纳米细菌对肾小管上皮细胞损伤在肾结石形成中作用的研究

目的　探究纳米细菌（NB）损伤人肾小管上皮细胞（HK-2细胞）并导致晶体滞留的机制。方法　于2016年10月—2017年10月在石河子大学医学院第一附属医院泌尿外科收集临床确诊肾结石且未应用药物或手术治疗患者的尿液培养NB。实验分为5组：对照组（胎牛血清、1640培养液+HK-2细胞）、NB组（NB菌液、胎牛血清、1640培养液+HK-2细胞）、一水草酸钙（COM）组（5 mmol/L COM悬液、胎牛血清、1640培养液+HK-2细胞）、纳米级羟基磷灰石（nHAP）组（300 mg/L nHAP、胎牛血清、1640培养液+HK-2细胞）和四环素干扰组（5 mg/L四环素、NB菌液、胎牛血清、1640培养液+HK-2细胞）。共同培养6、12、24 h后,采用光学显微镜及透射电子显微镜观察HK-2细胞的形态学变化;超声粉碎细胞后检测Na+/K+ ATP酶和Ca2+/Mg2+ ATP酶活性;检测培养液中乳酸脱氢酶（LDH）、过氧化氢（H2O2）和丙二醛（MDA）含量;用激光扫描共聚焦显微镜观察加入COM晶体后各组细胞的晶体黏附情况。结果　苏木素-伊红（HE）染色和透射电子显微镜结果可见,nHAP组和四环素干扰组HK-2细胞的损伤程度明显低于NB组。共同培养12、24 h后,NB组和COM组Na+/K+ ATP酶和Ca2+/Mg2+ ATP酶活性均低于对照组,H2O2含量均高于对照组（P<0.05）,nHAP组Ca2+/Mg2+ ATP酶活性均低于对照组（P<0.05）,四环素干扰组Na+/K+ ATP酶和Ca2+/Mg2+ ATP酶活性均高于NB组（P<0.05）。共同培养6、12、24 h后,NB组和COM组MDA含量均高于对照组（P<0.05）,四环素干扰组MDA含量均低于NB组（P<0.05）,COM组LDH含量均高于对照组（P<0.05）,nHAP组、四环素干扰组LDH含量均低于COM组（P<0.05）。结论　NB可能通过诱导脂质过氧化反应损伤HK-2细胞,损伤程度和晶体黏附量与NB作用时间呈正比。四环素可以抑制NB对HK-2细胞的损伤并减少损伤后的晶体滞留。     

SCL基因重组慢病毒上调高糖环境下Cajal间质细胞中c-kit蛋白表达

目的：探讨含人干细胞白血病(stem cell leukemia,SCL)基因重组慢病毒对高糖环境下受损Cajal间质细胞 (interstitial cells of Cajal,ICC)中酪氨酸激酶受体(c-kit)蛋白表达的影响。方法：分离ICC,培养24 h贴壁,经倒置显 微镜、免疫荧光鉴定后,将ICC细胞分为对照组、高糖组,对照组加入含5 mmol/L葡萄糖的培养基,高糖组加入含 20 mmol/L葡萄糖的培养基,培养48 h后;对照组不变,高糖组分成空白组、空慢病毒组和实验组3个亚组,3组分别 加入PBS、空慢病毒和含SCL基因重组慢病毒5 mmol/L葡萄糖的培养基,继续培养24和48 h,采用Western印迹法检测 两个时段各组中ICC中c-kit 蛋白表达情况。结果：24或48 h后,空白组、空慢病毒组中ICC的c-kit蛋白表达水平均明显 低于对照组,实验组中ICC中c-kit蛋白的表达水平明显均高于空白组和空慢病毒组,但是仍低于对照组(均P<0.05)。 结论：SCL基因重组慢病毒可以上调高糖环境下功能受损ICC中c-kit蛋白表达量。     

