褐黄血蜱组织蛋白酶L的克隆和表达水平分析北大核心CSCD

目的对褐黄血蜱组织蛋白酶B(cathepsin L-like cysteine proteinase B,cathepsin L-lcp B)基因进行克隆及表达分析。方法基于褐黄血蜱唾液腺转录组文库中的Contig731序列设计引物,RACE法扩增cathepsin L-lcp BcDNA(Hf-CLlCPb)全长,qPCR法分析Hf-CLlCPb在不同吸血状态下雌成蜱不同组织的表达水平。结果Hf-CLlCPb全长1547bp,ORF框长1005bp,编码355个氨基酸;该基因在半饱血、饱血褐黄血蜱(♀)中的唾液腺表达量最高,卵巢、中肠、体壳次之;Hf-CLlCPb在半饱血褐黄血蜱(♀)中的表达量高于饱血褐黄血蜱(♀)。结论成功克隆出褐黄血蜱Hf-CLlCPb基因全长,qPCR检测Hf-CLlCPb基因在褐黄血蜱唾液腺中高表达。     

湖南省日本血吸虫线粒体coxl基因部分序列多态性的研究

目的研究湖南省日本血吸虫不同自然隔离群的线粒体细胞色素c氧化酶亚基1基因（coxl）部分序列（pcoxl）的变异，为阐明我国日本血吸虫的种群遗传结构奠定基础。方法采用聚合酶链反应（PCR）技术对湖南省岳阳君山、汨罗的日本血吸虫的pcoxl片段进行扩增、克隆及序列分析。结果获得480bp的pcoxl序列。经DNAstar软件分析，pcoxl序列有一定的种内差异（0～1．2％）。结论本研究为阐明我国日本血吸虫的种群遗传结构提供了数据。     

环媒恒温基因扩增法检测藤黄微球菌的研究

目的建立藤黄微球菌的环媒恒温基因扩增检测方法。方法基于藤黄微球菌23SrRNA基因部分序列设计1套（共4条）能够识别6个区域的特异性引物；优化扩增条件；评估该方法的特异性与敏感性。结果用7个参考株和大肠埃希菌等8种其他临床病原菌检验本检测法，成功地建立了环媒恒温基因扩增（LAMP）检测法。结论环媒恒温基因扩增法检测藤黄微球菌快速、灵敏高、特异性强。     

内引物在环媒恒温基因扩增技术中的作用研究

目的研究内引物在环媒恒温基因扩增（LAMP）中的作用,确定利用LAMP的同一套特异性引物区别具有单核苷酸差异的不同株型或同一株型的病原菌基因的可行性。方法采用PCR介导定点突变法对沙门氏菌invA基因定点突变,使其T669→A669、T725→A725,用原LAMP特异性引物扩增含单核苷酸差异序列,观察扩增结果。结果制备的点突变模板C大小与预期值（1 371 bp）一致。LAMP扩增的伤寒沙门氏菌CMCC50098标准株DNA产物的电泳条带呈梯状,而扩增模板C未扩出反应产物。结论LAMP不能利用同一套引物扩增具有单核苷酸差异的不同株型或同一株型的病原菌,即可利用同一套引物区分这些病原菌。     

microRNA及其研究现状

microRNAs（miRNAs）是新近发现的一类非编码小RNA分子,其基因存在于基因组的基因间隔区或者内含子当中,通过与靶基因的3’非编码区（untranslated region, UTR）结合,发挥特异性调节基因表达的功能。现已从动物体内发现了近12,000种miRNA,而这些miRNA在不同的物种间具有序列保守性,它们参与机体发育、细胞增殖、分化与死亡、激素分泌、肿瘤形成等多种生理、病理过程。本文通过对miRNA的发现、结构特征、合成与作用机制、分析方法、功能及在疾病治疗中的作用进行综述,对下一步研究进行了展望,以期为利用miRNA研究成果进行新药研制、疾病的诊疗提供新的思路和理论基础。     

