Bre1与Rad6形成的复合物的表达、纯化和结晶

目的：建立Bre1及Rad6的表达和纯化方法,构建Bre1-Rad6的复合物,寻找复合物的结晶条件,为使用X射线晶体学的方法解析复合物的结构奠定基础。方法：使用大肠杆菌表达系统表达蛋白质;使用共纯化的方法组装复合物;使用气象扩散的方法结晶复合物。结果：建立了来源于Lodderomyces elongisporus的Bre1(LeBre1)氮端与Rad6相互作用的结构域（RBD）和Rad6(LeRad6)在大肠杆菌中大量表达的方法;通过使用共纯化的方法,成功组装了LeBre1 RBD-Rad6复合物,并进一步通过两步凝胶过滤层析纯化的方法精细纯化,获得了纯度超过95%的蛋白复合物;使用气象扩散的方法结晶复合物,在18℃通过对1 000多个结晶条件的筛选,确定了复合物的两种结晶条件,进一步对该条件优化,获得了质量相对较好的晶体。结论：成功的构建了LeBre1 RBD-Rad6复合物的表达、纯化和结晶的方法,为使用X射线晶体学方法解析复合物的结构奠定了基础。     

Fas信号通路通过诱导EMT促进胃癌细胞的侵袭转移

目的探讨Fas信号通路促进胃癌细胞侵袭转移的可能相关机制。方法以低浓度FasL处理胃癌细胞株AGS,免疫印迹及ELISA检测上皮间质转化(epithelial-mesenehymal transition,EMT)的分子生物学标记改变;稳定沉默Snail及Twist转录因子,transwell小室侵袭实验检测FasL处理后胃癌细胞的侵袭能力;免疫印迹检测信号通路激活状态及相应的抑制效应。结果 FasL可以诱导AGS细胞株出现EMT表型,并可促进胃癌细胞的侵袭转移能力。同时该过程中出现ERK1/2信号通路的激活,而抑制ERK1/2信号通路,可以抑制FasL诱导EMT及提高肿瘤侵袭能力的作用。胃癌组织中相应分子生物学标记的表达变化符合EMT的发生。结论 Fas信号通路能够激活ERK1/2通路诱导EMT的发生,并且能通过该机制增强胃癌细胞AGS的活动能力。     

Fas通路相关分子在结直肠癌中的表达及其临床意义

目的研究在Fas通路中参与调控诱导EMT的相关分子在结直肠癌临床样本中的表达水平及其与肿瘤的临床病理指标、肿瘤预后之间的关系,并以此为基础探索结直肠癌中Fas诱导EMT的可能机制。方法采用免疫印迹、免疫组化技术检测结直肠癌患者组织标本中FasL、P—CSK313、Snail和β—catenin的表达水平,并统计其表达水平与患者临床病理指标之间的关系。将临床标本根据这四种分子表达水平的高低分为EMT表型和非EMT表型,统计分析该分型与肿瘤分期及患者预后之间是否相关。分析P—GSK313、Snail和β—catenin之间的两两相关性,以探索结直肠癌中Fas诱导EMT的可能机制。结果对人结直肠癌标本进行评分后发现,FasL、P—GSK3β、Snail和β-catenin的表达水平与肿瘤分期呈正相关。与非EMT表型相比,EMT表型的患者肿瘤分期较高且预后较差。相关性分析显示,P—GSK313、Snail和p—catenin在结直肠癌组织中的表达水平两两相关。结论P—GSKaβ、Snail和β—catenin可能参与调控Fas诱导的EMT过程,从而促进结直肠癌转移。     

Fas信号通路促进胃癌细胞的侵袭及转移

目的探讨Fas通路的非凋亡信号在胃癌细胞株AGS中促进增殖转移的作用。方法流式细胞仪检测AGS细胞表面Fas及FasL表达情况;根据FasL不同作用浓度梯度,绘制细胞生长曲线;shRNA沉默AGS的Fas表达后,或NOK-1拮抗FasL后,利用transwell实验检测AGS的侵袭能力;免疫组化检测FasL表达与E-cadherin关系。结果低浓度的FasL（12.5ng/ml）刺激对细胞增殖无明显抑制作用,反而能提高肿瘤细胞的侵袭能力。在沉默Fas受体或经NOK-1拮抗FasL后,该效应减弱。FasL和E-cadherin在胃癌组织中的表达呈负性相关。结论低剂量的FasL不能诱导AGS产生凋亡效应,反而通过Fas信号通路促进其侵袭转移能力。     

