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目的 建立从血浆冷沉淀中同时制备因子Ⅷ(factor Ⅷ,FⅧ)、纤维结合蛋白(fibronectin,Fn)和纤维蛋白原(fibrinogen,Fg)的方法。 方法 用缓冲液溶解抽提冷沉淀,获得的冷沉淀抽提液通过2次DEAE离子交换层析和1次聚乙二醇沉淀进行分离纯化来同时制备FⅧ、Fn和Fg。采用FⅧ∶C活性测定试剂盒检测制备的FⅧ活性,并计算FⅧ比活和回收率。分别用双向和单向免疫扩散试验对制备的Fn和Fg进行定性和定量检测,并计算回收率。结果 制备的FⅧ的平均活性为16.48 U/ml,平均比活为29.84 U/mg,回收率>60%。制备的Fn和Fg的蛋白纯度均>90%,回收率分别为>80%和>75%。结论 采用建立的方法可从冷沉淀中同时制备FⅧ、Fn和Fg。 相似文献
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祝慈芳 《国际生物制品学杂志》1982,(5)
抗凝血酶Ⅲ(AT-Ⅲ)与肝素之间的相互作用具有高度特异性,并对凝血酶以及活化的因子Ⅸ及Ⅹ等的抑制速度,产生增强的效应。AT与肝素的这种相互作用,使肝素亲和层析法成为分离制备AT的重要方法。但通常商品肝素中具有高亲和力的部分不到1/3,且其中能特异地结合AT的位点仅占2~3%。因而结合在琼脂糖上的肝素总量中,仅极小部分能结合AT,而绝大部分肝素则 相似文献
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目的 验证优化的α1-抗胰蛋白酶(α1-antitrypsin,α1-AT)生物活性测定方法.方法 用发色底物法测定α1-AT活性,以牛胰蛋白酶替换冻干正常人血清来优化先前建立的方法,验证优化方法的准确性、重复性,并观察不同物质对优化方法的影响.结果 优化方法在胰蛋白酶质量浓度为0.01~0.05 g/L时线性关系良好,相关系数>0.99.优化方法具有良好的准确性和重复性,当采用优化方法测定质量浓度为0.01、0.03、0.05 g/L胰蛋白酶时,胰蛋白酶的回收率分别为99.33%、94.44%和92.67%,变异系数分别为3.79%、1.66%和1.02%.在一定范围内,聚乙二醇、蔗糖、枸橼酸钠、人白蛋白浓度变化对优化方法测定α1-AT生物活性没有影响.结论 以牛胰蛋白酶作为参考标准品的优化α1-AT生物活性测定方法可用于α1-AT制备工艺中的常规质量控制. 相似文献
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目的原核表达人载脂蛋白AⅠ(ApoAⅠ),对其表达进行优化,同时对ApoAⅠ活性检测方法进行初步研究。方法通过构建3种不同的重组质粒来研究以组氨酸(His)6融合蛋白表达、(His)6-pro(前肽)融合蛋白与单目的基因表达之间的差别,其中(His)6-pro-ApoAⅠ质粒中目的基因第3、4、7位密码子进行无义突变。随后采用镍离子柱纯化重组蛋白,间接法测定ApoAⅠ对被内毒素(LPS)攻击的细胞的保护效果来检测其生物活性。结果单目的基因(pET28a-ApoAⅠ)、组氨酸标记的融合蛋白(pET28a-(His)6-ApoAⅠ)以及(His)6-pro(前肽)融合蛋白(pET28a-(His)6-pro-ApoAⅠ)表达量分别为17、40、95mg/L,经镍柱纯化后的重组蛋白经Western blot、分子筛层析以及生物活性检测,表明原核表达的ApoAⅠ为单体蛋白且具有相应的生物学活性。结论原核表达的ApoAⅠ与人血浆提纯的天然ApoAⅠ分子生物性状无明显差异。 相似文献
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目的 建立人纤维结合蛋白(fibronectin,Fn)制备方法,研究不同保护剂对Fn稳定性的影响。方法 将经磷酸盐缓冲液抽提溶解的血浆冷沉淀用聚乙二醇沉淀,获得的上清液经离子交换层析制得纯化的Fn。将加入复合保护剂的Fn溶液分别于-20、4和37 ℃存放0、5和14 d,观察保护剂抑制Fn降解的效果。结果 采用建立的方法制备的Fn的纯度和平均回收率均>80%。Fn稳定性研究显示,Fn于4℃存放会发生降解,加入枸橼酸钠+甘氨酸或枸橼酸钠+咪唑复合保护剂能有效抑制Fn降解。结论 采用建立的方法制备Fn是可行的。枸橼酸钠+甘氨酸或枸橼酸钠+咪唑复合保护剂对Fn具有保护作用。 相似文献
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目的 初探大规模纯化人血浆载脂蛋白AⅠ(apolipoprotein AⅠ,ApoAⅠ)的低成本生产工艺。方法 以人血浆组分Ⅳ为原料,通过等电点沉淀、阴离子层析、低温乙醇沉淀和超滤等步骤纯化ApoAⅠ蛋白,并放大实验室纯化方法来纯化ApoAⅠ。结果 放大的纯化方法生产的ApoAⅠ的得率和纯度分别为59.0%和85.6%,经相关方法验证为人血浆ApoAⅠ。结论 实验室方法放大的纯化工艺可纯化ApoAⅠ。 相似文献
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R啨sum啨 Objectif Etudierl effetprotecteurdutraitementpr啨alableparl antitrypsine alpha1(α1 AT)surlesl啨sionspulmonairesaig櫣esprovoqu啨esparl endotoxinechezleslapins. M啨thodes 32lapinsdeNou v 相似文献