新产褐黄血蜱卵原生质蛋白组成和状态研究

目的 分析新产褐黄血蜱卵原生质蛋白及功能,揭示蜱胚发育的物质需求,为创新免疫控蜱策略奠定基础。方法 采用LC/MS/MS技术,搜索唾液腺转录组文库鉴定褐黄血蜱卵原生质蛋白和高丰度卵成分。结果 检获特异性肽段503条,由此鉴定多肽137条,高可信的82条,属于79种蛋白,其中34种已知功能的分别属于酶类、蛋白酶抑制剂、转运蛋白、蛋白合成与修饰、免疫相关蛋白等五类;序列比对表明,在抑制剂和转运蛋白两类中,成员有明显的家族性;定量分析显示,在卵蛋白中,丰度最高的蛋白是contig＿43009+19714,另外三种分别为contig＿42244+44787、contig＿195、contig＿12613,其丰度排名依次为第2、6、7。电泳显示,新鲜卵蛋白大小25-400 ku之间,但分布不均,在近120 ku、90 ku等9处形成浓染条带;切带分析显示,9个条带中的高丰度蛋白均为contig＿43009、contig＿19714、contig＿42244、contig＿44787等Vn片段,说明蜱卵产出时其内的Vn(或Vg)已降解成大小不同的肽段。结论 新产褐黄血蜱卵原生质蛋白具有多样性、系统...     

新产褐黄血蜱卵原生质蛋白组成和状态研究北大核心CSCD

目的分析新产褐黄血蜱卵原生质蛋白及功能,揭示蜱胚发育的物质需求,为创新免疫控蜱策略奠定基础。方法采用LC/MS/MS技术,搜索唾液腺转录组文库鉴定褐黄血蜱卵原生质蛋白和高丰度卵成分。结果检获特异性肽段503条,由此鉴定多肽137条,高可信的82条,属于79种蛋白,其中34种已知功能的分别属于酶类、蛋白酶抑制剂、转运蛋白、蛋白合成与修饰、免疫相关蛋白等五类;序列比对表明,在抑制剂和转运蛋白两类中,成员有明显的家族性;定量分析显示,在卵蛋白中,丰度最高的蛋白是contig_43009+19714,另外三种分别为contig_42244+44787、contig_195、contig_12613,其丰度排名依次为第2、6、7。电泳显示,新鲜卵蛋白大小25-400 ku之间,但分布不均,在近120 ku、90 ku等9处形成浓染条带;切带分析显示,9个条带中的高丰度蛋白均为contig_43009、contig_19714、contig_42244、contig_44787等Vn片段,说明蜱卵产出时其内的Vn(或Vg)已降解成大小不同的肽段。结论新产褐黄血蜱卵原生质蛋白具有多样性、系统性和家族性。     

亚洲璃眼蜱唾液腺差异表达基因GP15的克隆和分析

目的 通过扩增Ha7．7，获得包含该EST的基因全长，以便研究该基因的生物学功能。方法 以Ha7．7-GSP-和Ha7．7-GSPz和Ha7．7-GSP。为引物，RACE法扩增亚洲璃眼蜱雌成蜱唾液腺总RNA，获得基因的5’-端。根据Ha7．7和5’-端序列设计全长引物（Ha7．7-FLP^＋和Ha7．7-FLP-），扩增cDNA第1链获，得全长cDNA。结果 分析表明，基因大小为449bp，由吸血诱导亚洲璃眼蜱成蜱唾液腺表达。结论 与数据库资料比对显示，GP15为新纪录（Genbank登录号DQ020265）。     

湖南省日本血吸虫线粒体cox1基因部分序列多态性的研究

目的研究湖南省日本血吸虫不同自然隔离群的线粒体细胞色素c氧化酶亚基1基因（coxl）部分序列（pcoxl）的变异，为阐明我国日本血吸虫的种群遗传结构奠定基础。方法采用聚合酶链反应（PCR）技术对湖南省岳阳君山、汨罗的日本血吸虫的pcoxl片段进行扩增、克隆及序列分析。结果获得480bp的pcoxl序列。经DNAstar软件分析，pcoxl序列有一定的种内差异（0～1．2％）。结论本研究为阐明我国日本血吸虫的种群遗传结构提供了数据。     

山羊粪便血吸虫毛蚴孵出与采粪时间的关系

对患有血吸虫病的山羊在不同时间采集的粪便进行孵化及毛蚴计数。 一、方法 实验动物:人工感染尾蚴200±20条的阳性山羊3只(2公1母),体重5.0～7.5kg。舍饲。 用布兜法定时收集新鲜粪便,3次/d。收集时间分别定于:8:00～9:00;16:00～17:00;23:00～24:00。共收集6d。 在采样过程中,注意观察山羊的排粪行为,一旦有排粪,立即收取。分别编号,置于4℃冰箱,于次日作粪便孵化。准确称取山羊粪便5.0g,以尼龙筛淘洗法常规操作。最后,将洗净的粪渣移至