DEK基因RNAi慢病毒表达载体的构建及其功能鉴定

目的：构建DEK基因的RNA干扰（ RNAi）慢病毒表达载体,并对其生物学功能进行初步检测。方法采用RNAi技术,根据DEK基因的序列,确定其有效靶序列,合成DEK基因的Oligo DNA,退火形成双链DNA,将其克隆到经BamHⅠ与EcoRⅠ酶切后的小干扰RNA（ siRNA）表达载体PSIH-H1上,产生PSIH-H1-DEK慢病毒载体,筛选阳性克隆并测序鉴定。与3个包装质粒共转染293T细胞,包装成慢病毒后感染乳腺癌细胞ZR75-1,经嘌呤霉素（ puromycin,puro）筛选2周后,收集部分细胞利用实时聚合酶链反应（ real time-PCR,RT-PCR）和Western印迹分别检验DEK在信使RNA （ mRNA ）和蛋白水平的敲低效果,并通过细胞生长实验检测DEK对人乳腺癌细胞系ZR75-1细胞生长的影响。结果 PCR和DNA测序结果证实,DEK siRNA慢病毒表达载体PSIH-H1-DEK构建成功。 RT-PCR和Western印迹结果显示,构建的DEK siRNA可有效抑制DEK基因的表达,并由此建立了敲低DEK的稳定克隆。生长曲线实验表明, DEK siRNA可抑制人乳腺癌细胞系ZR75-1细胞的生长。结论成功构建了DEK基因的RNAi慢病毒表达载体,感染人乳腺癌细胞系ZR75-1细胞后,有效沉默了ZR75-1细胞中的DEK基因的表达,为进一步研究DEK基因在乳腺癌中的作用奠定基础。     

宫颈液基薄层细胞学检查异常与组织活检对照分析

目的 探讨宫颈液基薄层细胞学(TCT)检查在宫颈癌筛查中的临床应用价值.方法 对2013年、2014年2年中接受体检的育龄女性1600例进行TCT检查,并按TBS-2001细胞分类法系统进行细胞学判读,细胞学异常(阳性)者在阴道镜下行宫颈组织活检,将细胞学判读结果与宫颈病理组织学诊断结果进行对照比较.结果 TCT检查判读结果阳性72例(4.5%),全部进行阴道镜下取活检,与病理结果符合69例(95.8%).结论 宫颈液基薄层细胞学检查与组织活检结果符合率高,可以作为宫颈癌筛查的首选方法,但也存在一定的假阳性和假阴性,因此对TCT检查异常者应及时进行活检,防止漏诊或过度治疗.