bcl-2 RNAi表达载体的构建、鉴定及其对Raji细胞的干扰效果

目的 构建bcl-2特异性RNAi真核细胞质粒表达载体,并研究其对B细胞淋巴瘤Raji细胞的干扰效果.方法 根据GenBank提供的bcl-2 cDNA序列,设计并合成两对短发夹结构的互补DNA序列,经退火形成互补双链,克隆至载体pGenensil-1构建重组质粒,予以酶切和DNA测序鉴定.脂质体介导重组质粒转染Raji细胞,采用RT-PCR法观察重组质粒对bcl-2 mRNA表达的影响,流式细胞仪测定细胞凋亡.结果 酶切及测序鉴定表明,成功构建bcl-2 shRNA的质粒表达载体pGenesil-1-bcl-2-544和pGenesil-1-bci-2-1009.转染Raji细胞48 h后,RT-PCR结果显示Raji细胞中bcl-2 mRNA表达分别下调了(31.95±3.02)%和(47.57±2.88)%,与空白对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05);流式细胞仪检测结果显示Raji细胞凋亡率分别为(14.25±0.84)%和(11.96±0.79)%,明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05).结论 成功构建bcl-2特异性RNAi真核细胞质粒表达载体,它能有效沉默bcl-2基因在B细胞淋巴瘤中的表达并促进B细胞淋巴瘤Raji细胞凋亡.     

髓过氧化物酶-抗中性粒细胞胞质抗体相关性血管炎患者血清IgG4及Th1/Th2细胞因子检测分析

目的 了解髓过氧化物酶(MPO)-抗中性粒细胞胞质抗体相关性血管炎(AAV)患者血清中IgG4及辅助性T细胞(Th)1/Th2细胞因子的表达情况.方法 收集苏州大学附属第二医院50例AAV患者及40例同期健康体检者的血清样本,采用免疫比浊法测定IgG水平,采用ELISA法测定IgG4水平,采用流式细胞术微球阵列(CBA...     

大肠埃希菌ESBLs的检出及耐药性比较

目的为了解苏大附二院近3年大肠埃希菌产ESBLs株的检出情况及与非ESBLs株的耐药性比较。方法采用WHONET5.1分析统计软件对2003年至2005年的大肠埃希菌及其对17种抗生素的药敏结果进行回顾统计分析。结果产ESBLs大肠埃希氏菌三年总感染率为35.1%,各类头孢菌素及氨曲南、哌拉西林在ESBLs株均有严重的耐药性,耐药率几乎均大于90%,而三、四代头孢菌素在非ESBLs株仍保持较低的耐药性,耐药率为10.6%～39.7%,亚胺培南及含酶抑制剂的药物均有较好的抑菌作用。结论ESBLs株与非ESBLs株药敏结果存在显著差异,但检出比例有逐年降低的趋势。     

RNAi沉默生存素基因抑制Raji细胞增殖

目的生存素(survivin)短发夹RNA(shRNA)重组质粒转染B细胞淋巴瘤Raji细胞,体内、外观察对该基因表达的干扰作用及抑制细胞增殖的效果。方法实验分为空白对照(D)组、A组、B组和C组,分别用生存素干扰重组质粒A、B和阴性对照重组质粒转染Raji细胞,经G418筛选获得各重组质粒稳定转染细胞,RT-PCR比较各组生存素mRNA表达差异,FCM测定比较各组生存素蛋白的表达,通过细胞计数比较各组细胞增殖能力的差异。结果成功筛选出稳定转染的Raji细胞。与空白对照组相比,质粒A和质粒B对生存素mRNA的抑制率分别为70.01%和46.46%(P<0.05),对蛋白表达抑制率分别为64.15%和41.16%(P<0.05),两干扰组稳定转染细胞的增殖能力明显下降;质粒A对生存素基因的干扰作用较质粒B明显,抑制瘤细胞增殖的效果也更为明显。结论生存素干扰重组质粒A和B能干扰Raji细胞生存素基因表达,抑制B细胞淋巴瘤Raji细胞增殖。