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抗HIV-1 gp120单克隆抗体的制备及其初步应用 总被引:2,自引:1,他引:2
目的:制备抗HIV-1 gp120单克隆抗体(mAb),并建立一种可用于检测gp120的ELISA法。方法:采用基因工程抗原HIV-1gp120免疫BALB/c小鼠,通过B细胞杂交瘤技术制备抗HIV-1gp120的mAb。用ELISA法答定mAb的Ig亚类、效价及特异性。用饱和硫酸铵(SAS)纯化mAb,并用HRP标记后建立双mAb夹心ELISA法。结果:筛选出10株稳定分泌抗HIV-1gp120 mAb的杂交瘤细胞株,9株为IgG,其中4株的腹水效价为32X10~256X10所得mAb与HIV-1gp41、HIV-1p24及HIV一2gp36Ag均无交义反应,仅与HIV-1gp120产生特异性反应。用mAb 6H9和9H12,建立了双夹心ELISA法,检测gp120抗原的灵敏度是10μg/L。结论:获得10株特异性强、效价高的机HIV-1gp120的mAb,并建立了灵敏度良好的双mAb夹心ELISA法. 相似文献
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用杂交瘤技术制备了12株稳定地分泌抗人精子单克隆抗体的杂交瘤细胞株,用间接免疫荧光法观察这些抗体分别结合到精子不同部位,有7个抗体使精子产生头—头凝集或尾—尾凝集,有4个抗体使精子制动,只有1个抗体与淋巴细胞有交叉反应。测定了10个单克隆抗体的免疫球蛋白亚类,7个属于IgG,13个属于IgM。 相似文献
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抗HIV p24和人A型红细胞双特异性单克隆抗体的研制 总被引:4,自引:0,他引:4
目的:制备抗HIV p24和人A型红细胞双特异性单抗(mAb),并建立检测HIV p24的间接血凝试验。方法:将分泌抗HIV p2d mAb的杂交瘤株2-E4和分泌抗人A型红细胞mAb的杂交瘤株S2,分别用8-Ag和5-BrdU驯化,使成为HAT敏感株。将两者常规融合,筛选分泌双特异性mAb的杂交-杂交瘤株。然后制备并纯化双特异性mAb,用其建立的间接血凝法检测p24。结果:共获得6株杂交-杂交瘤细胞株,以其分泌的双特异性mAb建立了检测HIV p24的间接血凝法,敏感性可达400ng/L。结论:获得可稳定分泌双特异性mAb的杂交-杂交瘤株,并用纯化的双特异性mAb建立了快速检测HIV p24的间接血凝法。 相似文献
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小鼠IL-12单链融合基因真核表达质粒构建及其肿瘤基因治疗初探 总被引:2,自引:0,他引:2
目的 构建小鼠IL 12单链融合基因 (msIL 12 ) ,进行基因治疗初探。方法 用RT PCR法从小鼠腹腔巨噬细胞总RNA分别获取p4 0cDNA和p35cDNA ,2次PCR引入linker后 ,依次克隆入pcDNA3质粒 ,构建成msIL 12真核表达质粒 (pmsIL 12 ) ;用DEAE dextran法将PEG纯化的pmsIL 12转染COS 7细胞 ,用ELISA法检测其培养上清 (转染上清 )IL 12蛋白含量。皮内注射PEG纯化的pmsIL 12 ,用MTT法检测其对正常小鼠脾细胞NK活性的影响 ,观察其对荷H2 2腹水型肝癌细胞瘤小鼠生存期的影响。结果 所得p35cDNA序列与GenBank登录号M86 6 72完全一致 ;所得IL 12p4 0cDNA序列与GenBank登录号AH0 0 4 85 9报道完全相同 ,除第 10 0 0位碱基是G而不是A(但所编码氨基酸相同 ,都是丝氨酸 )外也与GenBank登录号M86 6 71报道相同。成功构建了小鼠IL 12单链融合基因真核表达质粒pmsIL 12 ,其转染COS 7细胞后的转染上清IL 12蛋白含量达 (2 .5 5± 0 .6 0 )ng ml。皮内注射pmsIL 12后 ,使正常小鼠脾细胞NK活性显著增强 (P <0 .0 1) ,使荷H2 2肝癌细胞瘤小鼠的生存期明显延长(P <0 .0 5 )。结论 构建了小鼠IL 12单链融合基因的真核表达质粒 ,可用于基因治疗研究。 相似文献
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对56例未经治疗的急性淋巴细胞白血病(ALL)患者外周血淋巴细胞进行了绵羊红细胞(SE)与猴红细胞(RhE)的自然玫瑰花形成及 EA(抗体包被牛红细胞)和 EAC(抗体和补体包被的牛红细胞)玫瑰花形成的研究。在42例儿童病例中19例的淋巴母细胞百分率>50%,其中4例 E一玫瑰花成花细胞(E-RFC)>49%,被归为 T 细胞型白血病,其余15例为 N 细胞型(E-RFC<30%;EA-和 EAC-RFC<10%)。外周血淋巴母细胞低于4.0%者23例未能分类。成年病例中28.5%为 T-细胞型,69.2%为 N-细胞型,1例成人患者无 E-玫瑰花形成,而 EA 和 EAC 玫瑰花分别为40%和31%,被划为 B 型。N-ALL 儿童患者的 RhE-RFC 高于 T-ALL,据此我们认为 RhE 玫瑰花形成可能在 ALL 免疫学分型中具有某些特别意义。 相似文献
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模拟mIL-18天然生成真核表达体系的构建及生物活性初探 总被引:2,自引:0,他引:2
目的:构建模拟小鼠IL-18(mIL-18)天然生成真核表达体系,并探讨其与人IL-2(hIL-2)真核表达载体pVR1012-hIL-2(phIL-2)体内外共转染对细胞免疫功能的影响。方法:分别构建小鼠IL-18前体(mproIL-18)和小鼠IL-1β转换酶(mICE)的真核表达载体pVR1012-mpmIL-18(pmproIL-18)和pEGFP-N1-mICE(pmICE)。两者单独或共转染COS-7细胞,分别在mRNA和蛋白水平检测IL-18的表达;将pmproIL-18、pmICE和phIL-23种真核表达载体分别通过体内、外共转染,初步检测其生物学活性。结果:pmproIL-18及pmICE构建正确,分别转染COS-7细胞后能检测到相应mRNA表达。在pmproIL-18单独或pmproIL-18/pmICE共转染的COS-7细胞中能检测到前体和成熟2种不同形式的mIL-18蛋白表达,并且mIL-18能分泌到上清;所分泌的mIL-18与hIL-2体外联合作用可增强小鼠脾细胞增殖能力。pmproIL-18、pmICE和phIL-23种真核表达载体联合肌肉注射的小鼠脾细胞体外杀伤同基因型肿瘤细胞的能力显著提高。结论:构建的模拟mIL-18天然生成的真核表达体系(pmproIL-18/pmICE)与phiL-2共转染有可能用于肿瘤的基因治疗。 相似文献