肾结石两种造模方式血、尿生化的动态比对研究

目的构建两种大鼠肾结石疾病模型,为肾结石病因学的探索提供支持。方法将60只大鼠随机分为纳米细菌(Nanobacteria,NB)组(NB组,尾静脉注射1.2 mL NB悬液,30只)和乙二醇组(EG组,1.25%乙二醇饮水+1%氯化铵2 mL/d灌胃,灌胃持续时间为2 w,30只),实验周期为10 w,每周每组各处死大鼠3只,处死前采集大鼠血、尿标本,肾脏标本。结果两组大鼠一般情况差异显著,肾体比差异不显著;病理结晶数差异不显著;纳米细菌组与乙二醇组相比,血钙、血镁、血磷、肌酐、尿酸、尿素的差异不显著(P 0.05);尿钙、尿pH、尿比重、24 h尿量的差异不显著(P 0.05)。结论两种造模方式,就研究指标来看,差异无显著性,表明了纳米细菌造模的可行性。相较于传统的乙二醇造模方式,NB造模具有更加温和的优点,且NB来源于肾结石本身,这一造模方式与人体肾结石形成更加相似,更有利于肾结石成因的研究。     

Claudin-14在纳米细菌肾结石形成中表达的动态研究

目的本实验通过尾静脉注射用肾结石患者尿液培养的纳米细菌构建肾结石模型检测肾脏组织中Claudin-14(紧密连接蛋白-14)蛋白的表达情况,初步探讨Claudin-14在纳米细菌形成结石中的作用。方法 60只Wistar雄性大鼠随机分为正常对照组和纳米细菌组,每组30只。正常对照组Wistar雄性大鼠一次性给予尾静脉注射0.9%氯化钠注射液1.2mL,纳米细菌组Wistar雄性大鼠一次性给予尾静脉注射等量的纳米细菌悬浊液。两组Wistar雄性大鼠注射后的10周内每周处死3只。每周采用病理组织学方法评估每组3只Wistar雄性大鼠成石情况,并通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)、免疫组化方法连续10周检测紧密连接蛋白-14(Claudin-14)mRNA和蛋白的表达。结果 (1)病理组织学检查结果:第4周以后纳米细菌组Wistar雄性大鼠肾小管内发现晶体颗粒,且主要分布于近、远曲小管,1～10周对照组Wistar雄性大鼠未见晶颗粒。(2)实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)和免疫组化结果:3周内Claudin-14mRNA和蛋白在纳米细菌组中几乎未见表达,从第4周起Claudin-14mRNA和蛋白在纳米细菌组中表达水平增高并且对照组明显增高,1～10周间Claudin-14mRNA和蛋白在对照组中几乎未见表达。结论 Claudin-14表达的增加可能在纳米细菌形成结石中起重要作用。     

纳米细菌肾结石模型血、尿生化的动态观测

目的 构建纳米细菌Wistar雄性大鼠肾结石模型,动态监测血、尿生化各项指标,旨在为进一步研究纳米细菌在肾结石发生发展过程中所起的作用,提供数据支持,进而为肾结石病因学的下一步探索提供新思路。方法 将60只大鼠随机分为纳米细菌组和空白对照组,每组30只。纳米细菌组给予尾静脉注射1.2 ml NB悬液,空白对照组给予尾静脉注射1.2 ml生理盐水,实验周期为10周,每周每组各处死大鼠3只,处死前采集大鼠血、尿标本,供生化分析,并取两侧鲜活肾脏标本,用于病理结晶情况检测及计算肾体比。结果 自第8周开始,纳米细菌组肾体比值大于空白对照组,差异有统计学意义（P＜0.05）。截至第10周末,纳米细菌组大鼠肾脏晶体阳性11只,空白对照组均为阴性,纳米细菌组大鼠肾脏晶体阳性率高于空白对照组,差异有统计学意义（P＜0.05）。与空白对照组相比,纳米细菌组第4~8周血肌酐、第3~8周血尿酸、第3~9周尿素氮及尿钙水平均升高,第8周纳米细菌组尿pH高于空白对照组差,第6~7周纳米细菌组血钙高于空白对照组,差异均有统计学意义（P＜0.05）。结论 肾体比、结晶阳性率、血肌酐、血尿酸、血尿素、尿钙等重要指标的有效升高,均显示纳米细菌Wistar雄性大鼠肾结石实验模型的成功制备,这为进一步揭示NB在结石形成过程中所起的作用以及后续对肾结石病因学的进一步研究提供了良好的实验基础与数据支持。     

