黄芪甲苷基于PI3K/Akt/Bcl-2 信号通路对PC12 细胞OGD/R 损伤的保护机制研究

目的：探究黄芪甲苷（astragaloside IV,AS-IV）对大鼠嗜铬细胞瘤（pheochromocytoma 12,PC12）细胞缺氧缺糖复供（oxygen deprivation reoxygenation,OGD/R）损伤的保护作用及基于磷脂酰肌醇3 激酶（phosphatidylinositol 3 kinase,PI3K）/ 蛋白激酶B（protein kinase B,PKB,又称Akt）及B 细胞淋巴瘤-2 蛋白（B-cell lymphoma-2,Bcl-2） PI3K/Akt/Bcl-2 信号通路的机制研究。方法：体外培养 PC12 细胞,细胞随机分为空白对照组、模型组（OGD/R）,尼莫地平阳性对照组（5 μmol·L-1）和黄芪甲苷组（1.00、0.10、0.01 μmol·L-1）,除空白组外其余各组均建立体外PC12 细胞OGD/R 模型。CCK-8 试剂盒法检测PC12 细胞存活率;乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase,LDH）试剂盒法测定乳酸脱氢酶的漏出量;采用Hoechst33342 和碘化丙啶（propidium iodide,PI） 双染法检测各组细胞凋亡与坏死情况;Western blot 检测各组细胞Akt、p-Akt、Bcl-2、Bcl-2 相关 X 蛋白（Bcl-2 associated X protein,Bax）和含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-3 （cysteinyl aspartate specific proteinase-3,Caspase-3）的蛋白表达情况。结果：黄芪甲苷提高PC12 细胞OGD/R 损伤的细胞存活率,降低LDH 漏出量和细胞凋亡。黄芪甲苷浓度依赖性上调p-Akt/Akt、Bcl-2 的蛋白表达和下调促凋亡蛋白Bax、Caspase-3 的表达。PI3K/Akt 通路的抑制剂LY2940002 能抑制黄芪甲苷对OGD/R 损伤的PC12 细胞中凋亡相关蛋白的影响。结论：黄芪甲苷对OGD/R 损伤的PC12 细胞具有保护作用,且其保护作用机制可能与PI3K/Akt/Bcl-2 信号通路有关。     

脉络宁对MCAO 大鼠的神经保护作用及其抗氧化机制研究

目的：探讨脉络宁对大脑中动脉栓塞（middle cerebral artery occlusion,MCAO）大鼠的抗氧化作用机制。方法：将18 只成年SD 大鼠随机分成假手术组（control）、模型组（MCAO）、脉络宁组（mailuoning）,每组6 只。采用线栓法建立大鼠MCAO 模型,缺血2 h 再灌注24 h。2% 2,3,5- 氯化三苯基四氮唑（2,3,5-triphenyltetrazolium chloride,TTC）染液测定大鼠脑梗死体积,荧光法测定活性氧（reactive oxygen species,ROS）的含量,吸光度法测定脑组织中丙二醛（malondialdehyde,MDA）含量以及还原型谷胱甘肽（glutathione,GSH）,Western Blot 法测定半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3（cysteinyl aspartate specific proteinase-3,caspase-3）、B淋巴细胞瘤-2（B-cell lymphoma-2,Bcl-2）、Bcl-2 相关X 蛋白（Bcl-2 associated X protein,Bax）表达量。结果：脉络宁能显著降低MCAO大鼠神经功能损伤,减少脑梗死体积;能够抑制脑组织中ROS含量以及MDA的生成,显著提高GSH 水平;能够抑制Bax、caspase-3 的表达,并增加Bcl-2 的表达。结论：脉络宁对MCAO 大鼠的保护作用可能与其抑制氧化应激及细胞凋亡有关。