BN-PAGE在棕色脂肪线粒体呼吸链超级复合体分析中的应用

目的 建立一种敏感、特异的棕色脂肪线粒体超级复合体(supercomplexes, SCs)分离及活性检测方法,有助于了解棕色脂肪线粒体的功能。方法 分离并纯化小鼠棕色脂肪线粒体。采用蓝色非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(blue native polya-crylamide gel electrophoresis, BN-PAGE)分离不同大小的线粒体SCs。经考马斯亮蓝染色和免疫印迹分析各组分的表达情况。将凝胶置于不同的底物液孵育,根据显色反应确定线粒体复合物的酶活性。结果 成功提取棕色脂肪线粒体。考马斯亮蓝染色和免疫印迹结果显示棕色脂肪线粒体SCs清晰可见,分子量在720～1 236 kD之间,与预期相符。棕色脂肪线粒体SCs在复合物Ⅰ或复合物Ⅱ的底物液中呈紫色,在复合物Ⅳ的底物液中呈棕色。结论 本研究建立的棕色脂肪线粒体SCs分析方法简便易行、结果直观,为肥胖及其相关代谢性疾病的研究提供了实验基础。