醛糖还原酶抑制剂影响PDGF-BB促系膜细胞增殖作用的机制研究

目的探讨醛糖还原酶抑制剂（ARI）影响血小板源性生长因子-BB（PDGF-BB）促体外培养大鼠系膜细胞（MsC）增殖作用的机制。方法用四甲基偶氮唑盐（MTT）比色法检测细胞增殖,流式细胞术分析细胞周期,对比PDGF-BB刺激MsC生长速度与MAPK3条信号通路（ERK、JNK及p38）抑制剂及PI3K信号通路抑制剂对PDGF促MsC增殖作用的影响。用半定量RT-PCR检测醛糖还原酶抑制剂（ARI）对MsC合成内源性PDGF-B链的影响。蛋白印迹法观察ARI对PDGF引起的信号通路磷酸化的影响。结果（1）ERK抑制剂U0126、JNK抑制剂SP600125及PI3K抑制剂LY294002能明显抑制PDGF对MsC的促增殖作用（P〈0.05）,而p38抑制剂SB203580不能抑制PDGF的促MsC增殖作用;（2）ARI在转录水平对MsC合成内源性PDGF-B链没有明显影响。（3）PDGF刺激MsC后引起ERK、JNK及PI3K/Akt信号通路的磷酸化,而ARI仅能抑制JNK及PI3K/Akt两条信号通路的磷酸化（P〈0.05）,对ERK信号通路的磷酸化没有明显影响。结论ARI部分抑制PDGF促MsC增殖作用可能与其影响JNK和PI3K/Akt信号通路活化有关。     

miRNAs在乳腺癌侵袭与转移中作用的研究进展

乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一,并常于后期侵袭转移,它的转移涉及诸多因素,并有多种基因及其蛋白质产物参与该过程发生.近年相关研究发现,miRNA能够在转录水平调节基因的表达,进而影响乳腺癌细胞的侵袭和转移,因此对影响乳腺癌侵袭和转移的miRNA的研究成为乳腺癌的研究热点[1].     

小鼠子宫内膜原代上皮细胞及间质细胞的优化分离和培养

目的:建立一种获得高纯度、高活性的子宫内膜上皮细胞和间质细胞的优化分离和体外培养的方法,提供研究子宫内膜相关疾病的理想体外模型.方法:双酶消化、过滤、离心法分离和培养小鼠子宫内膜上皮细胞和间质细胞.用光镜观察培养细胞;双重免疫荧光标记法检测上皮细胞角蛋白(CK)和间质细胞波形蛋白(Vim)的表达;MTT法测定间质细胞的生长曲线.结果:培养24h,小鼠子宫内膜上皮细胞呈多边形、铺路石样生长,CK免疫荧光阳性,纯度达95％以上.正常原代小鼠子宫内膜上皮细胞不能传代,培养5～6天后细胞逐渐走向衰老.间质细胞呈长梭形、漩涡状生长,Vim免疫荧光阳性,纯度达95％以上.原代间质细胞可有限传代,3代内细胞形态无改变.传代间质细胞第3～6天为细胞对数生长期,生长曲线呈“S”形,倍增时间约为56.97h.结论:双酶消化、过滤、离心法可获得高纯度、高活性的具有典型的生物学细胞特性的子宫内膜上皮细胞和间质细胞.     

人正常子宫内膜原代腺上皮细胞的优化分离和培养

目的 优化人正常子宫内膜腺上皮细胞分离和原代培养的方法,提供子宫内膜相关疾病研究的体外细胞模型。方法 采用酶消化、筛网过滤、离心的方法体外分离和培养人子宫内膜腺上皮与间质细胞。腺上皮细胞鉴定采用光学显微镜下观察细胞形态;免疫细胞荧光及免疫细胞化学法检测上皮细胞角蛋白(CK)和间质细胞波形蛋白(Vim)的表达。结果 经诊刮获得的18份标本中有17份分离培养成功;细胞形态符合腺上皮细胞特征,CK免疫荧光及免疫化学染色阳性,Vim染色阴性,纯度达90%以上;正常原代人子宫内膜腺上皮细胞不能传代,培养5～6d后细胞逐渐衰老。结论 改良后的原代培养方法取材简单,克服了污染问题,可获得高纯度及足够数量的人正常子宫内膜腺上皮细胞作为体外实验模型。