双氢青蒿素对甲型流感病毒H1N1诱导人支气管上皮细胞TNF-α和IL-6表达的影响及机制研究

  目的  探讨双氢青蒿素（dihydroartemisinin,DHA）对甲型流感病毒（influenza A virus,IAV）A/PR/8/34（H1N1）诱导人支气管上皮细胞（BEAS-2B）促炎症因子和细胞外信号调节蛋白激酶（extracellular signal regulated kinase,ERK）信号通路蛋白表达的影响。  方法  采用不同浓度的DHA（即0、12.5、25、50和100 μmol/L）作用BEAS-2B细胞24 h ,CCK8法检测DHA对BEAS-2B细胞活性的影响。IAV吸附BEAS-2B细胞1 h ,分别采用不同浓度的DHA（低、中、高浓度DHA ,即12.5、25和50 μmol/L）作用24 h,同时设置正常对照组和IAV组。采用实时荧光定量PCR法（real time quantitative PCR, RT-qPCR）和酶联免疫吸附法（enzyme linked immunosorbent assay,ELISA）分别检测肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）和白细胞介素-6（interleukin 6,IL-6）的mRNA和蛋白表达水平,蛋白质印迹法（Western blot）检测磷酸化ERK（phospho-ERK, p-ERK）蛋白表达水平。采用特异性ERK激动剂（ERK agonist,20 ng/mL）作用BEAS-2B细胞（分组为正常对照、IAV、DHA、DHA+IAV、ERK agonist、DHA+IAV+ERK agonist组）24 h,观察对DHA抑制IAV诱导BEAS-2B细胞TNF-α、IL-6和p-ERK表达的影响。  结果  DHA浓度在12.5、25、50 μmol/L时,BEAS-2B细胞存活率与正常对照组比较差异无统计学意义;与正常对照组比较,IAV组细胞TNF-α、IL-6 mRNA和蛋白及p-ERK蛋白表达水平增高 (P<0.05),与IAV组比较,IAV+ DHA低、中、高浓度组细胞TNF-α、IL-6 mRNA和TNF-α、IL-6、p-ERK蛋白表达水平呈剂量依赖性的下降(P<0.05);而ERK激动剂减弱了DHA抑制IAV诱导BEAS-2B细胞ERK信号通路蛋白p-ERK表达和促炎症因子TNF-α、IL-6的分泌。  结论  DHA可通过ERK信号通路抑制IAV诱导BEAS-2B细胞TNF-α和IL-6的表达。     

急性脑梗死缺血半暗带演变的磁共振波谱分析

目的:应用磁共振波谱分析(Magnetic resonance spectroscopy,MRS)研究急性脑梗死代谢物的变化规律,以观测缺血半暗带(Ischemic penumbra,IP)的存在形式和演变过程.方法:44例超急性期(<6 h)与急性期(6-72 h)缺血性脑梗死患者,按照发病时间分为5组.均行质子磁共振波谱(Hydrogen proton magnetic resonance spectroscopy,HMRS)、扩散加权成像(Diffusion weighted imaging,DWI)及常规MRI检查,在DWI高信号内梗死核心区、内缘区、外缘区及高信号外周嗣区、对侧镜像区分析代谢物N-乙酰天门冬氨酸(NAA)、肌酸(Cr)和乳酸(Lac)的含量,并计算NAA/Cr、Lac/Cr.结果:①与对侧镜像区比较:梗死核心区和内缘区在所有时间组NAA/Cr均明显降低,Lac/Cr明显增加,差异有统计学意义(P<0.05);外缘区NAA/Cr在24 h内轻度降低,差异无统计学意义(P>0.05),24 h以后差异有统计学意义(P<0.05),所有时间组Lac/Cr均升高;周围区在48 h以内NAMCr轻度降低,差异无统计学意义(p>0.05),同时Lac/Cr升高.但随后时间组内Lac未明显测出.②各兴趣区之间的NAA/Cr和Lae/Cr在发病最初6 h以内差异无统计学意义(P>0.05),随时间进展其差异有统计学意义(P<0.05 ).结论:①IP在发病的最初12～24 h存在于DWI高信号区内,随时间的延长逐渐向外周推移.②DWI高信号区外也存在IP,时问可以持续至24～48 h.     

经中心静脉导管高浓度补钾安全性和疗效分析

随着微量泵的广泛应用、血钾的快速测定和深静脉置管的发展,对中-重度低钾血症患者补充高浓度氯化钾的治疗手段成为可能[1-11],但静脉输注高浓度钾盐有一定风险.本研究应用随机对照方法探索对中-重度低钾血症患者进行高浓度静脉补钾的安全性和疗效. 1 资料与方法 1.1 病例选择     

