脑源性神经营养因子与心脏微血管内皮细胞的管状形成

背景:研究发现脑源性神经营养因子可促进内皮细胞的存活,诱导血管新生,但其促进血管新生的细胞与分子机制尚不清楚.目的:观察脑源性神经营养因子在3D体外管状形成模型中对心脏微血管内皮细胞管状结构形成的影响.方法:分离提取大鼠心脏微血管内皮细胞并培养使之形成细胞小球,将心脏微血管内皮细胞小球接种于Ⅰ型胶原-甲基纤维素的3D环境中培养,然后分别加入50,70,100 μg/L的脑源性神经营养因子继续培养,于培养24,48 h观察并测量心脏微血管内皮细胞的分枝长度和分枝条数.结果与结论:经分离的大鼠心脏微血管内皮细胞小球在Ⅰ型胶原-甲基纤维素3D环境中培养24 h,均可见管状分枝,且脑源性神经营养因子可促进管状分枝生长,以100 μg/L的脑源性神经营养因子的促生长效果最明显,分枝也最多.培养至 48 h,心脏微血管内皮细胞小球的分枝更长.说明脑源性神经营养因子在3D体外管状形成模型中可促进大鼠心脏微血管内皮细胞发芽及管状结构的形成,且具有剂量依赖性.     

脑源性神经营养因子促进心脏微血管内皮细胞管状形成

背景：心脏微血管内皮细胞在缺血梗死心肌的血管新生中扮演重要角色。最近研究证明：脑源性神经营养因子（BDNF）可促进内皮细胞的存活，诱导血管新生，被认为是一种促血管新生的生长因子，但其促进血管新生的细胞与分子机制尚不甚清楚。 目的： 使用3D体外管状形成模型对脑源性神经营养因子能否促进心脏微血管内皮细胞的管状结构形成进行研究，以揭示BDNF促进血管新生的可能细胞机理。 方法： 经分离的大鼠心脏微血管内皮细胞悬浮于含0.2%甲基纤维素的DMEM培养液（25% FBS）中于非贴壁U型底96孔培养板中培养，使之形成细胞小球，将CMECs小球于含10% FBS的Ⅰ型胶原（1.5 mg/ml）-甲基纤维素（1:1）中混匀后，置37 ℃，5% CO2的培养箱30 min，然后分别加入不同浓度（50 ng/ml、70 ng/ml、100 ng/ml）的脑源性神经营养因子，经培养1天后，对心脏微血管内皮细胞的分枝长度和分枝条数进行分析。 结果： 经分离的大鼠心脏微血管内皮细胞小球在甲基纤维素和Ⅰ型胶原3-D环境中培养24、48小时后，对每个心脏微血管内皮细胞小球管状分枝总长度进行比较发现：24小时后，对照组为2899?5 祄；50 ng/ml BDNF组为3612?54 祄；70 ng/ml BDNF组为4734?82 祄；100 ng/ml BDNF组为5057?72 祄；48小时后：对照组为5349?58 祄；50 ng/ml BDNF组为6085? 祄；70 ng/ml BDNF组为8176?01 祄；100 ng/ml BDNF组为8358?89 祄；不同浓度BDNF处理组的管状分枝总长度分别与对照组比较，均大于对照组，差异有统计学意义（P < 0.05）。对每个心脏微血管内皮细胞小球的分枝总条数进行比较发现：对照组为15条；50 ng/ml BDNF组为19条；70 ng/ml BDNF组为20条；100 ng/ml BDNF组为21条；不同浓度BDNF组的分枝总条数与对照组比较，均大于对照组，差异有统计学意义（P < 0.05）。 结论：脑源性神经营养因子在3D体外管状形成模型中可促进大鼠心脏微血管内皮细胞发芽及管状结构的形成，且脑源性神经营养因子促进心脏微血管内皮细胞管状结构形成的能力，在一定浓度范围内随其浓的升高而呈增强。本研究结果提示：脑源性神经营养因子有效促进心肌血管新生的细胞机理，很有可能是通过有效促进心脏微血管内皮细胞发芽和管状结构的形成。     

慢病毒干扰小鼠附睾特异的meClps基因可降低精子的运动能力

目的筛选能有效干扰小鼠附睾特异的类辅脂酶meClps基因表达的RNA靶点,并通过慢病毒介导的RNAi敲低meClps
表达后分析对精子运动的影响。方法构建真核表达载体pDsRed2.0-C1-meClps中并转染NIH-3T3细胞,用meClps抗血清检
测meClps蛋白的表达。针对meClps基因的序列设计并合成3对靶向干扰meClps表达的寡核苷酸序列,构建重组慢病毒载体
pRNAT-U6.2/lenti-RNAi-251、224和286。将重组慢病毒干扰质粒分别与pDsRed2.0-C1-meClps共转染到NIH-3T3细胞,半定
量PCR和Western blotting检测meClps基因在mRNA和蛋白水平的变化。将筛选得到的干扰效果最好的慢病毒载体包装慢病
毒,注射到小鼠附睾头部组织后分析对附睾尾部精子运动性能的影响。结果构建了体外表达meClps 蛋白的
pDsRed2.0-C1-meClps 表达载体和靶向meClps 基因的慢病毒RNAi 载体。靶向meClps 的RNA 干扰载体对转染
pDsRed2.0-C1-meClps后的NIH-3T3 细胞中的meClps 的mRNA和蛋白表达都有抑制,但以转染pRNAT-U6.2/lenti-RNAi-251
对meClps的抑制效果最明显。包装后的慢病毒注射到小鼠附睾头部后附睾尾部组织中的精子运动速率降低（P<0.05）。结论
筛选出RNAi-251能有效干扰meClps表达,通过慢病毒介导的RNAi敲低meClps表达后精子运动性能降低。
     

