小鼠IFN-γ基因的克隆及其分子佐剂作用的研究

目的通过融合表达小鼠IFN-γ（MuIFN-γ与猪脑心肌炎病毒（EMCV）结构蛋白VP1研究MuIFN-γ的分子佐剂作用。方法通过RT-PCR克隆IFN-γ的成熟肽基因，从pGEX-6p-1／vp1中亚克隆猪脑心肌炎病毒（EMCV）抗原基因VP1，分别构建原核表达菌株pET32-a／VP1／Rosetta（DE3）和pET32-a／VP1／MuIFN-γ，将VP1及VP1与MuIFN-γ在宿主菌Rosetta（DE3）中进行表达与共表达。将表达的VP1及MuIFN—γ／VP1蛋白分别免疫BALB／c小鼠。每次免疫2周后采血，分离血清，利用ELISA测定抗体效价。结果表达的VP1蛋白分子量为60kD，共表达蛋白MuIFN—γ/VP1分子量为73kD，VP1及MuIFN—γ／VP1蛋白免疫小鼠测定的抗体效价分别为1：32000和1：128000。结论表达的VP1蛋白具有良好的免疫原性，可刺激免疫小鼠产生明显的体液免疫反应。MuIFN—γ/VP1免疫小鼠后产生的佐剂效果要强于弗氏佐剂。MuIFN-γ/VP1蛋白能增强小鼠的体液免疫水平，MuIFN—γ具有一定的分子佐剂效应。