miR-7-5p调控NF-κB/RelA信号通路对Ⅱ型肺泡上皮细胞间质转化的作用机制研究

目的探讨miR-7-5p对Ⅱ型肺泡上皮细胞(A549细胞)间质转化的影响及其作用机制。方法10 ng/mL TGF-β1处理A549细胞12 h、24 h和48h后,利用实时荧光定量PCR(Quantitative Real-time PCR,RT-qPCR)检测细胞中miR-7-5p和RelA的表达量,Western blot检测EMT相关蛋白E-cadherin、N-cadherin和Vimentin的表达量;过表达或下调miR-7-5p后,Transwell实验检测miR-7-5p对A549细胞侵袭的影响;细胞划痕愈合实验检测miR-7-5p对A549细胞迁移的影响;Western blot检测miR-7-5p对A549细胞内E-cadherin、N-cadherin、Vimentin表达和NF-κB通路的影响;TargetScan预测miR-7-5p和RelA的靶向关系,双荧光素酶报告基因实验分析miR-7-5p和RelA之间的关系;RT-qPCR和Western blot检测过表达或下调miR-7-5p对RelA的影响。检测下调RelA表达后,A549细胞的侵袭、迁移和EMT能力。结果10 ng/mL TGF-β1处理A549细胞12 h、24 h和48h后,E-cadherin表达明显下调(P<0.01),N-cadherin和Vimentin表达明显上调(P<0.01),miR-7-5p表达明显降低(P<0.01),RelA表达明显升高(P<0.01)。过表达miR-7-5p抑制了A549细胞侵袭、迁移与EMT,p-TAK1/TAK1和NF-κB p-p65/NF-κB p65比值明显降低,下调miR-7-5p则起到促进作用;miR-7-5p靶向且负调控RelA表达;下调RelA抑制了A549细胞侵袭、迁移与EMT。结论miR-7-5p调控NF-κB/RelA信号通路促进A549细胞的上皮间质转化。     

重组慢病毒沉默 rictor 基因对 mTORC2/SGK1信号通路及肺泡上皮钠离子通道的调控作用?

目的：构建针对 mTORC2特异组成蛋白中 rictor 基因的重组慢病毒沉默载体,研究其对 mTORC2/SGK1信号通路的调控机制及其对肺泡上皮细胞钠离子通道的影响,并探讨其在急性呼吸窘迫综合征及急性肺损伤中的作用。方法构建目的基因的 rictor 干扰质粒及空载质粒并与慢病毒包装体系共转染293T 细胞,收集病毒上清液,经离心、浓缩及纯化获取重组慢病毒。测定病毒滴度,感染 A549细胞并筛选细胞稳定株,RT-PCR 验证目的基因 rictor 沉默情况。采用 PCR 和 western blot 检测该通路中各信号指标表达情况。结果成功构建沉默 rictor 基因的重组慢病毒并感染 A549细胞和获得细胞稳定株。与空白组及对照组相比,shRNA-rictor 组中 rictor 和下游 SGK1、α-ENaC、β-ENaC、γ-ENaC mRNA 水平均有明显下降(P <0.05)。同时, shRNA-rictor 组中 rictor 和下游 SGK1、P-SGK、α-ENaC、β-ENaC、γ-ENaC 的蛋白水平较前两组均有明显下降(P <0.05)。结论沉默 rictor 基因对 mTORC2/SGK1信号通路有明显的调控作用,同时从基因和蛋白水平影响肺泡上皮细胞α-ENaC、β-ENaC、γ-ENaC 的表达。mTORC2/SGK1可能是调控肺泡上皮细胞对肺泡液的清除能力,同时影响肺水肿形成的重要信号通路。     

3种镇静药物对Ⅱ型呼吸衰竭机械通气的影响

目的:对比观察吗啡、地西泮与咪达唑仑镇静对Ⅱ型呼吸衰竭患者机械通气治疗效果的影响,以期对临床用药的选择提供参考.方法:将54例需机械通气的Ⅱ型呼吸衰竭患者随机分为3组,每组18例.分别于机械通气前静注吗啡、地西泮与咪达唑仑镇静,再于机械通气前和机械通气后4 h行动脉血气分析.结果:与机械通气前比较各组pH值、PaO2值和PaCO2值均得到明显改善(P＜0.01).机械通气后吗啡组pH与PaO2值大于地西泮和咪达唑仑组,PaCO2值则较另外2组小 (P＜0.05);地西泮组与咪达唑仑组之间各指标均无显著性差异 (P>0.05).结论:相对于地西泮与咪达唑仑,吗啡能够使需机械通气的Ⅱ型呼吸衰竭患者更多获益,可以成为该类病人镇静的首选用药.     