Fas相关因子1的研究进展

Fas相关因子1(Fas-associated factor 1,FAF1)是一种细胞内蛋白质,在不同细胞中可存在于细胞核、核仁及核周细胞质中。FAF1是一种进化上保守的蛋白质,约74 kD,由650个氨基酸组成,含有多个功能结构域,包括Fas作用结构域(Fas-interacting domain,FID)、死亡效应结构域作用结构域     

脑源性神经营养因子与心脏微血管内皮细胞的管状形成

背景：研究发现脑源性神经营养因子可促进内皮细胞的存活,诱导血管新生,但其促进血管新生的细胞与分子机制尚不清楚。 目的：观察脑源性神经营养因子在3D体外管状形成模型中对心脏微血管内皮细胞管状结构形成的影响。 方法：分离提取大鼠心脏微血管内皮细胞并培养使之形成细胞小球,将心脏微血管内皮细胞小球接种于Ⅰ型胶原-甲基纤维素的3D环境中培养,然后分别加入50,70,100 μg/L的脑源性神经营养因子继续培养,于培养24,48 h观察并测量心脏微血管内皮细胞的分枝长度和分枝条数。 结果与结论：经分离的大鼠心脏微血管内皮细胞小球在Ⅰ型胶原-甲基纤维素3D环境中培养24 h,均可见管状分枝,且脑源性神经营养因子可促进管状分枝生长,以100 μg/L的脑源性神经营养因子的促生长效果最明显,分枝也最多。培养至    48 h,心脏微血管内皮细胞小球的分枝更长。说明脑源性神经营养因子在3D体外管状形成模型中可促进大鼠心脏微血管内皮细胞发芽及管状结构的形成,且具有剂量依赖性。     

调节卵子发育成熟的信号转导通路

<正>卵子是哺乳动物体内最大的一种细胞,承载着繁衍后代的使命,而卵子的发育成熟是其完成生殖过程的先决条件。对卵泡的生长、发育和卵子成熟调控机制的研究一直是发育生物学的研究热点之一。     

骨髓间充质干细胞对免疫损伤卵巢的修复作用

摘要：目的探讨骨髓间充质干细胞移植对免疫损伤卵巢的修复作用。方法6~8周龄的野生型健康ICR雌性小鼠随机分
为3组,每组各12只。A组不作任何处理,B、C组利用猪卵巢蛋白主动免疫建立免疫损伤卵巢模型。而后C组腹腔移植来
自GFP转基因小鼠的骨髓MSCs细胞,A、B组各注射等体积的PBS。MSCs移植后按既定时间处死小鼠,利用PCR检测
卵巢中GFP基因以判断MSCs是否到达卵巢;通过对卵巢组织切片HE染色以及细胞凋亡分析来检测MSCs是否对免疫
损伤卵巢有修复作用及其机制。结果PCR结果表明MSCs经腹腔移植可直接到达免疫损伤卵巢;MSCs移植可促进免疫
损伤卵巢组织的修复;相应地,移植组颗粒细胞的凋亡比非移植组明显减少。结论腹腔移植MSCs可促进免疫损伤卵巢
的修复,其机制可能与减少颗粒细胞凋亡有关。     

中枢免疫耐受缺损模型的构建

目的构建基于shRNA介导的中枢免疫耐受缺损模型。方法分离妊娠后13.5 d的胎鼠胸腺,除去淋巴细胞,获得原代胸腺基质细胞,利用慢病毒将小鼠TRAF6基因特异性shRNA慢病毒质粒(LV-T6-shRNA)导入原代胸腺基质细胞中,重新聚集这些胸腺基质细胞得到LV-T6-shRNA重塑胸腺,将此重塑胸腺移植入无胸腺的雌性小鼠肾脏荚膜下,饲养8周。结果慢病毒可有效转导LV-T6-shRNA慢病毒质粒入原代胸腺髓质上皮细胞中;移植LV-T6-shRNA重塑胸腺的小鼠饲养8周后,胸腺明显较小,成熟的胸腺髓质上皮细胞减少,脾脏肿大,脾脏中活化的T淋巴细胞增多,肺脏中出现淋巴细胞浸润等现象,这些表现型与TRAF6-/-小鼠的表现型相似。结论中枢免疫耐受缺损模型构建成功。