶活性在６０或１２０ｍｉｎ为最低，并与亚细胞结构的损伤程度显著相关。烫伤后３０ｍｉｎ肾皮质间质毛细血管及肾小球毛细血管壁出现Ｈ２Ｏ２细胞化学阳性沉积物，６０ｍｉｎ时消失。以上变化在观察时间内（５ｈ）具有可恢复性。结论：严重烫伤时肾缺血，皮质毛细血管内皮细胞受氧自由基损伤，改变了血管通透性，引起组织水肿，继而Ｃａ２＋泵活性下降，Ｃａ２＋过载，进一步影响细胞结构和功能。     

高密度培养大肠杆菌表达重组人胰高血糖素样肽-1

目的:高密度发酵培养表达重组人胰高血糖素样肽-1(hGLP-1).方法:将构建的重组质粒pGEX-hGLP-1转化大肠杆菌BL21(DE3),得到表达hGLP-1的工程菌株E.coli BL21(DE3)/pGEX-hGLP-1.在500 ml三角摇瓶中进行了诱导条件的摸索实验,之后用5 L自控发酵罐对工程菌进行高密度培养,以获取hGLP-1和谷胱甘肽S-转移酶融合蛋白(GST-hGLP-1).结果:采用分批培养和补料分批培养相结合的技术,控制碳源和氮源的补加,控制溶解氧的量,可使重组工程菌发酵光密度D600值达52,融合蛋白的表达量占菌体总蛋白量的28％,其含量达到2.1 g/L.用ESI质谱鉴定hGLP-1相对分子质量与理论值一致.结论:本研究为大规模生产重组hGLP-1奠定了基础.     

烫伤早期大鼠肾皮质细胞氧自由基,Ca^2＋细胞化学和Ca^2＋—Mg…

研究重度烫伤大鼠肾皮质细胞膜Ｃａ＾２＋－Ｍｇ＾２＋－ＡＴＰ酶活性，细胞内Ｃａ＾２＋定位和半定量及肾皮质内Ｈ２Ｏ２定位，以探讨烫伤早期肾损伤的机制。     

人胰高血糖素样肽-1 cDNA的克隆与表达

目的：克隆人胰高血糖素样肽-1（hGLP-1)cDNA,构建原核表达质粒pGEX-4T-3/hGLP-1cDNA,并诱导表达谷胱甘肽疏基转移酶-hGLP-1(GST-hGLP-1)融合蛋白。方法：采用亚磷酸二酯法合成6个hGLP-1cDNA的寡核苷酸片段,拼接成完整的hGLP-1cDNA,克隆至pBSSK( /-)载体中,经双酶切鉴定和测序后把hGLP-1cDNA定向插入融合基因表达体pGEX-4T-3的多克隆位点上,构建重组质粒pGEX-4T-3/hGLP-1cDNA,并转化大肠杆菌TG1。结果：经限制性内切酶合蛋白GST-hGLP-1,为进一步获得大量可供实验研究和临床应用的重组hGLP-1创造条件。     

人降钙素cDNA的化学合成与克隆

目的；克隆人降钙素ｃＤＮＡ。方法和结果；应用ＡＢＩ３９１ＤＮＡ合成仪，将人降钙素ｃＤＮＡ分成６个片段合成。退火、磷酸化，连接，最终将人降钙素ｃＤＮＡ克隆于载体ｐＧＥＭ７Ｚ（＋），经ＤＮＡ双链测离，证明克隆利的人降钙素ｃＤＮＡ序列与设计的完全一致。结论；本研究为寡肽ｃＤＮＡ的化学合成与克隆提供了简捷、可靠的方法；为人的降钙素ＤＮＡ的主效表达奠定了基础。     

Chemical synthesis and cloning of human calcitonin (hCT) cDNA

Humancalcitonin(hCT)isanoligo--peptidehormonecontaining32aminoacidresidues(aa)whichisproducedbytheC--parafollicularcellsofthethyroidglandinhumans.Togetherwiththearathyoidichormoneand1,25--dihydroxycholecalciferol,hCTplaysanimportantroleintheregulationofcalciumandphosphatemetabolism.Itstimulatestheimmobilizationofthecalciuminthebonesystem,preventingtheresorptionofthebones.ThehCThasbeenadministeredfortreatmentofpatientssufferingfromvariousdiseaseswherestronghypercalcemiaorboneresorptionoccurs…     

高密度培养大肠杆菌TG1/pGEX-hCT和高表达重组人降钙素

目的：高密度、高表达培养重组大肠杆菌ＴＧ１／ｐＧＥＸ－ｈＣＴ,生长重组人降钙素（ｒｈＣＴ）。方法与结果：应用ＮＢＳ ＢｉｏＦｌｏ３０００型５Ｌ自控发酵罐,采用分批培养和补料分批培养相结合的培养技术,控制碳源和氮源的补加,控制溶解氧,使重组菌Ｅ．ｃｏｔｉ ＴＧ１／ｐＧＥＸ ｈＣＴ发酵光密度（Ｄ（６００））达到５８．６,人降钙素和ＧＳＴ融合蛋白（ＧＳＴ－ｈＣＴ）的含量达到３．２ｇ／Ｌ。结论：本研究为工