表达CTLA4抗体的重组流感病毒构建及溶瘤效果研究

目的拯救表达免疫检查点CTLA4抗体的重组流感病毒,全面鉴定并体内外实验评价其溶瘤效果。方法利用流感病毒反向遗传学(reverse genetics,RG)技术,以A/Puerto Rico/8/34(PR8)为载体,分别在PR8病毒PB1和PA基因片段插入免疫检查点CTLA4抗体的重链和轻链构建重组质粒pFlu-CTLA4-PB1、pFlu-CTLA4-PA,与PR8病毒的其余6个质粒pHW191-PB2、pHW194-HA、pHW195-NP、pHW196-NA、pHW197-M、pHW198-NS共转染COS-Ⅰ和MDCK细胞,经拯救、筛选、鉴定获得重组溶瘤流感病毒,命名为rFlu-muCTLA4。通过血凝试验、EID_(50)、PCR等方法全面鉴定;ELISA测定anti-CTLA4抗体含量;3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-5-(3-carboxymethoxyphenyl)-2-(4-sulphophenyl)-2H-tetrazolium 3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-5(MTS)细胞活力测定重组病毒对小鼠肝癌H22细胞的杀伤效果;利用小鼠肝癌模型,评价重组病毒在体内对肿瘤的抑制效果。结果 rFlu-muCTLA4的血凝效价为2~9～2~(10),且能够在鸡胚中稳定传代;EID_(50)为10~(-8)EID_(50)/ml;重组病毒的PB1、PA片段与预期大小一致;重组病毒接种鸡胚培养2 d可检测到anti-CTLA4抗体,4天达到高峰值。MTS结果显示,rFlu-muCTLA4能特异性杀伤H22细胞活力,呈现剂量依赖性。动物实验表明,重组病毒能显著减小小鼠肝癌肿瘤体积,提高动物存活率并延长存活时间。结论表达免疫检查点CTLA4抗体的重组流感病毒rFlu-muCTLA4在体内外能靶向杀伤肝癌细胞,有望为溶瘤病毒靶向治疗肝癌提供新的思路。     

药物疗法在绝经期妇女取环术中的疗效观察

目的:探讨取环术前口服用药对绝经期妇女的宫颈软化扩张作用.方法:对200例绝经期带环妇女随机分为四组,A组术前12小时口服米非司酮50mg;B组术前一周口服倍美力0.625g,每日一次,阴道涂抹倍美力软膏0.5mg,每日一次,用药一周后取环;C组术前一周一次性口服尼尔雌醇片5mg,一周后取环;D组术前不服任何药物.分别观察四组宫颈软化及扩张情况,取环所用时间,失血量及成功率.结果:A、B、C三组宫颈软化及扩张明显优于D组,取环成功率也明显高于D组,手术时间、失血量及患者综合反应程度均明显低于D组.结论:术前应用药物有利于宫颈软化及扩张,取环成功率高,痛苦小,方法简便安全,值得临床推广.     

人工流产后放置节育器的临床观察

人T流产是避孕失败的补救措施,为避免反复的非意愿妊娠发生导致反复的人丁流产,许多育龄妇女选择人工流产后即时放置节育器（IUD）。为了广大育龄妇女的身心健康,减轻放置IUD后的副作用和并发症的发生,我站于2005年7月以后对女扎手术失败的妇女、人工流产2次以上的妇女及放置普通I—UD失败的妇女放置吉妮IUD或爱母IUD,现就人工流产后放置吉妮IUD和爱母IUD的临床效果比较如下：     

药物治疗和清宫治疗不全流产的疗效观察

不全流产常发生于较晚期妊娠（10周以后），胎盘正在发育和形成，流产时部分胎儿及部分胎盘排出，整个胎盘或部分胎盘仍附在子宫壁上，子宫不能很好收缩，以致阴道出血，如病程较长，易导致宫内感染。宫内残留物与宫壁粘连机化，治疗困难，最终仍需手术清宫。近年来，我站对不全流产患者使用药物治疗和手术清官两种不同的方法，现报告如下。     

两质粒系统重配甲型H1N1流感病毒株的研究

目的构建两质粒冷适应流感病毒拯救系统,提高流感病毒的重配效率。方法本研究通过构建克隆载体pfastbac△plh HTB,将流感病毒A/Ann Arbor/6/60(H2N2)6个内部基因(PB2、PB1、PA、NP、M、NS)的双向转录表达元件定向克隆入此载体,获得pfastbac△plh HTBP6。同时将流感病毒A/California/7/2009(H1N1)表面基因(HA、NA)双向转录表达元件定向克隆入p ENTR-1A质粒,获得p ENTR-1AP2。将2个重组质粒共转染MDCK/COSI细胞,细胞上清接种10日龄SPF鸡胚,收取尿囊液,血凝实验筛选阳性株,并进行全面鉴定。结果本研究利用两质粒系统成功重配甲型H1N1流感病毒株,命名为TRG A/California/07/2009(H1N1)Vca,重配病毒株传代后HA效价为2~8,形态符合流感病毒典型特征,大小80~120 nm,具有冷适应、温度敏感表型。结论两质粒流感病毒拯救系统为高效重配流感疫苗株提供了新策略。     