糖化血红蛋白在贫血中的意义

糖化血红蛋白在糖尿病人增高,为糖尿病临床研究中一重要手段。但血红蛋白的糖化不仅取决于血糖浓度,也与红细胞生成有无抑制及寿命之长短有关。作者等以比色法观察98例各种贫血患者糖化血红血白(GHb)。各种贫血 GHb 与正常对照有显著差异,均高于正常。各种贫血之间 GHb 无显著差异,与糖尿病间亦无差异。作者认为 GHb 比色法测定,对判定贫血发生之机制无意义,糖尿病人有贫血者,其 GHb 之高低,对解释病情控制好坏应慎重,需排除血红蛋白对结果的影响。     

中国中老年人午睡时长与抑郁症状的关联——基于CHARLS数据分析

目的 探究午睡时长与中老年人抑郁症状发生的关联。方法 将2011年中国健康与养老追踪调查(China Health and Retirement Longitudinal Study, CHARLS)调查的45岁及以上的中老年人信息作为基线数据,随访该队列至2018年,采用COX比例风险模型分析不同午睡时长与中老年人抑郁症状发生的关联。结果 该队列随访期间抑郁症状的发生率为6.94%。COX比例风险模型结果表明,午睡≥90 min/d与抑郁症状发生高风险相关(HR=1.14;95%CI:1.02～1.29);亚组分析结果显示,男性午睡时长≥90 min/d(HR=1.30;95%CI:1.11～1.53)、45～64岁组午睡时长在60～89 min/d(HR=1.14;95%CI:1.01～1.29)及≥90 min/d(HR=1.17;95%CI:1.02～1.34)与抑郁症状发生高风险相关。结论 午睡时长与中老年人抑郁症状发生相关联,特别是在男性及中年人群体中。     

Fas通路的激活促进结肠癌细胞迁移侵袭

目的探讨Fas通路激活对结肠癌细胞SW480和DLD1产生的非凋亡效应。方法流式细胞学检测结肠癌SW480及DLD1细胞系的Fas、FasL、抗凋亡蛋白c-FLIP、Bcl-2、Bcl-xl、XIAP等在细胞膜上的表达水平;对结肠癌SW480及DLD1细胞系予以梯度浓度（0ng/ml、12.5ng/ml、25ng/ml、50ng/ml）的FasL刺激,计数并比较各组细胞的增殖速率变化;对结肠癌SW480及DLD1细胞系予以低剂量FasL处理,分别对实验组和对照组进行细胞增殖速率及迁移侵袭能力测试,探讨低剂量FasL刺激对结肠癌细胞活力的影响;稳定敲除SW480和DLD1细胞的Fas基因表达,重复上述实验,以明确低剂量FasL刺激对结肠癌细胞活力的影响是否依赖于Fas通路的激活。结果 SW480及DLD1细胞系中均可检测到中等程度的Fas表达及抗凋亡蛋白FLIP、Bcl-2的表达,未检测到FasL表达,在SW480中可测到Bcl-xl表达;低剂量FasL不影响结肠癌SW480和DLD1细胞的增殖速率,但可促进两种细胞的迁移侵袭能力;稳定敲除Fas基因后,低剂量FasL对结肠癌细胞迁移侵袭能力的促进作用受到抑制。结论低剂量FasL可激活Fas通路的非凋亡途径从而增强结肠癌SW480和DLD1细胞的迁移侵袭能力。     