血清miR-210、miR-181a表达水平与慢性阻塞性肺疾病稳定期患者糖皮质激素治疗效果的关系及其预测价值研究

背景 吸入性糖皮质激素（ICS）是慢性阻塞性肺疾病（COPD）的常用治疗药物,但其治疗效果评价研究较为缺乏。微小核糖核酸（miR）被证实参与COPD的发病,其中miR-210、miR-181a与COPD患者关系密切。目前临床有关miR-210、miR-181a与COPD患者ICS治疗效果的关系研究较为缺乏。 目的 探讨血清miR-210、miR-181a表达水平与COPD稳定期患者ICS治疗效果的关系及其预测价值。 方法 收集2017年1月至2020年6月于三六三医院门诊治疗的COPD稳定期患者86例,行布地奈德福莫特罗粉吸入剂治疗4周后进行治疗效果评价,将肺功能分级降低≥1个级别或慢性阻塞性肺疾病评估测试（CAT）评分降低≥2分判断为有效并归为有效组,其余纳入无效组。检测患者治疗前后的肺功能指标〔包括用力肺活量（FVC）、第一秒用力呼气容积（FEV1）、最大呼气流量（PEF）〕、CAT评分与血清miR-210、miR-181a表达水平。采用Pearson相关分析探讨ICS治疗前与治疗4周后血清miR-210、miR-181a表达水平与肺功能指标、CAT评分的相关性,并绘制ROC曲线以分析血清miR-210、miR-181a表达水平对COPD稳定期患者ICS治疗效果的预测价值。 结果 ICS治疗后,COPD稳定期患者FVC、FEV1、PEF等高于治疗前,CAT评分及血清miR-210、miR-181a表达水平低于治疗前（P<0.05）。ICS治疗前患者血清miR-210、miR-181a表达水平与CAT评分呈正相关（P<0.05）。ICS治疗后患者血清miR-210、miR-181a表达水平与FEV1呈负相关（P<0.05）。有效组治疗前与治疗后的血清miR-210、miR-181a表达水平低于无效组（P<0.05）。治疗前miR-210、miR-181a表达水平预测COPD患者ICS治疗效果的ROC曲线下面积为0.807、0.844。 结论 ICS治疗有效的COPD稳定期患者治疗前与治疗后的血清miR-210、miR-181a表达水平均低于无效患者,且治疗前血清miR-210、miR-181a表达水平可较好地预测ICS治疗效果。     

胰肾联合移植术的供体切取与修剪

目的: 总结胰肾一期联合移植手术有关供体切取与修剪的方法.方法: 结合我院临床开展胰肾联合移植的经验及在美国匹兹堡大学Starzl器官移植研究所进修学习的体会,对供体切取及修剪方法进行分析讨论.结果: 如此修剪后的供肾和供胰植入受体后立即恢复良好的血液循环,无出血及漏血现象,并且迅速恢复功能.结论: 掌握正确的供体切取与修剪方法是保证移植成功的关键因素之一,其中包括供体切取的速度与质量以及修剪过程中注意的要点等.     

噻托溴铵联合无创呼吸机治疗COPD合并Ⅱ型呼吸衰竭疗效及对患者血气指标和炎症因子的影响

目的探讨噻托溴铵联合无创呼吸机治疗慢性阻塞性肺疾病急性加重(AECOPD)合并Ⅱ型呼吸衰竭的疗效。方法80例AECOPD合并Ⅱ型呼吸衰竭患者随机分为对照组(n=40)和观察组(n=40),对照组予以常规治疗及无创呼吸机辅助通气治疗,观察组在对照组基础上予以噻托溴铵治疗;比较两组临床疗效及血气分析指标、肺功能、炎症因子、免疫功能等变化。结果治疗总有效率,观察组为95.00%,对照组为77.50%,组间对比差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后,观察组第1秒用力呼气容积(FEV1)、用力肺活量(FVC)、FEV1/FVC及动脉血氧分压、动脉二氧化碳、氧合指数均明显优于对照组(P<0.05),血清C反应蛋白、降钙素原及白细胞介素-17水平均明显低于对照组(P<0.05)。治疗后,观察组CD3^+、CD4^+、CD4^+/CD8^+均明显高于对照组(P<0.05),CD8^+明显低于对照组(P<0.05)。两组治疗期间均无明显不良反应。结论噻托溴铵联合无创呼吸机治疗AECOPD合并Ⅱ型呼吸衰竭疗效显著,可有效缓解炎症反应,改善血气指标、肺功能及免疫功能。     

乌美溴铵维兰特罗对AECOPD患者的临床分析

目的分析乌美溴铵维兰特罗对慢性阻塞性肺疾病急性加重期(AECOPD)患者的近远期疗效及安全性。 方法选择2018年10月至2019年10月我院收治的58例AECOPD患者分为对象,随机分为观察组31例,对照组27例。对照组患者吸入噻托溴铵粉雾剂,每次18 μg,每天1次。观察组给予乌美溴铵维兰特罗吸入粉雾剂,每次吸入62.5 μg/25 μg,每天1次。持续治疗2周后观察效果并随访12个月。记录两组近远期疗效及药物安全性。 结果治疗前两组用力肺活量(FVC)、第一秒用力呼气容积(FEV₁)水平对比差异均无统计学意义(P>0.05),治疗后两组FVC、FEV₁均高于治疗前(P<0.05),治疗后观察组FVC、FEV₁均高于对照组(P<0.05),12个月随访期间,两组本次急性加重的时间间隔分别为(135.80±21.35)d、(119.45±18.83)d,随访12个月内急性加重的次数分别为(1.79±0.31)次、(2.28±0.39)次,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗期间,观察组药物不良反应发生率为12.90%,对照组不良反应发生率为11.11%,差异无统计学意义(P>0.05)。 结论乌美溴铵维兰特罗可改善AECOPD患者肺功能,增加疗效,安全性好。