缝隙连接蛋白43在泌尿系统疾病研究进展

连接蛋白(Connexin,Cx)是缝隙连接(Gap jun-ction,GJ)的基本组成单元,连接蛋白43(Connexin-43,Cx43)是表达最普遍和研究最多的.分子较小的一些物质能够在缝隙连接中自由地流动,这样就构成了间隙连接的细胞间通讯功能(Gap junction in-tercellular commu...     

缝隙连接蛋白-43在糖尿病膀胱豚鼠模型中的表达及意义

目的 探讨缝隙连接蛋白-43（Cx43）在豚鼠糖尿病膀胱（DCP）中的表达情况及其意义。方法 50只豚鼠 随机分为DCP组（n=30）、枸橼酸钠组（n=10）、空白对照组（n=10）,DCP组豚鼠单次腹腔注射链脲佐菌素建立糖尿病 模型,利用尿动力学检测筛选出糖尿病膀胱豚鼠;枸橼酸钠组豚鼠单次腹腔注射枸橼酸钠溶液;空白对照组豚鼠单 次腹腔注射生理盐水;通过免疫组织化学染色法观察Cx43在3组膀胱逼尿肌中的定位及分布,采用Western blot技术 检测3组膀胱逼尿肌组织内Cx43蛋白的表达。结果 免疫组织化学染色结果显示,DCP组（筛选出DCP豚鼠共10只 纳入研究）Cx43特异性染色强度较其他2组明显降低,枸橼酸钠组和空白对照组阳性染色强度对比无明显差异。 Western blot检测发现,DCP组膀胱组织Cx43蛋白表达（0.52±0.02）低于空白对照组（0.68±0.02）和枸橼酸钠组（0.70± 0.03）（P＜0.01）,空白对照组与枸橼酸钠组膀胱组织Cx43蛋白表达差异无统计学意义（P＞0.05）。结论 逼尿肌组 织Cx43的表达降低在糖尿病膀胱的形成过程中起重要作用,可能成为研究糖尿病膀胱发病机制的新出发点。     

甲状腺功能亢进与男性勃起功能障碍风险的研究进展

研究发现甲状腺功能亢进(简称甲亢)可损害男性勃起功能。本文将对甲亢与勃起功能障碍(ED)之间的关系进行系统综述。经数据库搜索后，多个研究报道了甲亢可增加男性患者罹患ED的风险。ED在甲亢人群中患病率为3.05%～85%,而一般人群ED的患病率为2.16%～33.8%。也有研究指出，甲亢患者经治疗并且甲状腺功能恢复正常后，其勃起功能得到改善[治疗前后国际勃起功能指数：22.1±6.9比25.2±5.1]。根据目前报道，甲亢增加ED风险的发病机制可能与下丘脑-垂体-性腺轴功能障碍、性激素水平紊乱、甲状腺受体表达异常、社会心理障碍(如抑郁、焦虑、易怒)等因素有关。然而目前缺乏大样本队列研究来佐证甲亢与ED发病的关系，因此未来需要更多研究来证实这一临床发现并进一步探讨其致病机制。本综述提示临床医生应该知晓甲亢对男性勃起功能产生的不利影响。在接诊伴有甲亢症状的ED患者时，临床医生除对其进行性激素检测外还应检查甲状腺激素水平。此外，当ED患者的常规检查没有阳性发现时，应对其甲状腺激素水平进行评估。