盐酸溴己新雾化气溶胶浓度测定及空气动力学粒径分布分析

目的 建立液相色谱-三重四极杆串联质谱法(LC-MS/MS)测定盐酸溴己新雾化气溶胶浓度和分析其粒径分布,并比较注射器采样法及撞击器采样法的差异。方法 采用BEH C₁₈色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.7 μm)分离,流动相为体积分数0.1%甲酸水和乙腈,分析时长为2 min,正离子模式下多反应监测测定。同时,对液质联用方法进行了方法学验证,采用该方法对注射器采样法及撞击器采样法采样获得的雾化气溶胶样本进行浓度测定,并基于撞击器采样法计算气溶胶的空气动力学粒径分布。结果 建立的方法专属性、线性、定量限、精密度、准确度、提取回收率和稳定性良好。注射器采样法下总体气溶胶平均药物浓度为17.2 mg·m^-3,撞击器采样法下则为16.8 mg·m^-3。基于撞击器采样法分析得到雾化时间在5 和45 min的气溶胶平均质量中值空气动力学粒径(MMAD)分别为2.21 和2.24 μm,几何标准偏差(GSD)分别为2.76和2.75。结论 本测定方法灵敏度高,精密度好,适用于盐酸溴己新雾化气溶胶浓度测定和粒径分布分析。两种样本采集方式的浓度测定结果基本一致,结果可为吸入制剂雾化气溶胶分析提供参考。     

Fas通路通过激活ERK1/2通路在结肠癌细胞中诱导上皮-间质转化

  目的   探索Fas通路在结肠癌细胞中诱导上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition, EMT)的分子机制。   方法   分别对结肠癌细胞SW480及DLD1予以低剂量FasL(12.5 ng/mL)处理。作用3d后分别提取实验组和对照组细胞的总蛋白、总RNA, 并进行Western blot、RT-PCR检测, 分析FasL作用下结肠癌细胞的上皮标记物、间质标记物以及EMT相关的转录因子的表达状况。在低剂量FasL作用3d后行免疫荧光检测, 观察EMT相关转录因子在细胞内的分布情况。建立稳定敲除Snail及Twist的结肠癌细胞系, 再予以低剂量FasL刺激, 采用Western blot、RT-PCR检测是否发生EMT过程。对结肠癌细胞SW480予以低剂量FasL(12.5 ng/mL)处理后, 通过Western blot检测实验组和对照组细胞ERK1/2通路及p38通路的激活状况。对SW480细胞进行信号通路抑制剂的预处理, 再予以低剂量FasL刺激, 采用Western blot、RT-PCR检测是否发生EMT过程, 从而探索Fas通路诱导EMT的可能机制。   结果   低剂量FasL可使结肠癌SW480和DLD1细胞的上皮标记物表达下调, 间质标记物表达上调, EMT相关转录因子在细胞核周聚集, 细胞发生梭形改变, 提示发生EMT。而将结肠癌细胞的Snail或Twist基因敲除后, FasL的上述诱导作用明显减弱。低剂量FasL可激活结肠癌细胞的ERK1/2通路激活, 而ERK抑制剂可减弱FasL诱导的EMT过程   结论   Fas通路可能通过激活ERK1/2通路诱导结肠癌细胞发生EMT。      

奥沙利铂联合亚叶酸钙及5-氟尿嘧啶治疗晚期大肠癌的临床观察

目的观察奥沙利铂(L-OHP)联合亚叶酸钙(CF)及5-氟尿嘧啶(5-Fu)治疗晚期大肠癌的疗效及不良反应。方法将我院2002年10月~2005年10月收治的65例晚期大肠癌,随机分为A组和B组,A组奥沙利铂130mg/m2静脉滴注2小时,第1天;亚叶酸钙200mg/m2持续静滴24小时,第1~5天;5-氟尿嘧啶500mg/m2持续静滴24小时,第1~5天;每3周重复。B组羟基喜树碱(HCPT)8mg/m2静脉滴注,第1~5天;亚叶酸钙200mg/m2,静脉滴注2小时,第1~5天;5-氟尿嘧啶500mg/m2持续静滴24小时,第1~5天,每3周重复。所有病例均接受2周期化疗。结果A组CR2例,PR12例,SD11例,DD8例,总有效率42.4%,B组CR1例,PR5例,SD16例,PD10例,总有效率18.8%,A组的主要不良反应是周围神经炎及恶心呕吐、骨髓抑制。结论奥沙利铂联合亚叶酸钙及5-氟尿嘧啶疗效优于羟基喜树碱、亚叶酸钙、5-氟尿嘧啶联合化疗,不良反应轻,值得临床推广。