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目的:研究β趋化因子受体5(CCR5)NH2端膜外第一襻结构域的功能及其特异抗体F(ab′)2的制备。方法:计算机分析趋化因子超基因家族,定位超基因家族中同源顺序最低的结构域NH2端膜外结构域,PCR扩增出该结构域114个核苷酸序列。构建融合表达载体pGEX-IN/NR5,经测序鉴定正确后,在E.coli中表达,经纯化后免疫新西兰兔。蛋白A亲和层析和胰蛋白酶消化IgG,经Sepharose-12柱层析制备F(ab′)2。结果:经还原和非还原聚丙烯酰胺凝胶电泳和FAX分析证明得到抗CCR5NH2端的特异性抗体。结论:本方法为一简捷快速的特定功能结构域抗体F(ab′)2制备方法,对研究该基因在体内的表达及生物学功能提供了重要的实验材料,同时也对超基因家族中亚家族特异抗体研制提供了一种研究思路和方法。 相似文献
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抗生物素蛋白(Avidin)是对生物素(Bi-otin)有极强亲和性的一种糖蛋白。近几年,国外文献屡有报道将Avidin-Biotin系统引入酶联免疫、放射免疫和荧光免疫等检测技术中,改善了这些检测方法的稳定性和特异性,大大提高了灵敏度,为微量抗原和抗体的检测开辟了新的途径,受到国内外免疫工作者 相似文献
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抗生物素蛋白——生物素系统在免疫学中的应用 总被引:1,自引:0,他引:1
抗生物素蛋白(Avidin)是与生物素(Biotin)有极强亲和性的一种糖蛋白。自七十年代末起,抗生物素蛋白—生物素系统(ABS)开始引入酶联免疫、放射免疫和荧光免疫等检测技术中,改善了这些方法的稳定性和特异性,大大提高了方法的灵敏度,为微量抗原和抗体的检测开辟了新途径,日益受到国内外免疫学工作者的普遍重视。抗生物素蛋白是由鸡、鸟、蜥蜴等动物输卵管中分泌的一种硷性糖蛋白,鸡蛋中含量比较丰富,占总蛋白的0.05%。早在1927年,Boas用生鸡蛋清饲养大白鼠,结果引起了大鼠皮炎。1936年,Kogl从鸡蛋黄中分离出一种小分子物质,因能促进培养液中酵母菌的生长,故取名为酵母菌生长因子。1939年,Gyngy证明这种因子能治疗喂饲蛋清引起的大鼠皮炎,又将其改名为 相似文献
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乙型肝炎前S1蛋白的融合表达 总被引:2,自引:0,他引:2
研究发现 ,肝炎病毒前 S1和前 S2蛋白与 HBV的复制密切相关 ,而前 S1蛋白较前 S2蛋白在 HBV的致病机制上可能起着更为重要的作用。现在越来越多的医院将检测前 S1蛋白做为 HBV复制的指标和判断 HBV活动性的一个重要依据。我国是肝炎高发区 ,HBVs Ag携带者为 1 .2亿以上 (全世界 3亿 ) ,为提高对 HBV的诊断、治疗和预防水平 ,我们克隆并对前 S1蛋白 1 2 9个氨基酸进行了融合表达、纯化和实验应用。现将实验结果报道如下。1 材料和方法1 .1 材料 HBV由上海长海医院杜风鸣教授提供。PCR kit、限制性内切酶 ,T4DNA连接酶购自… 相似文献
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人天然及重组IFN-γ免疫-PCR方法的建立及其敏感性额尔敦方建华郭美香刘士山程振球本文通过生物素标记抗IFN-γ单抗-链亲和素-生物素标记DNA连接方法建立了IFN-γ免疫PCR方法。用100μl兔抗IFN-γIgG20μg/ml包被液包被酶联板,... 相似文献