嵌合人源CTLA4抗体的重组流感病毒选择性杀伤肝癌细胞的研究

目的 拯救嵌合人源免疫检查点细胞毒性T淋巴细胞（huCTLA4）抗体的重组流感病毒株,对其选择性杀伤肝癌细胞的效果进行全面鉴定并评价。方法 通过反向遗传学（reverse genetics,RG）技术,以A/PuertoRico/8/34(PR8)为载体,将编码人源CTLA4(huCTLA4)抗体重链和轻链的基因分别插入到PR8病毒的PB1和PA基因片段,构建重组质粒pFlu-huCTLA4-PB1、p Flu-huCTLA4-PA,与PR8病毒的剩余6个骨架质粒p HW191-PB2、pHW194-HA、pHW195-NP、pHW196-NA、pHW197-M、pHW198-NS共转染COSⅠ和MDCK细胞,经病毒拯救、筛选、鉴定获得重组溶瘤病毒,命名为r Flu-huCTLA4。进一步通过血凝、TCID50测定重组流感病毒滴度;电镜观察病毒形态及大小分布;ELISA法测定huCTLA4抗体含量;结晶紫、MTS方法测定重组病毒对肝癌细胞的选择性杀伤效果;流式细胞术检测重组病毒诱导肝癌细胞死亡方式。利用人源肿瘤异种移植模型肝癌小鼠模型,评价rFlu-huCTLA4在动物体内抗肿瘤作用。...     

浅议紧急避孕药

紧急避孕是指在无防护性生活或避孕失败后的一段时间内,为了防止妊娠而采用的避孕方法 ,药物避孕是其中最常用的方法。1应用现状女性朋友在遭受意外伤害或其他原因进行了无防护性生活或者避孕失败，     

中西医结合治疗药流后输卵管阻塞的疗效

目的:探讨用中西医结合治疗药物流产后输卵管阻塞继发性不孕症的临床效果.方法:选择有药物流产史不孕症患者50例,经行输卵管碘油造影术诊断为输卵管阻塞,随机分成两组,一组为中西医治疗组25例(采用输卵管通液、通药结合口服中药煎剂);另一组为单纯西药对照组(输卵管通液、通药治疗)25例.结果:中西医结合治疗比单纯输卵管通液、通药治疗效果明显,两组总有效率比较差异具有统计学意义(P<0.05).结论:中西医结合治疗药物流产后输卵管阻塞所致的继发性不孕症疗效显著,值得临床推广.     

武装GV1001的重组溶瘤流感病毒构建及抗肿瘤作用研究北大核心CSCD

目的拯救嵌合GV1001的重组溶瘤流感病毒株,并通过体内外实验全面评价其选择性杀伤肝癌的效果。方法将编码GV1001肽的碱基序列串联重复3次序列优化设计后插入到A/PuertoRico/8/34(PR8)病毒的NA片段。采用反向遗传学技术,重组质粒pOV-GV1001-NA与pHW191-PB2、pHW192-PB1、pHW193-PA、pHW194-HA、pHW195-NP、pHW197-M、pHW198-NS PR87个质粒共同转染COS 1/MDCK细胞,拯救得到重组溶瘤病毒rOV-GV1001-NA。经过血凝实验、TCID_(50)、PCR、透射电镜、细胞免疫荧光等鉴定,流式细胞术检测rOV-GV1001-NA诱导肝癌细胞死亡的方式,进一步通过肝癌H22细胞小鼠皮下荷瘤模型评价rOV-GV1001-NA体内溶瘤效果。结果重组溶瘤病毒rOV-GV1001-NA血凝效价为2^(9),病毒滴度达5 LogTCID_(50)/ml,并可在SPF鸡胚中稳定传代;电镜观察形态大小符合流感病毒特点;细胞免疫荧光证明GV1001成功插入并表达;细胞凋亡实验表明rOV-GV1001-NA可选择性诱导肝癌细胞凋亡;肝癌小鼠皮下荷瘤模型证实rOV-GV1001-NA可显著抑制肿瘤生长,延长小鼠生存期,且具有剂量依赖性。结论利用反向遗传学技术成功构建了武装GV1001的重组溶瘤流感病毒,体内外实验表明rOV-GV1001-NA能够靶向杀伤肝癌细胞而对正常细胞无明显影响,该结果将为肿瘤疫苗研究提供新思路,有望为肝癌临床治疗开辟新途径。     

表达PD1抗体的重组溶瘤流感病毒株的构建及效果评价

目的 拯救表达免疫检查点PD1抗体的重组流感病毒株,并评价其体内外靶向杀伤肝癌的效果.方法 利用反向遗传学技术,选择流感病毒株A/PuertoRico/8/34(PR8)为载体,将免疫检查点抑制剂PD1抗体的重链和轻链分别插入到PR8病毒株PB1、PA基因片段构建重组质粒pFlu-PD1-PB1、pFlu-PD 1-P...